VEGF165-胰岛素复合凝胶对糖尿病大鼠局部深Ⅱ度烫伤创面MVD及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响

祁万强,薛晓东,阮涛,刘金科

(1.兰州大学第一临床医学院甘肃兰州730000;2.甘肃省人民医院整形科甘肃兰州730000)

VEGF165-胰岛素复合凝胶对糖尿病大鼠局部深Ⅱ度烫伤创面MVD及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响

祁万强1,薛晓东2,阮涛1,刘金科1

(1.兰州大学第一临床医学院甘肃兰州730000;2.甘肃省人民医院整形科甘肃兰州730000)

目的:制备外用VEGF165-胰岛素复合凝胶并观察其对糖尿病大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合的作用.方法:以新型凝胶卡波姆980为基质,分别加入VEGF165、胰岛素,分别配制成胰岛素凝胶、VEGF165凝胶、VEGF165-胰岛素复合凝胶和空白对照凝胶.观察各组凝胶性状,检测其pH值.75只SPF级雄性Wistar大鼠,体重190~290g,随机分为正常对照组、糖尿病对照组、胰岛素凝胶组、VEGF165凝胶组、VEGF165-胰岛素复合凝胶组,每组15只.各组大鼠禁食12h后,除正常对照组外,其余各组一次性腹腔注射链脲佐菌素(55 mg/kg)制备1型糖尿病模型,正常对照组大鼠注射相同剂量柠檬酸钠缓冲液.1型糖尿病大鼠造模成功后,采用恒温水浴箱80℃,制备深Ⅱ度烫伤模型.正常对照组、糖尿病对照组创面外敷空白凝胶基质,其余各组外敷对应凝胶制剂,每天换药1次.深Ⅱ度烫伤造模成功后观察各组大鼠存活情况,于3、7、11、15、21天时点观察糖尿病大鼠创面愈合情况并计算创面愈合率,在各时点随机处死每组3只大鼠取烫伤皮肤全层留取标本,行组织学切片及免疫组化染色观察各时点炎性细胞,微血管形成及胶原蛋白.结果:制备的各组凝胶透明,保湿性极佳,黏附性良好,便于涂抹及清洗,无组织毒性.各组大鼠无感染及死亡发生.3天后烫伤各组创面无明显缩小,7、11、15、21天时,VEGF165-胰岛素复合凝胶组创面愈合率最高,糖尿病组最低.VEGF165-胰岛素复合凝胶组愈合率与其余各组比较,差异均有统计学意义(<0.05).病理切片观察示各时点VEGF165-胰岛素复合凝胶组肉芽组织形成及上皮化均优于其余各组.免疫组化染色示各组微血管数量、Ⅰ型胶原蛋白阳性率均于3天开始表达,且随时间阳性细胞增多明显;各时间点VEGF165-胰岛素复合凝胶组微血管密度及Ⅰ型胶原蛋白最高,糖尿病组最低,与其余各组比较以及VEGF165-胰岛素复合凝胶组、糖尿病组间比较差异均有统计学意义(<0.05).结论:糖尿病大鼠皮肤深Ⅱ度烫伤外用VEGF165-胰岛素复合凝胶对创面愈合有明显的促进作用

VEGF;胰岛素;卡波姆凝胶;糖尿病大鼠;创面愈合

随着社会的发展,人们的物质生活越来越丰富,糖尿病发病率也随之提升,临床上糖尿病合并皮肤烧伤患者创面难愈合已经成为当前急需解决的医学难题.有研究证实,糖尿病合并创面难愈合主要是皮下组织中糖增高和真皮层晚期糖基化终末产物(advanced glycation endproducts, AGEs)的堆积所致的皮肤微环境改变[1-2],这种变化使创伤后各种促愈合的细胞因子减少,其中血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowth factor,VEGF)对于微血管的生成起决定性调控作用,而微血管的生成对于创面愈合至关重要.大量动物实验也证明,细胞因子和胰岛素的联合应用可加快促进糖尿病大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合[3-5]时间.但对于糖尿病合并烧烫伤外用VEGF的研究报道较少,本实验通过外用VEGF165-胰岛素观察糖尿病大鼠烫伤创面愈合过程中微血管密度( microvessel density,MVD)及Ⅰ型胶原蛋白阳性表达情况,为临床治愈创面提供进一步研究数据.

