张凯 陈然 罗智辉
【摘要】 目的：研究新辅助化疗前后乳腺癌患者Ki-67、Tau表达水平与化疗效果的关系。方法：回顾性分析本院2015年5月-2018年5月收治的乳腺癌患者67例，均接受紫衫类药物新辅助化疗后实施手术治疗，并取手术前后标本进行病理检测。观察化疗前后乳腺标本中Ki-67、Tau表达水平，统计新辅助化疗后疗效情况及其与Ki-67、Tau表达水平间关系。结果：新辅助化疗后乳腺标本中Ki-67蛋白阳性表达低于新辅助化疗前（P<0.05），新辅助化疗后乳腺标本中Tau蛋白阳性表达高于新辅助化疗前（P<0.05）。67例乳腺癌患者中完全缓解（complete response，CR）患者4例（5.97%）、部分缓解（partial response，PR）患者42例（62.69%）、疾病稳定（stable disease，SD）患者21例（31.34%）、疾病进展（progressive disease，PD）患者无。新辅助化疗后CR+PR及SD患者乳腺组织中Ki-67表达情况比较，差异无统计学意义（P>0.05），新辅助化疗后CR+PR患者乳腺组织中Tau阳性表达高于SD患者（P<0.05）。结论：紫衫类药物新辅助化疗方案对乳腺癌治疗效果较好，其近期治疗效果可能与乳腺癌组织中Ki-67、Tau蛋白表达水平有关，临床治疗应予以重视。
【关键词】 乳腺癌; 新辅助化疗; 紫杉类药物; Ki-67蛋白; Tau蛋白
Relationship Between Ki-67，Tau Protein Expression Levels and Chemotherapy Effect in Breast Cancer Patients Before and After Neoadjuvant Chemotherapy/ZHANG Kai，CHEN Ran，LUO Zhihui.//Medical Innovation of China，2019，16（22）：0-066
【Abstract】 Objective：To study the relationship between Ki-67，Tau proteinexpression levels and chemotherapy effect in breast cancer patients before and after neoadjuvant chemotherapy.Method：A retrospective analysis was performed on 67 patients with breast cancer admitted to the hospital from May 2015 to May 2018.All patients were given surgery treatment after neoadjuvant chemotherapy with Taxane drugs.The preoperative and postoperative specimens were collected to conduct pathological examination.The expression levels of Ki-67 and Tauprotein in breast specimens before and after chemotherapy were observed.The curative effect after neoadjuvant chemotherapy and its relationship with expression levels of Ki-67 and Tauprotein were statistically analyzed.
Result：After neoadjuvant chemotherapy，positive expression of Ki-67 protein in breast specimens was lower than that before neoadjuvant chemotherapy（P<0.05）.While positive expression of Tau protein in breast specimens after neoadjuvant chemotherapy was higher than that before neoadjuvant chemotherapy（P<0.05）.Of the 67 breast cancer patients，there were 4 cases（5.97%）with complete response（CR），42 cases（62.69%）with partial response（PR），21 cases（31.34%）with stable disease（SD）.There was no one with progressive disease（PD）.After neoadjuvant chemotherapy，there was no statistically significant difference in the expression of of Ki-67 in breast tissue of CR+PR and SD patients（P>0.05）.After neoadjuvant chemotherapy，positive expression of Tauproteinin breast tissue of CR+PR patients was higher than that of SD patients（P<0.05）.Conclusion：The curative effect of neoadjuvant chemotherapy with Taxane drugs is relatively better on breast cancer.The short-term curative effect may be related to expression levels of Ki-67 and Tau protein in breast cancer tissues，the clinical treatment should pay attention.
