IgA肾病病理与临床指标及转化生长因子β1和Smad7蛋白的相关因素分析

郭鹏威 杨发奋 王洁 林栩 黄鹏 汤春荣

右江民族医学院附属医院肾内科，广西百色 53300

IgA肾病病理与临床指标及转化生长因子β1和Smad7蛋白的相关因素分析

郭鹏威 杨发奋 王洁 林栩 黄鹏 汤春荣

右江民族医学院附属医院肾内科，广西百色 53300

目的对IgA肾病进行病理学分型及其临床指标之间的关系进行探讨和分析，并观察转化生长因子β1和Smad7蛋白的不同表达，旨在对发病机制等因素进行探讨。方法 选取该院收治的100例原发性IgA肾病患者，收集并研究患者临床资料，参照IgA肾病分型对所有患者的肾活检标本进行评分并比较各病理及分型见常见指标的差异。通过使用免疫荧光双套染法并结合激光共聚焦显微镜检测IgA免疫复合物在不同肾病肾小球的沉积量，比较并分析其相关因素。此外，采用化学二步法检测转化生长因子β1和Smad7蛋白的表达，并比较不同表达情况与肾小球沉积量的关系。结果 IgA肾病肾组织除E0/1外，其余临床指标之间差异有统计学意义（P＜0.05）；血清IgA浓度组间差异无统计学意义（P＞0.05），肾组织IgA沉积量差异有统计学意义（P＜0.05）；转化生长因子β1和Smad7蛋白表达差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 IgA肾病病理可以反映病变指标；血清浓度高低并不一定能决定IgA肾病是否发作，但沉积的IgA复合物可能过量聚积造成肾小球硬化；转化生长因子β1和Smad7蛋白很可能是过量聚积的重要原因并造成肾小球硬化。

IgA肾病病理；临床指标；转化生长因β1；Smad7蛋白

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.2 排除标准

①患者患有狼疮肾炎、乙肝相关性肾炎等继发性肾病；②患者患有肾小管间质病变或动脉病变等[1-2]；③患者每例肾穿组织内肾小球数量≥8个，且新月体占55%以下；④临床24 h检测患者尿蛋白定量超过0.5 g/d；⑤临床估计患者eGFR超过30 mL/min（1.73 m2）。

1.3 方法

收集100例患者临床资料，估算患者肾小球滤过率（eGFR）和平均动脉压（MAP）。对所有患者进行肾病理学检查。

1.3.1 光镜 对患者进行穿刺处理以获得患者肾组织，以福尔马林固定并用石蜡进行包埋，将其处理成为厚度大约为4 μm的切片，并对切片分别进行PAS、Msson、HE和PASM染色。肾组织病理指标应当包括球性硬化、新月体、内皮细胞增生、坏死等方面。

1.3.2 电镜 使用浓度为2.5%～3%的戊二醛 （稀戊二醛溶液：国药准字H44021172）初固定肾穿组织，之后用1%浓度的锇酸（CAS号20816-12-0）后固定，对其按照常规方式进行制片，将其处理成为1 μm厚度的切片并用醋酸铀-柠檬酸铅 （醋酸铀：CAS号541-09-3；柠檬酸铅：CAS号512-26-5）染色。在电镜下观察肾小球基底膜厚度变化及其结构变化，细胞器变化及上皮细胞足突的形态特征等。

1.3.3 肾组织病理学观察及分型 在光镜视野下，根据IgA肾病的牛津分型，分别对M0/1、S0/1、E0/1、T0/1/2进行评分并整理组合，见表1。

表1 I gA肾病分型中不同病理参数及其意义

通过使用规定的PAS染色切片对系膜细胞增生进行评分，将符合条件的小球数量记录为X。并将所有小球评分分值相加的总数记为Y。Y/X所得即为系膜细胞增生的评分。

标准明确规定了尼龙绢袋集卵孵化法检测人体粪便中日本血吸虫毛蚴的技术规范，适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对日本血吸虫毛蚴的检测。引用《病原微生物实验室生物安全通用准则（WS 233—2017）》。

表2 100例IgA肾病病理与临床指数差异

表2 100例IgA肾病病理与临床指数差异

病理参数MAP（mmHg）P EGFR（mL/min/1.73 m2）P 24 hpb（g/d） P M0（n=40）M1（n=60）S0（n=46）S1（n=54）E0（n=43）E1（n=57）T0（n=60）T1（n=27）T2（n=13）97±19 95±18 95±12 102±14 99±12 98±20 92±18 101±18 109±22 P＞0.05P＞0.05P＜0.05 P＞0.05P＜0.05P＞0.05 P＞0.05P＞0.05P＞0.05 P＜0.001 100.9±43.9 101.6±60.3 104.8±59.9 98.0±48.2 99.7±48.4 101.2±57.9 115.1±51.3 101.4±45.1 46.5±38.9 P＜0.001 1.8±2.4 2.9±3.7 2.0±2.5 2.3±3.1 2.4±1.9 2.2±2.8 2.0±3.1 1.8±1.9 3.4±3.9 P＜0.05

