脂氧素对子前期大鼠治疗的研究*

张俊农贺鹤董微

妊娠期高血压疾病是产科最常见的合并症，也是导致孕产妇和围生儿患病率及死亡率增加的常见原因之一。其确切病因和发病机制的研究一直是妇产科领域的重要研究课题。目前比较公认的发病机制是内皮细胞激活和损伤学说。现今医学对其治疗以解痉降压、适时终止妊娠为主，缺乏有效的早期治疗手段。探索妊娠期高血压疾病早期治疗的途径成为国内外学者关注的热点。有研究表明，静脉注射脂氧素（lipoxins，LX）A4会使有高血压疾病的小鼠全身和局部血压下降，而对正常大鼠血压并无影响，这对于子前期的治疗具有重要意义[1]。本研究旨在研究LXA4对子前期大鼠的治疗效果。

1 材料与方法

1.1 实验动物选择3～4个月龄的SPF级雌性SD大鼠30只，另选择3～4个月龄的SPF级雄性SD大鼠15只，按雄雌比1∶2的比例进行雌雄合笼，以发现雌性大鼠阴栓当日记为孕第1天，随机将妊娠大鼠分为正常组、内毒素组和LX组（内毒素+LXA4），每组10只。

1.2 研究方法

1.2.1 模型制备测孕前及妊娠第8天上午9：00～12：00基础血压、大鼠体质量及24 h尿蛋白，妊娠第14天给内毒素组和LX组大鼠尾静脉注入内毒素1.0 μg/kg，输入速度为2 mL/h，继续测量孕鼠妊娠第15、18天血压及24 h尿蛋白，自第15天逐渐升高，且第15、18天24 h尿蛋白明显增加，表现为高血压、蛋白尿及炎症反应的激活，与子前期表现一致，表明建模成功。妊娠第14天，LX组尾静脉注入LXA4注射液0.7 mg/kg，正常组和内毒素组大鼠尾静脉注射等量的生理盐水。

1.2.2 测量指标于妊娠第20天手术取出子鼠，测量新生鼠体质量。同时从大鼠腹主动脉采血5 mL,置入含抗凝剂的试管中，室温下2 000 r/min离心5 min，取上清液，-20℃保存待用。采用硝酸还原酶法测定NO浓度，试剂购自南京建成生物有限公司。应用双抗体夹心法测定标本大鼠LX水平。酶联免疫吸附实验(ELISA）试剂盒购自美国R&D公司。方法：在酶标板加样50 μL，加稀释液40 μL及待测样品10 μL，经温育洗涤后，每孔依次加入显色剂A50 μL，B50 μL，37 ℃避光显色15 min，加终止液50 μL终止反应（此时蓝色立转黄色），450 nm波长依序测量各孔的光密度（OD）值。

1.3 统计学方法采用SPSS 12.0软件包进行统计学分析，计量资料以± s表示，2组比较用t检验，多组间比较采用方差分析及LSD-t检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 孕鼠孕前与孕第8天指标比较 3组于孕前及受孕第8天时平均动脉压、大鼠体质量、24 h尿蛋白及基础脂氧素水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05），见表1。正常组、内毒素组和LX组孕第8天体质量高于孕前（t分别为2.75、2.91、2.63，P<0.05），3组孕第8天的脂氧素水平均高于孕前（t分别为3.84、7.84、9.13，P<0.05）。

Table 1 Comparison of index before pregnancy and 8 days afer conception表1 孕前与孕第8天各指标比较(n=10± s)

均P>0.05，1 mm Hg=0.133 kPa

组别正常组内毒素组LX组F孕前平均动脉压(mm Hg)128.34±10.11 129.28±10.09 128.68±11.03 2.89体质量(g)269.02±17.31 270.45±16.54 270.38±16.40 3.00 24 h尿蛋白(mg)0.014±0.001 0.013±0.003 0.015±0.002 2.95脂氧素(ng/L)33.27±1.88 34.25±1.96 33.59±1.78 2.77组别正常组内毒素组LX组F孕第8天平均动脉压(mm Hg)129.29±9.98 127.57±10.12 128.34±10.09 3.11体质量(g)275.12±18.12 277.36±17.92 275.56±19.24 2.93 24 h尿蛋白(mg)0.013±0.000 0.014±0.001 0.013±0.000 2.88脂氧素(ng/L)40.88±1.97 41.22±2.01 41.99±2.30 2.56