1 实验材料和方法

1.1 实验仪器及试剂:光学显微镜(奥林巴斯中国公司),电动离心机(华威中仪科技公司,北京),微量移液器(求精生化试剂仪器公司,上海),恒温水浴箱(上海比朗仪器公司),磁力搅拌器(汇尔仪器公司,杭州),PH计(美尼特自动化仪表公司,杭州),快速血糖检测仪(glucotrend公司).CD34免疫组织化学染色试剂盒及胶原蛋白Ⅰ型多克隆抗体(北京博奥森生物公司,中国),链脲佐菌素(STZ, streptozotoein,sigma公司,美国),血管内皮生长因子165(VEGF165,vascular endothelial growth factor,peprotech公司,美国),低精蛋白锌胰岛素(万邦生化医药公司,江苏),卡波姆980(天力源科技公司,青岛)等.

1.2 研究对象:75只雄性成年wistar大鼠(甘肃省中医学院动物实验中心提供),体重:190~290g.实验动物质量合格证编号:SCXK(甘)2011-001.单笼5只饲养,饲养7天后开始造模.

1.3 实验分组:75只雄性成年wistar大鼠随即分成6组,A组(正常对照组),其余60只糖尿病大鼠随机分为B组(糖尿病对照组)、C组(胰岛素凝胶治疗组)、D组(VEGF165凝胶治疗组)、E组(VEGF165-胰岛素复合凝胶治疗组),每组15只大鼠.

1.4 药物配制

1.4.1 柠檬酸缓冲液的配制:A液的配制:准确称取柠檬酸2.1g缓慢加入蒸馏水100ml充分溶解;B液的配制:准确称取柠檬酸钠2.94g缓慢加入蒸馏水100ml充分溶解.配制成的A、B液分别密封冰箱冷藏保存,用时将A、B液按1:1.32混合,用pH计测量调整混合液pH值为4.2~4.5,即为STZ所需柠檬酸缓冲液.

1.4.2 VEGF165-胰岛素凝胶制备:取干燥小烧杯缓慢加入30ml蒸馏水,用电子天平准确称取0.6g卡波姆980,缓慢倒入蒸馏水中,勿搅拌摇匀.密封后放置12h后可见卡波姆呈絮状充分溶于蒸馏水中,未凝结成块.用微量移液器缓慢加入1 000μl蒸馏水于VEGF165 2μg试剂瓶中,待充分溶解后,用微量移液器取出500μl混合液和胰岛素注射液1 600U,共同加入卡波姆絮状液中,磁力搅拌器充分搅拌均匀,缓慢滴入三乙醇胺溶液调节pH值至7.4~7.5.当三乙醇胺加入后混合溶液马上变为粘稠凝胶状,含大量气泡,搅拌无法消除.取配制好的VEGF165-胰岛素复合凝胶,电动离心机离心30min去除大气泡后,冰箱低温保存备用.制备胰岛素凝胶、VEGF165凝胶及空白凝胶方法同上.

1.5 实验方法

1.5.1 建立糖尿病大鼠模型:实验用成年健康大鼠禁食前1天用血糖检测仪检测大鼠血糖值在正常范围(3.0~5.0mmol/L).给予充足饮水禁食12h以上后称取大鼠体重,按每组大鼠体重计算所需STZ (55mg/kg)用量,采用一次腹腔快速给药法[6],正常组15只大鼠腹腔注射相同剂量柠檬酸缓冲液,以消除柠檬酸缓冲液对实验结果的影响,注射后48h后用注射针头刺破大鼠尾静脉,取血液测量血糖,未禁食状态下血糖≥16.7mmol/L为造模成功,血糖未达上述标准的大鼠,3天后补充腹腔注射STZ10~15mg/kg.7天后血糖稳定,大鼠毛发,饮食、饮水量,行为活动发生明显改变后1型糖尿病大鼠模型造模成功.对血糖浓度太高无法检测得到具体数据的糖尿病大鼠,皮下注射一定量的胰岛素,以防血糖过高致大鼠死亡.