1.3.4 免疫荧光检查 选取肾穿新鲜的组织并进行冰冻切片，采用厚度约为2～3 μm的免疫荧光进行染色，并使用FITC分别采用直接免疫荧光染色和简洁荧光法进行标记和检测。在显微镜下对其进行荧光观察。采用化学二步法检测转化生长因子β1和Smad7蛋白的表达，并比较不同表达情况与肾小球沉积量的关系。

1.4 统计方法

该观察数据统计应用SPSS 17.0软件对数据进行分析，计量资料以均数±标准差形式表示，组间应用t检验进行比较。

2 结果

IgA肾病肾组织除E0/1外，其余临床指标之间均差异有统计学意义（P＞0.05），见表2。

血清IgA浓度组间差异无统计学意义（P＞0.05），肾组织IgA沉积量差异有统计学意义（P＜0.05），转化生长因子β1和 Smad7蛋白表达组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 在病理参数内IgA血清浓度和沉积量差别

表3 在病理参数内IgA血清浓度和沉积量差别

病理参数 血清浓度P IgA沉积量 P M0（n=40）M1（n=60）S0（n=46）S1（n=54）E0（n=43）E1（n=57）T0（n=60）T1（n=27）T2（n=13）3.2±1.8 2.2±1.7 3.3±1.9 2.4±1.5 2.9±1.3 2.9±1.2 2.9±1.9 3.2±1.7 2.6±1.7 P＞0.05P＜0.05 P＜0.05P＞0.05 P＞0.05P＞0.05 P＞0.05 14.8±16.4 16.4±14.2 15.8±16.4 16.0±14.4 14.6±17.6 15.9±11.3 15.7±16.8 16.1±10.9 13.5±16.7 P＞0.05

3 讨论

IgAN组织学的病理变化多种多样，在显微镜下，轻则肾小球、肾小管正常；重则肾小球严重病变，形成各类新月体；晚期患者多为肾小球硬化、肾小管萎缩或发生间质纤维化。自从Berger在1968年第一次报道IgAN后，临床上出现过许多种分类、分型标准，但由于这些标准大多缺乏病理参数系统定义，同时并不具备重复检测性，因此多数教授并没有接受这些分类[1]。

该次研究选用了国际肾脏病理协会在2004年组织制定的I gAN牛津病理分型，其具有良好的重复性和可预测性，加上选用最为被广泛接受的MAO、eGFR等指标，通过单变量分析法对不同系膜细胞增生进行评分，以此来判定其相关性。先前学者对血清IgA浓度、肾组织IgA沉积量和IgA肾病关系的看法各不相同[2-4]。该次研究中单变量分析结果表明不同系膜细胞增生评分、肾小管萎缩评分、肾小球节段性硬化评分等对于血清IgA浓度产生的差异无统计学意义（P＞0.05）。而对于肾组织IgA免疫复合物沉积量和IgA肾病之间的关系探讨，以往学者通常是采用半定量法。而该次研究中则通过借助激光共聚焦显微镜可以定量不同荧光标记物来研究肾病IgA沉积量和各病理参数之间的关系[5-7]。

此外，对于转化生长因子-β1、Smad蛋白在IgA肾病中的表达及其意义，从该次研究中看来，Smad7蛋白的表达和系膜细胞增生评分呈现出正相关的趋势，Smad7的高表达很可能会改变转化生长因子-β1内的病理生理平衡。同时还发现，转化生长因子-β1的表达和IgA沉积量存在一定关联且Smad7蛋白的表达和转化生长因子-β1也存在一定相关性。通过本次研究，我们认为IgA肾病患者沉积的IgA免疫复合物很可能会造成转化生长因子-β1蛋白表达的提高，且Smad7很可能参与到了病变肾小球细胞外基质的过量积聚中去。这些研究结果与以前的研究是一致的[8-10]。

综上所述，通过对血清IgA浓度、沉积量和IgAN之间的关系进行探讨和分析，以及观察转化生长因子β1和Smad7蛋白在不同IgA肾小球内的表达及其与沉积量之间的关系发现，IgA肾病病理可以反映病变指标；血清浓度高低并不一定能决定IgA肾病是否发作，但沉积的IgA复合物可能过量聚积造成肾小球硬化；转化生长因子β1和Smad7蛋白很可能是过量聚积的重要原因并造成肾小球硬化。

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R69

A

1674-0742（2014）11（b）－0044-03

郭鹏威（1979.7-），男，广西扶绥人，研究生，主治医师，研究方向：肾小球疾病，血液净化。