DNA倍体分析和癌胚抗原检测在胸腔积液诊断中价值

郑百波

[摘要] 目的 对胸腔积液患者的胸水脱落细胞进行DNA倍体分析和癌胚抗原检测，将两种方法进行比较，评估其诊断价值。方法 选取经过临床确诊的56例胸腔积液患者作为观察组，56例良性胸腔积液患者作为对照组，对胸水脱落细胞进行DNA倍体分析和癌胚抗原检测。结果 DNA倍体分析的特异度为80.36%，灵敏度为83.93%，Youden指数为0.7029；CEA检测的特异度为96.43%，灵敏度为60.71%，Youden指数为0.5714，两种诊断方法在灵敏度和特异度方面差异有统计学意义（P<0.05，P<0.01），而在Youden指数方面差异无统计学意义（P>0.05）。结论 DNA倍体分析检测胸腔积液的灵敏度和特异度更高，如果和CEA联用，诊断价值更高。

[关键词] DNA倍体分析；癌胚抗原；胸腔积液；诊断价值

[中图分类号] R4 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2014）07（b）-0022-02

胸腔积液是一种常见的胸膜病变，其发生原因有很多，但最主要的是结核性和恶性肿瘤[1]。对于胸腔积液的传统诊断方法主要包括依据细胞学检查、细菌学检查以及胸膜活检进行确认[2]。目前DNA倍体分析和癌胚抗原检测被应用到临床，在诊断恶性胸腔积液方面也有较大的临床价值[3]。该研究选取该院2011年1月—2013年1月间收治的患者112例，旨在探讨采用DNA倍体分析和癌胚抗原检测对胸腔积液患者的胸水脱落细胞进行诊断分析，以评估这两种方法的诊断价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取该院收治的患者112例，综合分析患者的病史、影像学资料、各项检查结果，获得最终的诊断结果。将已经确诊的患者随机分成两组，其中实验组56例，均为恶性胸腔积液患者，男27例，女29例，年龄34～75岁，平均47岁，对照组56例，均为良性胸腔积液患者，男24例，女32例，年龄32～77岁，平均50岁，两组一般资料差异无统计学意义，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 DNA倍体分析 选择美国Becton Dick-inson公司生产的流式细胞仪进行检测，DNA倍体分析试剂盒中的A液为细胞膜穿透液，B液为RNA消化酶，C液为PI染液，光源为氩离子激光器，输出功率为15 w，波长为630 nm，保证峰的变异系数（CV）<5%，可以采用鸡血红细胞对其进行调节[4]。主要包括以下几个步骤：①对所有患者均进行胸腔穿刺，从得到的胸水中取出50 mL进行抗凝处理。②将处理之后的胸水采用1 200转离心5 min，留下沉淀舍弃上清液，采用生理盐水进行洗涤和重复离心直至沉淀中出现红细胞。③将红细胞充分溶解，摇匀震荡，并且避光静置10 min后，采用1 200转离心5 min，留下沉淀舍弃上清液。④采用PBS液对沉淀进行1～2次洗涤，采用1 200转离心5 min，留下沉淀舍弃上清液，制成单细胞悬液。⑤从单细胞悬液中取出1 mL，向其中加入250 μL的A液，然后再加入200 μL的B液，在室温条件下进行10 min的孵育。⑥然后向孵育后的单细胞悬液中加入200 μL的冷C液，放到冰箱中进行10 min的避光孵育，并将冰箱温度调至4 ℃。⑦从冰箱中取出细胞悬液，采用300目筛网进行过滤，最后进行上机检测。采用健康人外周血淋巴细胞作为正常二倍体标准对照，选择每例患者的10 000个细胞进行测定，将结果用单参数组方图显示，采用Cell-Quest软件获取细胞信息，采用ModFitLt软件分析实验结果进行数据处理。将被测标本细胞DNA含量峰均道值与对照二倍体峰值之比为记作DNA指数，即DI。若为正常人，其细胞的二倍体DI范围是（1±0.1）；若为患者，在DI>1.1或者DI<0.9且组方图上出现两个相分离的峰时，可以判定其为异倍体，阳性[5]。

1.2.2 癌胚抗原检测 选择德国拜耳公司生产的全自动化学发光分析仪进行检测，测定方法为化学发光免疫法，诊断标准为：癌胚抗原>10 μg/L，则为阳性[6]。

1.3 统计方法

采用 SPSS17.0 统计软件进行数据处理分析，定量资料根据数据的正态分布与否，对两种诊断方法的诊断指数、特异度、阳性预测值、灵敏度和准确度等进行计算，并采用U检验比较诊断指标，采用χ2比较组间阳性率。

2 结果

2.1 胸水DNA倍体分析结果

在试验组中的56例患者，有47例胸水DNA倍体检测为阳性，9例DNA倍体检测为阴性，阳性率为83.93%；在对照组56例中，有11例检测为阳性，45例为阴性，阳性率为19.64%。P=0.324，两组阳性率相比较差异有统计学意义（P﹤0.005，V2=32.16，V=1）。

