周建华 谢琦 王琪
摘 要 目的：探讨化学消毒剂的搭配和使用方法，以提高洁净区消毒效果。方法：通过表面消毒实验确认75%乙醇、异丙醇、0.1%新洁尔灭、1% 84消毒液、0.4%酸酚和5%杀孢子剂对各类微生物在玻璃、不锈钢和彩钢板上的消毒效力。结果：0.4%酸酚和5%杀孢子剂在三种表面材质上对各类微生物的杀灭效果最佳，0.1%新洁尔灭和1% 84消毒液次之，75%乙醇和异丙醇对芽胞杆菌和霉菌的杀灭效果较差，但腐蚀性最小。结论：在日常清洁中，可以选择消毒效力最强的0.4%酸酚和5%杀孢子剂交替使用，A级区域内可以选择75%乙醇和异丙醇交替使用。
关键词 消毒剂 洁净区 消毒效力
中图分类号：TQ460.82 文献标志码：A 文章编号：1006-1533（2018）11-0103-04
Selection of disinfectants for clean area and their effectiveness confirmation
ZHOU Jianhua*， XIE Qi， WANG Qi
（SPH No.1 Biochemical & Pharmaceutical Co.， Ltd.， Shanghai 200240， China）
ABSTRACT Objective： To study the compatibility and usage of the chemical disinfectants to enhance the effect of disinfection of clean area. Methods： Disinfection efficacy of six disinfectants including ethanol， isopropanol， benzalkonium bromide solution， 84 disinfectant， phenylphenol and sporicide at different concentrations against the tested microorganisms was verified by surface disinfection experiment. Results： Phenylphenol at 0.4% and sporicide at 5% possessed the best effectiveness of disinfection on the surface of all three materials， 0.1% benzalkonium bromide solution and 1% 84 disinfectant were the second， while 75% ethanol and isopropanol did not show good effectiveness of disinfection against bacillus and fungus tested but less corrosivity than the others. Conclusion： Phenylphenol at 0.4% and sporicide at 5% should be alternatively used in daily disinfection while 75% ethanol and isopropanol can be alternatively used in level A clean area.
KEy WORDS disinfectant； clean area； disinfection effectiveness
在无菌药品生产过程中，为了降低微生物污染的风险，最切实的工作就是针对洁净区的清洁和消毒。在《药品生产质量管理规范（2010年修订）》中，强调了洁净区清洁和消毒的重要性，并明确指出化学消毒的不可替代性，更规定了所使用的消毒剂种类必须多于一种[1]。
传统的洁净区消毒剂选择一般均采用常见的消毒剂进行搭配使用[2-3]，例如84消毒液、新洁尔灭、洗必泰等，而有些消毒剂被证明无法很好地杀灭能够形成芽胞的细菌[4]。随着科技的发展，化学消毒剂的相关技术也在不断进步[5]，因此，从降低风险的角度出发，必须要保证所选用的消毒剂能够对各类细菌都起到较好的杀灭效果。
由于洁净区环境、条件、设备材质的不同，为了更好地降低质量风险，保证消毒效果，不但需要积极尝试使用新型的消毒剂，并且要对新老消毒剂的消毒效果进行科学的评价[6]，依据评价的结果作出最佳选择。
消毒剂的消毒效力确认是用来评价消毒剂消毒效果的主要方式，有多种实验方法，包括采用稀释实验法，标准悬浮实验法，表面消毒实验法[7]等，各方法均能适用于对消毒剂效力的确认，本研究将以表面消毒实验法进行消毒剂效力的确认。
1 材料与方法
1.1 设备
ESCO生物安全柜（艺斯高（上海）贸易有限公司）；MIR-254恒温培养箱（松下冷链（大连）有限公司）；XG1.D脉动真空灭菌器（山东新华医疗器械股份有限公司）；0.22 mm无菌过滤器（颇尔过滤器（北京）有限公司）。
1.2 培养基和试验菌株
胰酪大豆胨琼脂培养基（上海中科昆虫生物技术开发有限公司）；沙氏葡萄糖琼脂培养基、氯化钠-蛋白胨（广东环凯微生物科技有限公司）；硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基（美国默克公司）；D/E肉汤（美国BD公司）。
