索明环，温冬梅，张秀明，吴剑杨，陈亚琼，徐全中（中山大学附属中山医院检验医学中心，广东中山 528403）
血红蛋白病是我国长江以南发病率最高、危害最大的一类人类遗传性溶血性血液病，目前为止该病还无有效的治疗方法，通过产前筛查预防受累重型胎儿的出生是目前公认最为有效的对策。血红蛋白电泳是一种常用的血红蛋白病筛查手段，通过电泳能够定量检测HbA、HbF、HbA2含量以及其他异常血红蛋白，用于辅助诊断珠蛋白生成障碍性贫血（地贫）和异常血红蛋白病［1－2］。现回顾本院2011年1月至2012年6月以来进行血红蛋白电泳检测的资料，并计算其与基因检测结果的符合率，以便对以后工作进行指导，进一步提高对血红蛋白病的筛查效能。
1 资料与方法
1.1 研究对象 2011年1月至2012年6月来自本院和外院1岁以上进行血红蛋白电泳检测的患者。收集患者资料，进行总结归类，计算疑似α、β地贫及异常血红蛋白病患者数。经过临床医生筛选，这些患者平均红细胞体积（MCV）≤82fL和（或）平均红细胞血红蛋白浓度（MCH）≤27pg/fL。
1.2 方法
1.2.1 标本准备 乙二胺四乙酸二钾（EDTA－K2）抗凝血或肝素抗凝血3mL，离心5min（5 000r/min），吸去血浆层及白细胞层，摇匀备用。
1.2.2 HbA2定量检测 采用法国Sebia公司生产的Sebia Cappilarys 2型全自动毛细管电泳分析仪及厂家提供的配套试剂及配套质控品。在9.8kV电压、pH 9.4的缓冲液条件下，8条并联的石英毛细管内进行血红蛋白电泳，用415μm波长直接检测血红蛋白个组分的含量。检测标本前首先做7次室内质控。室内质控在控后进行患者标本检测，每13例患者插入一个质控品，保证检测全过程都处于在控状态。
1.2.3 基因检测 全血基因组提取试剂盒和α、β基因诊断试剂盒均由深圳益生堂公司公司提供。扩增仪为PT－2000PCR仪。检测中国人常见的3种缺失型α地贫（－－SEA/αα，－α3.7/αα，－α4.2/αα）和中国人常见的β地贫17个位点突变基因型（41－42N，654N，－28N，71－72N，17N，CD26M，31N，27/28M，41－42M，654M，－28M，71－72M，17M，βEM，31M，IVS1－1M，43M，－32M，－29M，－30M，14－15M，CAP，IntM，IVS1－5M）。
1.2.4 判断标准［3］当 HbA2＜2.5和（或）出现 HbH，Hb－Bart′s或Hb Constant Spring，并未出现其他异常血红蛋白带，初步判断该患者疑似α地贫患者；当2.5≤ HbA2≤3.5，并未出现异常血红蛋白带，初步判断该患者非α，β地贫患者，HbA2＞3.5和（或）HbF带升高，则初步判断该患者为β地贫患者。出现异常血红蛋白带比如HbE、HbD、HbS、HbC、HbJK等则判断为异常血红蛋白病。
2 结 果
2.1 人群分布 2011年1月至2012年6月以来共检测血红蛋白电泳标本11 519例，年龄分布在1～71岁，18～35岁占89%。其中男140例，占1.22%，女11 379例，占98.78%，患者主要来自产前诊断中心及血液内科。
2.2 血红蛋白电泳结果 11 519例患者中，通过法国Sebia毛细管电泳仪筛查出1 193例疑似血红蛋白病患者，检出率10.36%，其中疑似α地贫患者395例，占3.43%。疑似α地贫者中出现HbH带2例，同时出现HbH和HbBart′s带19例，出现Hb Constant Spring共7例。疑似β地贫患者755例，占6.55%。HbE变异体检出18例，占0.16%，HbJ－K变异体检出20例，占0.17%，HbN带1例，HbD带4例。见表1。
2.3 地贫基因检测结果 血红蛋白电泳筛查出的1 193例阳性患者中，有357例进行了α地贫基因检测，而与基因结果相符的仅有268例，符合率75.07%，而HbH的符合率达到100%。有419例进行了β地贫基因检测，408例与基因检测结果相符，符合率达97.37%。但是16例血红蛋白电泳筛查为β地贫的患者，基因检测显示该患者为α合并β地贫患者。有8例HbE变异体患者同时做了基因检测，全部检出CD26M，符合率100%，并且有1例同时合并了β地贫基因的其他变异。
3 讨 论
血红蛋白病是一组遗传性疾病，如果夫妻双方为同型地贫则有可能造成子代的重型地贫。重症β地贫的儿童患有严重贫血、黄疸、脾脏肿大、骨变形、生长迟缓，需要输血维持生命，通常在青春期前死亡。广东省是该病的高发区，α地贫发生率8.53%，β地贫发生率2.54%，α合并β地贫发生率0.26%［4］。目前该病无有效的治疗方法，主要通过产前诊断避免中、重型地贫儿出生。
血红蛋白电泳是目前产前筛查地贫及异常血红蛋白病的一种重要的方法。本实验室采用了法国Sebia Capillarys 2电泳仪进行血红蛋白电泳检测，具有较好的可靠性［5］。而通过对11 519例电泳结果的分析发现：（1）广东地区α地贫发生率比β地贫要高，但通过血红蛋白电泳筛查，α地贫发生率低于β地贫的发生率。这可能是因为一些标准型和静止性α地贫患者其MCV、MCH及HbA2是正常的，通过血红蛋白电泳不能筛查出这些患者，故致使α地贫发生率降低。另外本组资料显示，α地贫发生率3.43%，β地贫发生率6.55%，与Xu等 的结果有所差异，这可能与调查人群不同有关。（2）毛细管电泳可以很好地筛查出异常血红蛋白，这组资料中发现Hb Constant Spring条带7例，HbE条带18例，并且HbE与基因检测的符合率可达到100%。而本实验室并未开展非缺失α地贫及其他异常血红蛋白基因检测，无法计算符合率，下一步的工作是开展这些检测来弥补这一缺陷。（3）本组资料显示，α地贫与基因检测的符合率仅有75.07%，而β地贫的符合率高达97.37%，该结果与文献［6］报道基本一致。这可能是因为血红蛋白电泳不能区分缺铁性贫血，自身免疫性溶血性贫血或其他血红蛋白合成障碍性疾病，也可造成MCV、MCH及HbA2的减低［7－8］。这说明毛细管电泳筛查β地贫的效能要优于α地贫。（4）本组资料显示16例电泳筛查为β地贫的患者，基因检测显示该患者为α合并β地贫患者，这说明当HbA2升高时不能排除α合并β地贫的可能。
尽管如此，血红蛋白电泳作为一种筛查指标在筛查血红蛋白病方面有着重要作用。《广东省卫生厅产前诊断技术管理实施细则》中明确了地贫产前诊断技术规范，包括了血细胞分析、血红蛋白分析和基因诊断。血细胞分析用于初筛，进一步进行血红蛋白分析，结果异常者才进行基因诊断以便确诊。实施细则中指出当HbA2降低时，首先检测血清铁以排除缺铁性贫血，当血清铁正常时才怀疑α地贫。按照这一流程，可以降低α地贫的误筛率，提高血红蛋白电泳的筛查效能。血红蛋白病筛查是一个有序的过程，执行好这3个过程，做好地中海贫血及异常血红蛋白病的筛查是每个产前诊断中心重要任务之一。
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