胡春霞，计晓兰，缪鑫霞
（苏州市吴江区儿童医院儿内科，江苏 苏州 215200）
支气管哮喘是小儿呼吸系统的常见病，其是一种以气道高反应性和可逆性气道狭窄为特征的气道慢性炎症，且肥大细胞、嗜酸性粒细胞及T淋巴细胞共同参与慢性气道炎症反应过程。肺炎支原体（MP）是小儿呼吸道感染的常见病原体之一，小儿在感染了MP后，不仅会诱发并加重呼吸道上黏膜细胞慢性炎症，同时也可对机体的免疫功能产生影响，主要表现为T淋巴细胞表达水平异常，同时免疫球蛋白水平也会相应改变[1]。有研究表明，MP感染与小儿支气管哮喘存在相关性，但MP感染诱发或加重小儿支气管哮喘的作用机制尚未完全明确，多认为支气管哮喘可能与机体免疫调节功能紊乱有关[2-3]。基于此，本文对小儿支气管哮喘合并MP感染的免疫功能指标的改变及临床意义展开探讨，旨在为临床治疗及预后判断提供参考依据，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取苏州市吴江区儿童医院2019年12月至2021年4月收治的120例支气管哮喘患儿作为观察组，按照血浆MP抗体（MP-IgM）表达水平分为MP-IgM阳性组（67例）及MP-IgM阴性组（53例），其中MP-IgM的检测结果按照明胶颗粒载体的间接凝集试验法判断，若MP-IgM滴度≥ 1∶80为阳性；另选取同期行健康体检的健康儿童60例作为对照组，开展前瞻性研究。对照组研究对象中男童、女童分别为32、28例；年龄2～13岁，平均（5.24±1.09）岁。MP-IgM阳性组中男、女患儿分别为36、31例；年龄2～10岁，平均（5.14±1.22）岁。MP-IgM阴性组中男、女患儿分别为28、25例；年龄1～11岁，平均（5.20±1.32）岁。3组研究对象一般资料相比，差异无统计学意义（P> 0.05），组间具有可比性。支气管哮喘患儿纳入标准：符合《儿童支气管哮喘诊断和防治指南（2016年版）》[4]中关于支气管哮喘的诊断标准者；年龄在14岁以下者；在入组前4周内未接受糖皮质激素或者免疫调节剂治疗者等。排除标准：合并重要脏器损伤或功能障碍者；因肺炎以及肺结核所引起的慢性咳嗽或者气管异物诱发的支气管症状者；伴有自身免疫性疾病者等。所有研究对象的法定监护人对本研究知情并签署知情同意书，且本研究经院内医学伦理委员会审核批准。
1.2 检验方法 入组后采集3组研究对象空腹静脉血6 mL，分成两部分，其中一部分血样静置60 min后，做离心处理，离心转速为2 000 r/min，离心时间为10 min，提取血清后，应用全自动生化分析仪（株式会社日立制作所，型号：7600型）及配套试剂，通过免疫比浊法测量免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）及免疫球蛋白M（IgM）的水平；采用酶联免疫吸附实验法检测Th1细胞因子γ- 干扰素（IFN-γ）及Th2细胞因子白介素 -4（IL-4）水平，并以IFN-γ/IL-4表示Th1/Th2比值。一部分血样采用流式细胞仪（美国贝克曼库尔特有限公司，型号：FC 500）检测外周静脉血T淋巴细胞亚群（CD3+百分比、CD4+百分比、CD8+百分比），并计算CD4+/CD8+比值。全部操作均由同一组医护人员完成，并且严格按照说明书及实验室标准进行。
1.3 观察指标 ①比较对照组和观察组研究对象免疫球蛋白水平。②比较MP-IgM阳性组和MP-IgM阴性组患儿免疫球蛋白水平。③比较对照组和观察组研究对象T淋巴细胞亚群水平及Th1/Th2比值。④比较MP-IgM阳性组和MP-IgM阴性组患儿T淋巴细胞亚群水平及Th1/Th2比值。