【Key words】 Breast cancer; Neoadjuvant chemotherapy; Taxane drug; Ki-67 protein; Tau protein
First-authors address：Northern Guangdong Peoples Hospital Affiliated to Shantou University，Shaoguan 512026，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.22.017
乳腺癌作为女性高发恶性肿瘤之一，高发群体为乳腺癌家族史者、未生育者或生育晚者，随着人均生活水平变化总体发病率呈上升趋势，且年轻化趋势明显，严重威胁女性身心健康及生活质量[1]。近年早期乳腺癌发现和综合治疗水平不断提高，癌症死亡率逐步下降，其中早期患者多采用局部受损与治疗并重的综合治疗模式，而中晚期患者则多采用新辅助化疗、手术、术后放疗等综合治疗模式[2]。临床研究发现，乳腺癌患者实施手术或放疗前实施新辅助化疗，且以紫杉醇类化疗药物为主，其能有效缩小肿瘤病灶、降低分期、减少远处传播及扩散等，进而改善预后[3-4]。Ki-67蛋白主要反映乳腺癌细胞增殖活性，是乳腺癌预后预测重要参考指标之一;Tau蛋白是一种微管相关蛋白，在正常及癌变乳腺上皮细胞中均有表达，有研究发现Tau基因低表达能增加紫杉醇化疗敏感性[5-6]。基于此，本研究对其中以紫杉醇类化疗药物为主，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 回顾性分析本院2015年5月-2018年5月收治的乳腺癌患者67例，均接受新辅助化疗，于本院病理科取其乳腺组织样本进行研究。纳入标准：（1）均经空心针穿刺活检，并参照《2008年NCCN乳腺癌临床实践指南（中国版）解读》进行分期及确诊[7];（2）肿瘤<3 cm且伴有淋巴结转移，肿瘤≥3 cm且伴或不伴淋巴结转移;（3）符合新辅助化疗治疗标准，且无治疗禁忌证;该项研究。排除标准：（1）就诊前已接受化疗、内分泌治疗、局部放疗等;（2）针断为非乳腺癌或合并其他肿瘤;（3）化疗前血常规、肝肾功能、心电图等存在明显异常;（4）经影像学检查（全胸X线、腹部B超、全身骨扫描等）发现存在远处转移。所有患者年龄30～65岁，平均（47.52±10.84）岁;患病部位：左侧37例，右侧29例，双侧1例;临床分期（TNM）：Ⅱ期46例，Ⅲ期21例;绝经前36例，绝经后31例。所有患者及家属均知情同意并签署知情同意书，本研究已经医院伦理委员会批准。
1.2 方法 所有患者均接受新辅助化疗，化疗方案均采用EC-P双周的剂量密度方案，即表柔比星
90 mg/m2，环磷酰胺600 mg/m2，两周为1个周期，共4个周期;序贯紫杉醇175 mg/m2，两周为1个周期，共4个周期，Her-2阳性者赫赛汀与紫杉醇联用。取新辅助化疗前后乳腺组织，4%甲醇固定，并使用石蜡包埋，做成4 μm连续切片。使用时拷片（1 h，65 ℃）、脱蜡（二甲苯）及梯度脱水，并进行如下处理：第1天使用柠檬酸缓冲液（pH=6.0）高压修复（5 min）+磷酸缓冲盐溶液冲洗（3次）;3%过氧化氢封闭（8 min）+磷酸缓冲盐溶液冲洗（3次）;5%牛血清白蛋白封闭（20 min）;抗ACLT8兔源多克隆抗体（1︰100），并于4℃恒温箱中孵育过夜。第2天使用磷酸缓冲盐溶液冲洗（3次）;链霉素标记过的山羊抗兔Ⅱ抗常温孵育（30 min）+磷酸缓冲盐溶液冲洗（3次）;二氨基联苯胺试剂显色（5 min）;苏木素对细胞核进行复染，并脱水、封片
1.3 观察指标与判定标准 新辅助化疗前后Ki-67、Tau表达水平判断是对切片图像进行采集，并在显微镜下观察阳性区域（10倍镜）及阳性细胞计数（40倍镜）。阳性区域标准：无染色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分;阳性计数比例标准：0～5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，50%以上为3分;总评分：0～1分为阴性（-），2～3分为弱阳性（+），4～5分为中阳性（++），6分为强阳性（+++）。观察两组新辅助化疗后疗效情况及其与Ki-67、Tau表达水平的关系，其疗效参照实体瘤疗效评价标准拟定，完全缓解（complete response，CR）：肿瘤病灶完全消失;部分缓解（partial response，PR）：肿瘤面积减小≥50%;疾病稳定（table disease，SD）：肿瘤面积减小<50%，或肿瘤新增面积≤25%;疾病进展（progressive disease，PD）：肿瘤新增面积>25%或出现新肿瘤灶[8]。