2.2 各组孕第8天、第15天与孕第18天指标比较内毒素组孕第15天平均动脉压及24 h尿蛋白与孕第8天时比较明显升高（t分别为3.2，36.69，P<0.05）；LX组于孕第15天时平均动脉压及24 h尿蛋白较第8天有所升高，差异有统计学意义（t分别为3.4，46.17，P<0.05）。孕第18天时，LX组平均动脉压和24 h尿蛋白较孕第15天时均有下降（t分别为3.5，37.43，P<0.05），也低于内毒素组（P<0.05），且内毒素组脂氧素水平较正常组及LX组水平下降，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

Table 2 Comparison of pregnant index of 15 days and 18 days after conception表2 孕第15天及孕第18天各指标比较 (n=10±s)

＊＊P<0.01，a与正常组比较P<0.05，b与内毒素组比较P<0.05，表3同

组别正常组内毒素组LX组F孕第18天平均动脉压(mm Hg)129.24±9.98 139.29±10.13a 128.12±10.24b 347.88＊＊24 h尿蛋白(mg)0.012±0.002 0.091±0.007a 0.017±0.003b 221.38＊＊脂氧素(ng/L)50.92±3.11 41.98±3.36a 53.35±3.18b 259.28＊＊组别正常组内毒素组LX组F孕第15天平均动脉压(mm Hg)125.23±8.24 135.68±9.97a 135.98±7.49 111.90＊＊24 h尿蛋白(mg)0.011±0.001 0.085±0.006a 0.086±0.005 189.05＊＊

2.3 3组间子鼠体质量和孕鼠NO水平比较孕第20天时，LX组NO浓度较内毒素组升高（P<0.05），与正常组比较差异无统计学意义（P>0.05）。正常组与LX组子鼠体质量均高于内毒素组(P<0.05)，LX组与正常组比较差异无统计学意义，见表3。

3 讨论

3.1 脂氧素的生物学作用 LX是20世纪80年代被发现的二十烷类中一类花生四烯酸代谢产物，能有效调节细胞炎性氧化损伤[2]。阿司匹林诱生的脂氧素，通过与细胞表面高亲和力的脂氧素受体结合发挥生物效应，其广泛分布于骨髓源性细胞。已有的研究表明，利用人工合成的脂氧素稳定的同系物如15-环己基-LXA4等已成功地治疗了动物实验性关节炎、肾小球肾炎、急性肺损伤等免疫炎性疾病[3]。脂氧素通过抑制其细胞因子表达来抑制促炎细胞活性。还能抑制血管内皮生长因子引起的新生血管形成[1，4]。研究表明，脂氧素调节免疫反应的机制不同于白细胞介素(IL)-10、地塞米松等免疫抑制剂，并不影响机体正常的免疫反应[5]。作为一种新的免疫调节剂，其应用前景十分广阔。

Table 3 Comparison of body weights of newborn rats and NO levels of pregnant rats between three groups表3 3组孕第20天子鼠体质量及孕鼠NO水平比较(n=10± s)

组别正常组内毒素组LX组F子鼠体质量（mg）3.69±0.39 2.44±0.39a 3.64±0.31b 336.12＊＊NO（μmol/g）14.57±3.53 9.75±6.40a 12.64±4.51b 229.90＊＊

3.3 前景脂氧素病生理作用受何种机制调控，其对妊娠期高血压疾病治疗的影响等，还需要进一步深入研究。开发稳定且可以通过胎盘屏障的脂氧素同系物，研制具有临床应用价值，安全可靠的新型抗炎、免疫调节的多效药物，可以为攻克妊娠期高血压疾病这一顽疾开辟崭新的道路。

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