1.4 统计学方法 采用SPSS 22.0统计软件分析数据，计量资料以(±s)表示，采用t检验。以P< 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 对照组与观察组研究对象免疫球蛋白水平 观察组患儿血清IgA、IgG及IgM水平均显着高于对照组，差异均有统计学意义（均P< 0.05），见表1。
表1 对照组与观察组研究对象免疫球蛋白水平比较( ±s , g/L)
表1 对照组与观察组研究对象免疫球蛋白水平比较( ±s , g/L)
注：IgA：免疫球蛋白A；IgG：免疫球蛋白G；IgM：免疫球蛋白M。
组别 例数 I g A I g G I g M对照组 6 0 1.1 6±0.3 5 7.3 6±2.7 5 1.3 6±0.4 2观察组 1 2 0 1.7 8±0.3 0 1 2.0 2±3.6 4 2.6 3±0.8 5 t值 1 2.3 5 2 8.7 4 3 1 0.9 1 5 P值 <0.0 5 <0.0 5 <0.0 5
2.2 MP-IgM阳性组和MP-IgM阴性组患儿免疫球蛋白水平 MP-IgM阳性组患儿血清IgA、IgG及IgM水平均显着高于MP-IgM阴性组患儿，差异均有统计学意义（均P< 0.05），见表 2。
表2 MP-IgM阳性组和MP-IgM阴性组患儿免疫球蛋白水平比较 ( ±s , g/L)
表2 MP-IgM阳性组和MP-IgM阴性组患儿免疫球蛋白水平比较 ( ±s , g/L)
注：MP-IgM：肺炎支原体抗体。
组别 例数 I g A I g G I g M M P-I g M阳性组 6 7 1.8 5±0.4 1 1 3.6 9±4.2 5 2.8 4±0.9 2 M P-I g M阴性组 5 3 1.6 2±0.3 0 9.3 5±3.0 1 2.4 3±0.6 5 t值 3.4 2 2 6.2 8 8 2.7 4 6 P值 <0.0 5 <0.0 5 <0.0 5
2.3 对照组与观察组研究对象T淋巴细胞亚群及Th1/Th2比值 观察组患儿CD3+百分比、CD4+百分比、CD4+/CD8+比值、Th1/Th2比值均显着低于对照组，差异均有统计学意义（均P< 0.05），而两组研究对象CD8+百分比比较，差异无统计学意义（P> 0.05），见表3。
表3 对照组与观察组研究对象T淋巴细胞亚群及Th1/Th2比值比较( ±s)
组别 例数 CD3+(%) CD4+(%) CD8+(%) CD4+/CD8+ Th1/Th2对照组 60 72.33±6.54 41.28±6.20 28.35±4.55 1.46±0.38 5.52±2.74观察组 120 60.38±7.74 34.96±6.54 28.98±4.83 1.21±0.41 3.39±1.48 t值 10.263 6.217 0.841 3.950 6.776 P值 <0.05 <0.05 >0.05 <0.05 <0.05
2.4 MP-IgM阳性组和MP-IgM阴性组患儿T淋巴细胞亚群及Th1/Th2比值 MP-IgM阳性组患儿CD3+百分比、CD4+百分比、CD4+/CD8+比值、Th1/Th2比值均显着低于MP-IgM阴性组患儿，差异均有统计学意义（均P< 0.05），而两组患儿CD8+百分比相比，差异无统计学意义（P> 0.05），见表4。
表4 MP-IgM阳性组和MP-IgM阴性组患儿T淋巴细胞亚群及Th1/Th2比值比较( x ±s)
3 讨论
小儿支气管哮喘合并MP感染的发生、发展多与机体的免疫功能失调具有密切的相关性，当机体免疫功能降低时，外源性致敏原则被抗原递呈细胞所吞噬，并对T淋巴细胞产生较强的激活作用，由此过程所产生的大量炎性因子及各种活性物质开始对气道平滑肌产生较强的刺激激活作用，导致气道平滑肌细胞的收缩以及分泌物增多，引起相应的临床症状及病理改变[5]。免疫功能紊乱后，还可在吞噬炎性细胞期间，释放出大量的细胞因子以及炎性介质，由此导致气道受到炎性因子长时间的影响与刺激，加重病情[6]。