1.5.2 糖尿病大鼠烫伤模型制备:造模24h前,用配制好的的脱毛膏(皂粉、硫化钠、淀粉以1:3:6)在每只大鼠背部形成一个足够大的裸露区.根据参照文献[7],恒温水浴箱加热致温度80℃备用,按照各个大鼠体重,腹腔注射2%戊巴比妥钠(0.2ml/100g)麻醉后,把其腹部向上固定于中央为4cmX4cm圆形空洞,厚度为2cm的木板上,松紧适宜,大鼠背部裸露区放置在空洞之中,将载有大鼠的木板浸泡在恒温水浴箱中,恒温水正好淹没大鼠裸露皮肤.放置时间A组6S,B、C、D、E组各放置5s,烫伤后立即腹腔注射乳酸林格液10ml后,用生理盐水纱布包裹烫伤部位,大鼠逐渐苏醒后单笼单只喂养,各组大鼠给予足量食物及饮水,垫料每天更换以保持鼠笼干燥,记录大鼠饮水量、体重及进食量.烫伤后1天肉眼观察各组大鼠背部创面微潮,部分大鼠创面出现大小一致的小水泡,发红肿胀,取大鼠烫伤皮肤组织行HE染色后镜下观察证实为深Ⅱ度烫伤.

1.5.3 药物治疗:糖尿病大鼠深Ⅱ度烫伤模型制备成功后,行干预治疗措施,A、B组创面分别外敷空白凝胶,C组外敷胰岛素凝胶、D组外敷VEGF165凝胶及E组外敷VEGF165-胰岛素复合凝胶,每天换药1次直至实验结束,换药前用医用棉球轻轻擦洗大鼠创面凝胶,最好用生理盐水清洗创面.除A、B组大鼠外,其余大鼠每天检测血糖,腹部皮下注射中长效胰岛素4~6U/kg,使血糖控制在正常范围[8].

1.5.4 标本采集:烫伤大鼠分别在第3天、7天、11天、15天及21天时点随机选取每组3只大鼠,采用腹腔注射利多卡因麻醉后行颈椎脱臼法处死,固定到一木板上,手术刀切开大鼠创面边缘皮肤,锐性剥离烫伤全层组织,剪成5mm条索状,用10%甲醛固定,石蜡包埋,切片,用于免疫组化.

1.5.5 烫伤面积愈合率的计算:造模成功采用透明膜描记加称重法计算烫伤大鼠创面愈合率,大鼠烫伤24h后,先取透明膜描计各组创面轮廓,剪取同样大小面积,质地均匀的胶片用电子天平称重,其重量为大鼠创面原始烫伤面积,采用相同描计方法计算大鼠未愈创面,把胶片的重量带入下列公式进行计算,创面愈合率=[(原始面积胶片重量-未愈面积胶片重量)/原始面积胶片重量]X100%.

1.5.6 烫伤组织微血管密度:各时点10%甲醛固定标本组织,石蜡包埋,切片成功后,严格按照CD34免疫组化步骤进行操作,给大鼠各时点切片染色后,显微镜下观察到棕黄色为血管内皮细胞阳性染色,每张染色片在10X40倍取6个视野计数微血管密度(MVD)数量,计算平均值作为新生血管形成指标.采用Pareek[9]方法计算MVD.

1.5.7 烫伤组织Ⅰ型胶原蛋白:取大鼠各组各时点部分切片,行大鼠Ⅰ型胶原免疫组化染色,显微镜下观察,阳性产物为棕黄色或黄色.在10X40倍镜下,创面随机选取5个视野,应用图像分析软件计算得出Ⅰ型胶原的阳性面积,取其均值.

1.5.8 统计学方法:采用SPSS17.0统计软件进行数据分析,以均数±标准差的方式表示,各组间的比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK检验;检验水准α=0.05.

2 结果

2.1 各组烫伤糖尿病大鼠各时点血糖测定:见表1.

2.2 糖尿病大鼠创面愈合观察:糖尿病大鼠烫伤24h后,烫伤面积与模板面积大小一致,烫伤边缘与周围正常组织界限清楚,界限明显发红,水肿.烫伤3天后各组大鼠创面均未见缩小,创面皮温增高,有大量渗出液,部分渗出物结痂,用生理盐水棉球轻轻去除渗出物后可见创面基地部呈红白相间,水肿较明显,痛觉较为迟钝.其中B组大鼠创面渗出明显较多,水肿也最为明显,A、C、D组大鼠次之,三组之间无明显差异,E组大鼠相对其它组渗出物较少.各组大鼠创面渗出物部分结痂,结痂物周围颜色轻微黄,质稀薄,无特殊气味.烫伤15天,愈合面积E>D>C>A,除B组外,其余各组大鼠创面周围及毛囊边缘创面已部分愈合,其中E组大鼠创面皮肤角化形成良好.B组大鼠创面开始愈合,可见边缘上皮组织向中央爬行.烫伤21天,E组大鼠烫伤创面大部分基本已愈合,仅烫伤中央留少量未愈创面,愈合创面新生成的皮肤组织角化形成良好,可见密集细小的毛发生长,C、D组也大部分愈合,但中央存留未愈面积较E组大,皮肤角化形成好,见细小少量毛发生长,A组较C、D、E组愈合差,B组创面是各组愈合中最差.各组大鼠实验中均无死亡及感染.

