张正滢+杜子荣++邹敏
摘 要 目的：采用高效液相色谱法测定洋参虫草胶囊中人参皂苷Rb1的含量。方法：使用Intersil ODS-3色谱柱（4.6 mm x 250 mm, 5 μm）；乙腈-0.015%磷酸溶液（31∶69）为流动相；检测波长为203 nm。结果：人参皂苷Rb1在0.426~21.3 μg线性关系良好（r=1.000 0），平均加样回收率（n=5）为96.0%，RSD=1.03%，人参皂苷Rb1含量不少于0.7%。结论：本方法简便、准确，重复性好，可用于洋参虫草胶囊的质量控制。
关键词洋参虫草胶囊人参皂苷Rb1高效液相色谱法
中图分类号：R927.2; O657.72文献标识码：A文章编号：1006-1533(2014)13-0077-04
Determination of ginsenoside Rb1 in Yangshen Chongcao capsule by HPLC
ZHANG Zhengying*, DU Zirong, ZHOU Min
(Shanghai Zhonghua Pharmaceutical(Group)Co. Ltd., shanghai 200052, China)
ABSTRACT Objective: To establish an HPLC method for determination of ginsenoside Rb1 in Yangshen Chongcao capsules. Methods: HPLC was performed by use of Intersil ODS-3 column (4.6 mm x 250 mm, 5 μm) with acetonitrile-0.015% phosphoric acid (31:69) as mobile phase and detection wavelength of 203 nm. Results: The standard curve of ginsenoside Rb1 was linear over the range of 0.426~21.3 μg (r=1.000 0). The average recovery rate (n=5) was 96.0% with RSD 1.03%. The content of ginsenoside Rb1 was not less than 0.7%. Conclusion: This method is simple, accurate, reproducible, and can be used for the quality control of Yangshen Chongcao capsule.
KEY WORDS Yangshen Chongcao capsule; ginsenoside Rb1; HPLC
洋参虫草胶囊由西洋参、冬虫夏草、红景天、龟板胶组成，为益气滋阴，填精补元佳品。西洋参属五加科植物[1-2]，性味甘、微苦，凉，归心、肺、肾经，功能补气养阴，清热生津。用于气虚阴亏，虚热烦倦，咳喘痰血，内热消渴，口燥咽干。经现代科学研究，西洋参中含有人参皂苷等多种补益物质，能增强抗病能力，强心，抗疲劳，延缓衰老及预防肿瘤功效。西洋参为本品之君药，人参皂苷Rb1是其主要活性成分之一，本文采用高效液相色谱法测定洋参胶囊中人参皂苷Rb1的含量，为控制产品的内在质量提供了实验依据。
1仪器与试药
Waters 510高效液相系统：Waters 2487 双波长紫外检测仪；人参皂苷Rb1（中国药品生物制品检定所，批号110704-200420）；洋参虫草胶囊 （上海中华药业有限公司，规格：每粒装0.4 g，批号见表4）；乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件
Intersil ODS-3色谱柱（4.6 mm x 250 mm, 5 μm），流动相：乙腈-0.015%磷酸溶液（31∶69），流速为1.0 ml/min，检测波长为203 nm。在此条件下，人参皂苷Rb1对照品的理论板数为4 336，故暂定色谱柱的理论塔板数按人参皂苷Rb1峰计算应不低于4 000。
2.2对照品溶液制备
精密称取人参皂苷Rb1对照品适量，加甲醇制成含量为0.4 mg/ml的溶液。
2.3试品溶液制备
取本品内容物约0.9 g，精密称定，精密加入甲醇50 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，过滤，精密量取续滤液20 ml，65 ℃水浴蒸干，残余物用40 ml水饱和正丁醇分次溶解转移至分液漏斗中，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次为20 ml，保留正丁醇液；合并二次水液，用水饱和的正丁醇萃取2次，分别为20 ml、15 ml，弃去水液；合并前后的正丁醇液，65 ℃减压浓缩至干。残余物加甲醇溶解，转移至10 ml量瓶中，并加甲醇至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取过滤液作为供试品溶液。