有研究表明，体液免疫功能异常直接参与肺炎支原体感染后疾病的进展，其中IgA是机体黏膜防御系统的主要成分，能够抑制微生物在呼吸道上皮附着，有重要的免疫屏障作用；IgM是MP感染后早期出现的免疫球蛋白，具有杀菌、激活补体、免疫调节等作用；IgG则在MP感染后较晚期出现，可以发挥中和游离毒素、调理吞噬细胞的作用[7]。支气管哮喘患儿合并MP感染后，机体主要通过B淋巴细胞分泌免疫球蛋白、T淋巴细胞分泌细胞因子及补体系统而发挥免疫应答作用，这时患儿体内B淋巴细胞免疫功能亢进，多存在着B淋巴细胞过度激活及增殖的表现，引起宿主细胞膜抗原结构改变，从而导致免疫球蛋白分泌增加，导致免疫性损伤，进一步损伤肺部，加重机体免疫功能紊乱的情况，进而易诱发肺外器官多器官以及多系统的损伤，导致患儿本身病情迁延[8]。本研究结果显示，观察组患儿血清IgA、IgG及IgM水平均显着高于对照组研究对象，且MP-IgM阳性组患儿血清IgA、IgG及IgM水平均显着高于MP-IgM阴性组患儿，表明支气管哮喘患儿IgA、IgG及IgM水平高于健康儿童，且支气管哮喘患儿MP-IgM阳性的免疫球蛋白水平表现更加显着。
小儿MP感染后，除了影响体液免疫功能，细胞免疫功能也参与了病情的动态变化。外周血T淋巴细胞参与机体细胞免疫反应，并在免疫应答中起到重要的调节作用，其中CD3+可反映T淋巴细胞成熟程度，表示患儿细胞免疫功能状态；当患儿感染MP后，CD4+可辅助T、B淋巴细胞发挥免疫应答的功能；CD8+则主要发挥细胞毒作用杀伤靶细胞，是早期抗MP感染的免疫细胞，而CD4+/CD8+可反映细胞免疫系统的总体功能状态，CD4+和CD8+调节失衡，则表明患儿机体免疫功能减弱，病原菌侵袭的风险增加。
辅助性T淋巴细胞可分为Th1和Th2亚群，Th1可产生IFN-γ、肿瘤坏死因子-β（TNF-β）等促炎介质，具有较强的细胞免疫诱导作用，而Th2产生IL-4、粒 - 巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）等细胞因子，具有较强的促进增强体液免疫应答的效果，正常人体内，Th1和Th2的前体细胞Th0按一定比例向Th1和Th2细胞分化，两者相互拮抗，保证机体免疫及防御功能的稳定性，而双方中任何一方出现异常改变，或者呈现出优势状态，均可诱发免疫功能紊乱，增加外界病原菌侵犯人体的风险[9]。支气管哮喘本身属于一种慢性炎症性反应，体内Th1/Th2已经失衡，感染MP后，可进一步促进Th0细胞开始向着Th2细胞所分化，这就对Th1/Th2的平衡造成了较大的影响，以Th1功能降低作为主要表现，随着Th1细胞水平的降低，也会对T淋巴细胞以及B淋巴细胞等免疫细胞产生刺激激活作用，而释放出更多的免疫抑制物质，影响机体的免疫功能，在临床表现上则是进一步地加速了气道狭窄的进程，诱发出更加严重的哮喘症状及病理表现[10]。本研究结果显示，观察组患儿CD3+百分比、CD4+百分比、CD4+/CD8+比值、Th1/Th2比值均显着低于对照组研究对象，MP-IgM阳性组患儿CD3+百分比、CD4+百分比、CD4+/CD8+比值、Th1/Th2比值均显着低于MP-IgM阴性组患儿。表明在发生支气管哮喘后，支气管哮喘患儿体内的T淋巴细胞活化功能开始减弱，细胞免疫功能低下，且这种表现在MP-IgM阳性组中更加显着。但MP-IgM阳性组患儿和MP-IgM阴性组患儿CD8+百分比相比，差异无统计学意义，这可能与本研究纳入样本量较少有关。
综上，支气管哮喘患儿多存在着免疫调节功能紊乱的表现，其中免疫球蛋白呈现出了异常升高的趋势，T淋巴细胞活化功能开始减弱，细胞免疫功能低下，且这种表现在合并MP感染患儿中更加显着，在临床工作中可指导治疗以及对患儿预后进行判断，值得临床进一步进行探讨。