2.3 微血管密度(MVD)的检测:CD34免疫组化均成阳性在烫伤后各组大鼠时点均表达,但随时间增长E组大鼠阳性细胞最多,其余各组次之,B组阳性表达最少.11天时E组大鼠阳性表达达最大值,其余各组大鼠于15天时达高峰(见图1).B、E组大鼠各观测时点与其他各组大鼠相比较,差异均有统计学意义,即:<0.05.烫伤3天时,A、C、D组大鼠CD34阳性表达率比较差异无统计学意义,即>0.05.从烫伤7天开始,烫伤创面C、D组大鼠组织CD34阳性细胞表达均高于A组,存在明显差异性,即<0.05. C、D组糖尿病大鼠创面CD34阳性细胞表达各观测时点比较差异不明显,无统计学意义,即:>0.05.见表2.

2.4Ⅰ 型胶原表达的测定:烫伤3天后C、D组大鼠创面Ⅰ型胶原蛋白阳性表达无显着差异,但随时间延长,Ⅰ型胶原阳性细胞逐渐增多,E组大鼠创面组织含量最高,其余各组次之,B组大鼠创面胶原含量最少.烫伤7、11、15天,除E组大鼠外,其余各组主要表达于肉芽组织及血管内皮细胞周围,E组大鼠在7、11天时表达于肉芽组织及血管内皮细胞周围,15天时Ⅰ型胶原蛋白阳性表达在真皮层沉积,呈小团块无序线性排列(见图2).21天时各组Ⅰ型胶原均主要在新生上皮基底细胞表达,C、D组真皮层可见大量胶原,数量多且粗大,B组真皮层胶原含量最少,A组胶原含量次于C、D组,而E组真皮层缺损处可见大量胶原纤维填充,创面部分轻微挛缩.E组糖尿病大鼠烫伤组织Ⅰ型胶原蛋白阳性表达从烫伤3天开始与其他组相比较有明显的差异性,而B组大鼠表达最低,E、B组比较及两组与其余各组大鼠比较均存在差异性(<0.05);烫伤7、11、15、21天时,A组Ⅰ型胶原蛋白阳性表达均低于C、D、E组(<0.05),烫伤3天时,Ⅰ型胶原蛋白阳性表达A组与C、D组比较无明显差异性(>0.05),各检测时点Ⅰ型胶原蛋白阳性表达C、D组间比较均无差异均性(>0.05).见表3.

图1 伤后15天各组大鼠创面CD34免疫组化微血管阳性(SPX400)表达情况

图2 伤后15天各组大鼠创面Ⅰ型胶原阳性(SPX400)表达情况

表1 各组大鼠各时相点血糖(mmol/L)

表2 各组大鼠不同时相点微血管密度表达(n=3,条/mm2,±)

表3 各组大鼠不同时相点Ⅰ型胶原密度表达(n=3,条/mm2,±)

3 讨论

创面愈合是一个连续的由多个互相交叉重叠过程组成,需通过各种细胞相互活动,相互影响来协同完成.这些活动并非随意发生,而是有序地进行调节,与伤口中不同类型细胞的参与有关[10].而实验证实,糖尿病患者皮肤组织血糖与细胞因子水平呈负相关、过度的蛋白酶分解以及皮下神经、血管病变等诸多因素,导致了皮肤创面不愈或延迟愈合[11-13].