2.4空白试验
去除西洋参的洋参虫草胶囊空白样品，同法制成空白对照供试液，进行HPLC分析，并与对照品和供试品比较，结果空白无干扰（图1）。
2.5供试品提取方法的研究
2.5.1热回流提取与超声处理的比较
热回流提取除65 ℃加热回流1.5 h取代超声处理30 min外，其它与2.3同。取过滤液作为热回流提取供试品溶液。
将两种方法获得的溶液分别进行分析，结果表明：本品分别经加热回流法和超声法提取，其中人参皂苷Rb1含量分别为1.015%和1.020%，可见超声提取效果与加热回流法相似，从操作方便角度考虑，选用超声处理。
2.5.2超声时间考察
取本品内容物约0.9 g，共4份，除分别超声处理10、20、30、45 min外，其余同2.3。进样分析表明，供试品超声30 min已基本提取完全（表1）。
2.6线性范围
取浓度为426 μg/ml的人参皂苷Rb1对照品溶液，分别进样10、20、50 μl分析；对照品溶液稀释10倍后，再分别进样10、20 μl分析。以峰面积为纵坐标(Y)，进样量（μg）为横坐标(X)进行线性回归，得回归方程为Y=235.30X-106 47, r=1.000 0。结果表明人参皂苷Rb1在0.426～21.3 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。
2.7精密度试验
精密量取人参皂苷Rb1对照品溶液（0.353 mg/ml）10 μl，进样分析6次，其峰面积的RSD为0.57%，符合要求。
2.8重复性试验
取同批号样品（批号011001）5份，按2.3制备供试品溶液，测定含量（表2）。
2.9加样回收率测定
取已测定含量的洋参虫草胶囊样品（批号011001）约0.4 g，共5份，精密称定，分别精密加入浓度约为0.88 mg/ml的对照品溶液5 ml，同2.3处理，进样分析，计算加样回收率（表3）。
2.10稳定性试验
精密吸取供试品溶液于0、2、4、6 h各进样1次，人参皂苷Rb1含量分别为1.02%、1.01%、1.02%、1.02%，结果表明样品溶液在6 h内保持稳定。
“百路达”银杏叶胶囊获加拿大注册批准上海信谊百路达药业有限公司主打产品“百路达”银杏叶胶囊于2014年6月6日获加拿大卫生部天然药品局批准（上市许可证号：202598，品种批准文号：NPN80051461），其产品实现年销售额超亿元，系国内同类产品中品牌影响力排名第一位。作为“上海市高新技术企业”，上海信谊百路达药业有限公司建立了以中国工程院侯惠民院士领衔的“院士专家企业工作站”，与第二军医大学、中国科学院昆明植物研究所等建立了联合实验室，并曾获得“国家重点新产品”、“国家十五火炬计划优秀项目奖”、“上海市重点新产品”、“上海市专利新产品”等众多奖项。（大公网）
2.11样品检测结果：
分别收集10批洋参虫草胶囊样品，按2.3操作，平行制备2份，分别精密吸取对照品溶液10 μl、供试品溶液10 μl，分别进行HPLC分析并计算含量（表4）。
2000年版中国药典一部西洋参药材[3]含量测定项下规定：本品含人参皂苷Rb1（C54H92O23）不得少于1.0%。本品处方（每1 000粒）中含西洋参量为266.7 g，其中人参皂苷Rb1占处方总量的0.67%。暂定每粒洋参虫草胶囊内含人参皂苷Rb1含量不得少于3.0 mg。
3讨论
目前，有关西洋参及其制剂的含量测定方法[4-10]报道较多，其中多数是以梯度洗脱法测定其中人参皂苷Rg1、Re、Rb1等含量。洋参虫草胶囊为上海中华药业有限公司自主研发产品，其中西洋参为君药，由于该处方中还含有冬虫夏草、龟板胶动物药材，对该品种的质量控制难度增加，为有效控制成品质量，在中国药典等文献基础上，探讨成品的含量测定方法。
首先，按照中国药典西洋参药材[3]含量测定项下的流动相要求，适当调节比例，结果样品不能达到基线分离，后加入适量磷酸，改善了这一情况；其次，对样品前处理方法进行了摸索，比较了加热回流法和超声法，确定用超声法进行处理，使操作更简单，便于控制，亦不影响样品中人参皂苷Rb1的提取和含量测定。结果表明本试验建立的人参皂苷Rb1含量测定方法稳定、简便、精密度高、重复性好，便于质量标准执行，为洋参虫草胶囊的质量控制提供了依据。
参考文献
[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典2010年版（一部）[M]. 北京: 中国医药科技出版社, 2010: 122-123.
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[9] 沈志滨, 朱俊访, 李博. HPLC法测定益气复脉口服液中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量[J]. 广东药学院学报, 2006, 22(3): 259-260, 267.