2.2 胸水CEA检测结果

在试验组中56例患者，有34例为阳性，22例为阴性，阳性率为60.71%；在对照组56例中，有2例为阳性，54例为阴性，阳性率为3.57%。P=0.187，两组阳性率相比较差异有统计学意义（P﹤0.005，V2=28.15，V=1）。

2.3 胸水的DNA倍体分析和癌胚抗原检测诊断试验评价结果

采用胸水DNA倍体分析，灵敏度=[真阳性/（真阳性+假阴性）]×100%=83.93%，特异度=[真阴性/（真阴性+假阳性）]×100%=80.36%，Youden 指数=（灵敏度+特异度）-1=0.7029；采用癌胚抗原检测，灵敏度=[真阳性/（真阳性+假阴性）]×100%=60.71%，特异度=[真阴性/（真阴性+假阳性）]×100%=96.43%，Youden 指数=（灵敏度+特异度）-1=0.5714。由此可见，两种诊断方法在灵敏度和特异度方面差异有统计学意义（P<0.05）；Youden 指数P>0.05。

3 讨论

呼吸内科常见的疾病之一就是胸膜疾病，对于胸腔积液患者，由于肿瘤细胞侵犯胸膜时癌细胞会直接在胸腔内释放肿瘤标志物，如果发生异常，肿瘤标志物已大量吸收入血，则血清内肿瘤标志物的水平将会明显升高[7]，而且胸腔液含量、形成速度及患者体质均影响患者呼吸困难的程度，若积液含量多且形成较快，则患者肺脏功能受到影响，会出现端坐呼吸、呼吸困难加重甚至发绀等[8]。由于以往的诊断方法具有很多缺点，所以我们现在多采用DNA倍体分析和癌胚抗原检测。DNA倍体分析的主要基于如下原理：正常人体细胞含23对染色体，DNA含量稳定，为二倍体，只有当细胞进入分裂期时细胞DNA含量增加，但是肿瘤细胞由于异常增殖，往往使染色体发生突变，染色体的结构和数目发生异常，常形成三倍体和亚倍体等，所以可以对细胞内的染色体进行检测，如果为异倍体，则提示可能出现肿瘤细胞，但是由于有些肿瘤细胞可能会在复制时弥补其染色体丢失的部分，造成DNA含量平衡，而且在实体肿瘤中有很多都为二倍体肿瘤，检测过程中若非整倍体峰很小则显示不出来，由于种种原因也会造成DNA倍体分析出现假阴性，所以要仔细分析，采用多种诊断方法进行准确诊断。而癌胚抗原应用也比较广泛，它是一种大分子的糖蛋白，是肿瘤标志物之一，在血清中含量较低，但是在癌症患者的血清中含量则显着增多，而且该物质不容易进入血液循环，也不容易被代谢，特异度极高，具有较高的应用价值。

在该研究中，DNA倍体分析的特异度达到了80.36%，综合反应灵敏度和特异度的Youden指数也达到0.7029，可见DNA倍体分析具有良好的诊断价值； CEA的灵敏度为60.71%，特异度为96.43%，Youden指数为0.5714。二者的灵敏度和特异度相比较差异有统计学意义（P<0.05，P<0.01），但两者的Youden指数差异无统计学意义（P>0.05）。由此可见，两种诊断方法在灵敏度和特异度方面差异有统计学意义。综上，采用DNA倍体分析检测胸腔积液更加简单、准确，能够弥补传统诊断方法的不足。将大大提高诊断率，有效提高患者的生存质量，值得临床推广应用。

[参考文献]

[1] 陈绍森.细胞DNA倍体分析联合肿瘤特异性生长因子检测对恶性胸腔积液的诊断价值[J].广东医学，2013，34（2）：236.

[2] 姜涛.DNA倍体分析在胸腔积液诊断中应用价值[J].中国医师进修，2012，36（16）：28.

[3] 张恒.胸腔积液肿瘤特异性生长因子检测对肺癌的诊断价值[J].中华全科医学，2011，7（12）：1362.

[4] 陈连周.血清五种主要肿瘤标志物联合检测在肺癌诊断中的临床价值[J].中国医药，2012，3（10）：617.

[5] 张心中.心钠素、癌胚抗原及铁蛋白联合测定对良、恶性胸腔积液的鉴别价值[J].山东医药，2012（5）：223.

[6] 杨胜茹.四项生化指标的比值在胸腔积液鉴别诊断中的应用[J].现代检验医学，2011，23（2）：120.

[7] 冯家伍.腺苷脱氨酶测定在结核性胸膜炎中的应用[J].河北医学，2010，2（13）：148.

[8] 鄢斌.联合检测血清及胸水LDH、ADA、CEA、CA153对胸水性质的鉴别价值[J].现代医药卫生，2011，25（10）：1505.

（收稿日期：2014-04-13）