研究表明,糖尿病大鼠皮肤深Ⅱ度烫伤创面局部组织VEGF含量低下导致血管分化低下,致创面血供明显少于非高血糖组织,肉芽组织形成迟缓等变化,呈现创面不愈或难愈的特征[14].近年,糖尿病合并烫伤创面难愈合研究发现,局部细胞因子含量对创面愈合影响至关重要,其中VEGF是非常重要的因子之一.VEGF是能够刺激内皮细胞的增殖,又能促进血管保持正常状态[15].在血管形成发展过程中,缺氧诱导因子-1(HIF-1)是转录活化编码VEGF基因的活化因子,从而刺激血管形成[16-17].而HIF-l的活性[18]由缺氧诱导因子-1a(Hypoxia inducible factor-1a,HIF-1a)决定.组织中HIF-1a含量升高将抑制HIF-l的活性,糖尿病慢性创面引起了组织缺血缺氧,使创面组织中HIF-1a分泌增加,致VEGF含量减少[19]从而导致创面的愈合延迟或不愈合.乔亮等[20]利用荧光微球对糖尿病大鼠深Ⅱ度烫伤创面血管化进行观察,得出创面新生血管化程度、数量及质量与对照组相比明显降低.由此推断糖尿病创面VEGF浓度较正常创面降低,使其无法促进血管生成,致新鲜肉芽组织明显缺乏.本实验就是利用糖尿病大鼠皮肤组织中HIF-1活性抑制,VEGF含量不足,外用VEGF刺激内皮细胞增殖、迁移和体表血管生成,初步证实外用一定浓度的VEGF165-胰岛素复合凝胶对创面愈合有明显的促进作用.

创面愈合中胶原的形成也非常重要,胶原由成纤维细胞分泌,参与组成肉芽组织,以覆盖创面,促进创面愈合.胶原蛋白的生成与成纤维细胞增殖呈正相关.成纤维细胞在伤口4~5天开始通过有丝分裂增殖、分化,并合成和分泌大量的胶原纤维和基质成分,与新生毛细血管、巨噬细胞、中性粒细胞及淋巴细胞等炎性细胞共同组成肉芽组织,填充组织缺损,覆盖创面,为表皮细胞的生成创造条件[21].成纤维细胞合成的胶原是细胞外基质的主要组分,胶原形成数量直接影响创面的修复质量和愈合时间.在成纤维细胞分泌合成的胶原中,在皮肤组织中起主要作用的是I、Ⅲ型胶原,Ⅰ型胶原纤维位于真皮层,起支持作用,而Ⅲ型胶原呈网状结构环绕在外周决定胶原纤维的弹性[22].而糖尿病大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合过程中,成纤维细胞有丝分裂的S期数量及质量明显低于正常大鼠,成纤维细胞的DNA合成水平明显下降,表明在皮肤组织高血糖状态下成纤维细胞的增殖明显放缓[23].这与本实验B组大鼠检测胶原蛋白免疫组化阳性细胞数量明显偏少是一致的.同时有研究也表明,VEGF对增生性瘢痕形成有促进作用[24],VEGF及其受体在增生性瘢痕组织中表达活跃.岳毅刚等[25]利用血管内皮生长因子单克隆抗体局部注射治疗增生性瘢痕,结果显示瘢痕体积明显减少,组织内血管数量减少,胶原纤维明显减少,大剂量尤为明显.这表明VEGF可以促进创面胶原蛋白生成.

研究证实,视网膜mü ller细胞在高浓度的胰岛素作用下能促进的VEGF高表达[26],这说明胰岛素可能抑制组织中HIF-1a的活性,促进HIF-1在组织水平升高,从而刺激VEGF增高,促进血管生成.胰岛素外用于创面可调节创面周围物质代谢, Zhang等[27]用小剂量胰岛素治疗烫烧大鼠,运用同位素追踪技术测量蛋白质,结果发现胰岛素治疗组创面中蛋白质的含量明显高于对照组,且炎症反应轻,低血糖反应发生率低,进一步证实胰岛素能加速创面愈合.本实验也证实了这点,C组创面愈合率、愈合时间、MVD、Ⅰ型胶原蛋白等指标均优于于B组大鼠和A组大鼠.