所有试验菌株均购自中国食品药品检定研究院。将金黄色葡萄球菌（CMCC（B）26003）、铜绿假单胞菌（CMCC（B）10104）、枯草芽胞杆菌（CMCC（B）63501）接种至硫乙醇酸盐流体培养基于30～35 ℃培养18～24 h；将白色假丝酵母（CMCC（F）98001）接种至沙氏葡萄糖液体培养基于20～25 ℃培养24～48 h；将黑曲霉（CMCC（F）98003）接种至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基于20～25 ℃培养7 d，然后用无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（含0.05%吐温80，pH 7.0）3～5 ml将孢子洗脱并制成菌悬液；上述菌种均用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至浓度为107～108 cfu/ml的菌液。
1.3 消毒剂和中和剂
本实验所使用的消毒剂和中和剂[8]见表1。
1.4 中和剂验证实验
中和剂验证实验选用金黄色葡萄球菌作为试验菌，实验方法见表2。
1.5 消毒剂效力实验
实验按表3分为3组进行，其中实验组进行3份平行试验。
按消毒剂效力实验方法进行操作，其中细菌使用胰酪大豆胨琼脂培养基，真菌使用沙氏葡萄糖琼脂培养基，细菌于30～35 ℃下培养3 d，真菌于20～25 ℃下培养5 d，观察并计数。
消毒剂的表面消毒效力E=lg（阳性对照组菌落计数）-lg（实验组菌落计数）。当E>3时，即代表该消毒剂在所测试物体表面上可以杀灭99.9%以上的试验微生物。
1.6 表面材料的处理
表面材料为玻璃、不锈钢和彩钢板，均为1 cm×3 cm的长方形薄片。使用0.2 mol/L氢氧化钠对材料进行浸泡12 h以上，浸泡后清洗并于121 ℃灭菌30 min。
2 结果
2.1 中和剂验证
以金黄色葡萄球菌为试验菌，根据表1对中和剂的中和效果进行验证，结果表明，编号1、6、7、8均无菌生长；编号3、4、5均有菌生长，且菌落数相差在10%以内；编号3、4、5所生长的菌落数都多于编号2菌落数103以上（表4），表明所选择的中和剂能够起到预期的中和作用。
2.2 消毒剂效力
在3种表面材质上的实验结果见表5。结果表明，75%乙醇和异丙醇作为一种常用消毒剂，对枯草芽胞杆菌、黑曲霉的消毒效果都不理想，对其他微生物的消毒效果也略微弱于其他消毒剂，但这两种醇类消毒剂不具有腐蚀性，不易对不锈钢和彩钢板等金属材质造成损伤，比较适用于对精密设备和仪器进行消毒。
5%杀孢子剂的消毒效果最好，其次为0.4%酸酚，他们对各类微生物在3种不同表面材质上都能起到很好的杀灭作用。
为了降低洁净区内各类微生物污染的风险，同时考虑所应用的材质，根据消毒效力确认的结果，日常清洁消毒可以使用0.4%酸酚和5%杀孢子剂交替使用，在A级区内可以使用75%乙醇和异丙醇交替使用进行消毒。
3 讨论
由于长时间使用同一种消毒剂会使微生物产生耐药性，造成消毒效果下降[9]，因此，企业所使用的化学消毒剂不应一成不变。随着国内外化学消毒剂技术的不断进步，应当关注相关领域的发展，以便不断提高洁净区环境控制的管理水平。
对于消毒剂的优化选择有时不仅仅局限于其消毒效力，还应该从消毒剂本身的质量控制角度出发[10]，在日常环境监测数据统计和分析的基础上，选择更适合当前环境的消毒剂，同时做好相应的确认和验证，保证消毒剂的使用效果能够达到预期，并且在应用后对使用情况进行监测和回顾分析，有效降低洁净区微生物污染风险。
参考文献
[1] 药品生产质量管理规范（2010年修订）（卫生部令第79号）[EB/OL]. （2011-01-17）[2018-01-02]. http：//www.sda.gov. cn/WS01/CL0053/58500.html.
[2] 张卓娜， 邱天， 罗嵩， 等. 化学消毒剂有效成分应用情况调查[J]. 中国消毒学杂志， 2017， 34（10）： 925-927.
[3] 陈燕飞. 不同消毒剂对细菌的抑制作用[J]. 食品工程， 2012（2）： 28-30.
[4] 郑吟秋， 王云川， 何媛， 等. 5 种化学消毒剂对高等级生物安全实验室消毒效果研究[J]. 中国消毒学杂志， 2017， 34（10）： 905-908.
[5] 赵美丽. 国内外化学消毒剂应用的研究进展[J]. 社区医学杂志， 2011， 9（9）： 8-12.
[6] 罗艺. 洁净室消毒剂消毒效果的研究[J]. 轻工科技， 2016， 32（2）： 38-39， 41.
[7] Prince R. Microbiology in Pharmaceutical Manufacturing[M]. Surrey， UK： Davis Harwood International Publishing Ltd.， 2001： 437-450.
[8] 高东旗. 合理使用中和剂评价化学消毒剂的杀菌作用[J].医学动物防制， 2002， 18（1）： 31-33.
[9] 邢玉斌， 索继江， 贾宁， 等. 细菌的消毒剂耐药性[J]. 微生物学通报， 2006， 33（3）： 184-188.
[10] 李向梅， 张雪梅， 吴文琦. 制药企业用化学消毒剂的选择及使用方法研究[J]. 药学研究， 2013， 32（5）： 307-308.