[10] 曾祥基. 人参皂苷的分离和定量测定[J]. 成都大学学报(自然科学版), 2003, 22(2): 1-9.
（收稿日期：2014-03-27）
“百路达”银杏叶胶囊获加拿大注册批准上海信谊百路达药业有限公司主打产品“百路达”银杏叶胶囊于2014年6月6日获加拿大卫生部天然药品局批准（上市许可证号：202598，品种批准文号：NPN80051461），其产品实现年销售额超亿元，系国内同类产品中品牌影响力排名第一位。作为“上海市高新技术企业”，上海信谊百路达药业有限公司建立了以中国工程院侯惠民院士领衔的“院士专家企业工作站”，与第二军医大学、中国科学院昆明植物研究所等建立了联合实验室，并曾获得“国家重点新产品”、“国家十五火炬计划优秀项目奖”、“上海市重点新产品”、“上海市专利新产品”等众多奖项。（大公网）
2.11样品检测结果：
分别收集10批洋参虫草胶囊样品，按2.3操作，平行制备2份，分别精密吸取对照品溶液10 μl、供试品溶液10 μl，分别进行HPLC分析并计算含量（表4）。
2000年版中国药典一部西洋参药材[3]含量测定项下规定：本品含人参皂苷Rb1（C54H92O23）不得少于1.0%。本品处方（每1 000粒）中含西洋参量为266.7 g，其中人参皂苷Rb1占处方总量的0.67%。暂定每粒洋参虫草胶囊内含人参皂苷Rb1含量不得少于3.0 mg。
3讨论
目前，有关西洋参及其制剂的含量测定方法[4-10]报道较多，其中多数是以梯度洗脱法测定其中人参皂苷Rg1、Re、Rb1等含量。洋参虫草胶囊为上海中华药业有限公司自主研发产品，其中西洋参为君药，由于该处方中还含有冬虫夏草、龟板胶动物药材，对该品种的质量控制难度增加，为有效控制成品质量，在中国药典等文献基础上，探讨成品的含量测定方法。
首先，按照中国药典西洋参药材[3]含量测定项下的流动相要求，适当调节比例，结果样品不能达到基线分离，后加入适量磷酸，改善了这一情况；其次，对样品前处理方法进行了摸索，比较了加热回流法和超声法，确定用超声法进行处理，使操作更简单，便于控制，亦不影响样品中人参皂苷Rb1的提取和含量测定。结果表明本试验建立的人参皂苷Rb1含量测定方法稳定、简便、精密度高、重复性好，便于质量标准执行，为洋参虫草胶囊的质量控制提供了依据。
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[10] 曾祥基. 人参皂苷的分离和定量测定[J]. 成都大学学报(自然科学版), 2003, 22(2): 1-9.
（收稿日期：2014-03-27）
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2.11样品检测结果：
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2000年版中国药典一部西洋参药材[3]含量测定项下规定：本品含人参皂苷Rb1（C54H92O23）不得少于1.0%。本品处方（每1 000粒）中含西洋参量为266.7 g，其中人参皂苷Rb1占处方总量的0.67%。暂定每粒洋参虫草胶囊内含人参皂苷Rb1含量不得少于3.0 mg。
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首先，按照中国药典西洋参药材[3]含量测定项下的流动相要求，适当调节比例，结果样品不能达到基线分离，后加入适量磷酸，改善了这一情况；其次，对样品前处理方法进行了摸索，比较了加热回流法和超声法，确定用超声法进行处理，使操作更简单，便于控制，亦不影响样品中人参皂苷Rb1的提取和含量测定。结果表明本试验建立的人参皂苷Rb1含量测定方法稳定、简便、精密度高、重复性好，便于质量标准执行，为洋参虫草胶囊的质量控制提供了依据。
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[7] 周新蓓, 欧阳荣, 邓桂明. 散血明目片中人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1及三七皂苷R1的含量测定[J]. 中成药, 2008, 30(5): 692-695.
[8] 沈岚, 冯怡, 徐德生, 等. 反相高效液相色谱法测定三七花中人参皂苷Rb1的含量[J]. 时珍国医国药, 2009, 20(6): 1482-1483.
[9] 沈志滨, 朱俊访, 李博. HPLC法测定益气复脉口服液中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量[J]. 广东药学院学报, 2006, 22(3): 259-260, 267.
[10] 曾祥基. 人参皂苷的分离和定量测定[J]. 成都大学学报(自然科学版), 2003, 22(2): 1-9.
（收稿日期：2014-03-27）
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