本实验设计采用空白凝胶、含胰岛素凝胶、含VEGF165凝胶和含VEGF165-胰岛素凝胶作为分组,以抵消卡波姆凝胶本身对创面愈合的影响.而卡波姆对活体细胞及组织无任何损害,以卡波姆凝胶作为VEGF165、胰岛素的赋形剂,既方便了创面敷药物的操作性,同时也保证了一定时间内局部创面VEGF165、胰岛素浓度的持续性和稳定性.同时凝胶还可以为创面提供温暖、湿润的局部微环境,在一定程度上能够保护创面及促进愈合[28].卡波姆溶于水呈酸性,直接用于创面治疗,酸性pH值对愈合影响巨大[29].人体生理条件下微环境pH值通常维持在7.35~7.45之间,微碱性,因此本实验将实验组及对照组凝胶的pH值设置接近人体.通过实验,卡波姆凝胶应用到烫伤创面能有效保护创面,防止感染,不对创面造成二次损伤,达到了本次实验作为基质运用的效果.

本实验结果表明:保持一定稳定浓度的VEGF165、胰岛素外用对深II度烫伤的糖尿病大鼠创面愈合有显着地促进作用.创面外敷VEGF165-胰岛素凝胶后,创面愈合时间明显提前,创面愈合率比同期对照组高.早期胶原蛋白含量及毛细血管数量明显增多,上皮化时间早,新生表皮厚度大于同期对照组.创面局部胶原蛋白、新生毛细血管的阳性数量表达远高于同期对照组.

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Impact VEGF165-insulin composite gel in diabetic rats localⅡdeep degree burn wounds expression of MVD and collagenⅠ

QI Wan-qiang1,XUE Xiao-dong2,RUAN Tao1,LIU Jin-ke1
(1.The First Clinical Medical College of Lanzhou University,Lanzhou 730000,Gansu,China; 2.Department of Plastic Surgery,Gansu Province People's Hospital,Lanzhou 730000,Gansu,China)

ObjectivePreparation of topical gel VEGF165-insulin complex and observe its deepⅡde-gree burn wound healing in diabetic rats role.MethodsCarbomer with new gel matrix,were added to VEGF165,insulin,insulin were formulated into a gel,VEGF165 gel,VEGF165-insulin composite gel and control gel.Gel characters of each group,the pH value of the detection.75 SPF male Wistar rats weighing 190~290g,were randomly divided into normal control group,diabetic control group,insulin gel group,VEGF165 gel group,VEGF165-insulin gel composite groups 15.Inaddition to the normal control group,the other groups of rats were fasted 12h after intraperitoneal injection of streptozotocin(55mg/kg)Preparation of type 1 diabetes model,normal control rats injected at the same dose fasting sodium citrate buffer fluid.Type 1 diabetes in rats after successful modeling,using heated water bath 80℃,the preparation of deepⅡdegree burn model.Normal control group,diabetic control group topical wound gel matrix blank,the rest of the group corresponding topical gel formulation,dressing once a day.DeepⅡdegree burns after a successful modeling survival of the rats was observed at 3,7,11,15,21d point of wound healing in diabetic rats and calculate the rate of wound healing in each group were sacrificed at each time point 3 rats take full thickness skin burns specimens were taken for histological sections and immunohistochemical staining of inflammatory cells at each time point,angiogenesis and collagen.Results Each group prepared a transparent gel,moisturizing excellent,good adhesion,easy painting and cleaning,no tissue toxicity.The rats without infection and death.3d no after burn wounds in each group was significantly reduced,7,11,15,21d when VEGF165-insulin compound gel group the highest rate of wound healing,diabetic group was the lowest,VEGF165-insulin compound gel group healing rate with the rest of the group,the difference were statistically significant(<0.05).Histopathological examination shows each time point VEGF165-insulin compound gel group granulation tissue formation and epithelialization were better than the rest of the group.Immunohistochemical staining showed that the number of microvessels in each group,Ⅰcollagen expression positive rates start at 3d,and the positive cells was significantly increased with time;each time point VEGF165-insulin highest composite gel group microvessel density and collagen typeⅠdiabetes lowest group,with other groups and VEGF165-insulin compound gel group,the difference was statistically significant(<0.05) between the diabetic group.ConclusionDiabetic rat skin deepⅡdegree burns topical gel VEGF165-insulin complex on wound healing have significant role in promoting

VEGF;insulin;carbomer gel;diabetic rats;wound healing

R587.1

A

1008-6455(2014)21-1799-07

2014-09-27

2014-11-13

编辑/张惠娟

薛晓东,男,教授,主任医师,硕士研究生导师;擅长危重烧伤的救治,难愈性创面的治疗和各种美容整形手术.甘肃省人民医院整形科,兰州市城关区东岗西路204号,邮编:730000