1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示;计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验，等级资料的比较采用秩和检验，所有检测均为双侧检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 化疗前后乳腺组织中Ki-67、Tau表达变化比较 新辅助化疗后乳腺组织中Ki-67蛋白阳性表达低于新辅助化疗前，差异有统计学意义（P<0.05），新辅助化疗后乳腺组织中Tau蛋白阳性表达高于新辅助化疗前，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。
2.2 化疗后乳腺组织中Ki-67、Tau表达与疗效关系 67例乳腺癌患者中CR患者4例（5.97%）、PR患者42例（62.69%）、SD患者21例（31.34%）、PD患者无。新辅助化疗后CR+PR及SD患者乳腺组织中Ki-67表达情况比较，差异无统计学意义（P>0.05），新辅助化疗后CR+PR患者乳腺组织中Tau阳性表达高于SD患者，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。
3 讨论
乳腺癌是女性乳腺高发疾病之一，相关研究发现，新辅助化疗以成为局部晚期乳腺癌标准治疗一部分，其主要是在术前进行全身性、周期性细胞毒性药物治疗，进而降低肿瘤分期、增加保乳率、提高手术切除率等[9]。紫衫类药物是近年较常用的新辅助化疗药物之一，其作用靶点为微血管，通过与微血管特定位点结合，促进并稳定微管蛋白聚合，导致染色体断裂的同时抑制细胞复制和移行，使癌细胞无法进行有丝分裂，进而达到抗肿瘤效果[10]。近年有研究发现，紫杉醇类药物耐药机制可能与β微管蛋白、bcl-2、P-糖蛋白等有关，而化疗会增加患者化疗周期及毒副反应。因此，寻找合适的药物疗效预测分子标志物显得尤为重要[11]。
Ki-67抗原作为乳腺癌预后重要参考指标之一，主要是判断癌组织细胞增殖活性，同时还可作为组织细胞生长良、恶性状态判断标记物，但其表达状态是否对新辅助化疗存在影响尚存有争议[12]。Ki-67抗原在乳腺癌中与淋巴结转移呈正相关，且与较差组织分级、晚期临床分期及预后较差等因素密切相关，且过表达患者总生存率及无病生存率均低于低表达患者[13-14]。本文研究结果显示，乳腺癌患者经新辅助化疗治疗后Ki-67蛋白阳性表达降低（P<0.05），且CR+PR及SD患者乳腺组织表达情况比较，差异无统计学意义（P>0.05），这与郭金培等[15]研究结果类似，提示新辅助化疗药物可在一定程度上抑制肿瘤细胞增殖。
Tau是一种具有极性、带电荷、高可溶性的微血管相关蛋白，其主要功能是促进微管形成并保持微管稳定，同时参与细胞形态维持、信息传递及分裂等生物学过程[16]。近年对Tau蛋白与乳腺癌患者研究日益增多，发现部分患者无法从紫衫类药物化疗中获益，Tau蛋白可能是一种新型潜在耐药因子，因Tau蛋白正常功能与紫杉醇相似，且两者结合相同的结构域，Tau蛋白表达下调可在一定程度上增加紫杉醇类药物敏感性，其有望成为紫杉类化疗反应性标记物[17-18]。邓文静等[19]研究发现，乳腺癌患者中雌激素受体（estrogen receptor，ER）阳性患者Tau蛋白呈高表达，因癌变细胞中ER出现部分或全部缺失，且ER阳性患者预后优于阴性患者，本文研究结果与此类似，新辅助化疗后乳腺癌患者Tau蛋白阳性率较高（P<0.05），且化疗后CR+PR患者Tau蛋白阳性率高于SD患者（P<0.05）。
综上所述，乳腺癌患者使用紫杉类新辅助化疗药物治疗效果可能与其调节体内Ki-67及Tau蛋白有关，且Tau蛋白低表达可能增加紫杉醇化疗敏感性，但本研究样本量有限，对紫杉醇类药物耐药机制仍属于探究阶段，需寻找更多临床证据研究Tau蛋白表达状态与紫衫类药物新辅助化疗敏感性间关系。
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（收稿日期：2019-07-02） （本文编辑：田婧）
