罗春英，黄炳臣，黄琴，陈家兴，陆海善，韦叶生，王俊利，黄照权
大肠癌组织癌细胞中P-选择素的表达及其临床病理意义
罗春英1，黄炳臣1，黄琴2，陈家兴2，陆海善1，韦叶生3，王俊利3，黄照权1
目的探讨P-选择素蛋白在大肠癌组织癌细胞中的表达及其临床病理意义。方法运用免疫组织化学法，采用P-选择素抗体检测116例大肠癌组织和57例癌旁正常组织P-选择素的表达情况，比较和分析P-选择素在大肠癌组织癌细胞和正常肠黏膜组织中的表达差异及其临床病理意义。结果P-选择素在大肠癌组织中的癌细胞、血管内皮细胞均有表达。肿瘤细胞P-选择素阳性表达率（77.6%，90/116）明显高于癌旁正常肠黏膜组织中腺上皮细胞P-选择素的阳性表达率（17.5%，10/57），差异有统计学意义（χ2=56.49，P＜0.05）。然而，肿瘤细胞P-选择素阳性表达率在不同肿瘤直径、分化程度、浸润深度和有无淋巴结转移患者间比较差异无统计学意义（80.6%vs. 74.1%、79.0%vs. 74.3%、78.4%vs. 76.9%、82.7%vs. 73.4%，均P＞0.05）。结论大肠癌肿瘤组织中癌细胞表达P-选择素是该肿瘤的重要特征。
结直肠肿瘤；P选择素；免疫组织化学；大肠癌
近十年来，我国大肠癌的发病率和死亡率均呈逐年上升趋势，严重威胁人类健康［1］。黏附分子受体P-选择素存在于血管内皮细胞和血小板中，通过与其配体结合，介导粒细胞、单核细胞和肿瘤细胞与血管内皮细胞、血小板的黏附，在炎症、血栓形成、肿瘤血道转移中起重要作用。有文献报道，结直肠癌患者术前血清中可溶性P-选择素水平显着高于健康体检者，且术后3个月可溶性P-选择素水平明显下降，认为血清中P-选择素水平可反映结直肠癌的浸润和转移的程度［2］。本研究从组织学层面，采用免疫组织化学法检测116例大肠癌组织和57例癌旁正常肠黏膜组织中P-选择素的表达情况，探讨P-选择素在大肠癌组织癌细胞中的表达情况及其对肿瘤细胞生长、浸润和转移的意义。
1材料与方法
1.1材料取右江民族医学院附属医院2011年1月—2012 年1月间病理诊断为大肠癌的手术切除、经10%中性福尔马林固定、石蜡包埋的病理标本116例和癌旁正常肠黏膜组织57例，所有患者术前均未接受放、化疗或免疫治疗。116例患者中男89例，女27例；年龄22～92岁，平均（56.7±4.9）岁； 60岁者58例，＜60岁者58例；肿瘤直径＜5 cm者62例， 5 cm者54例；经病理医师光学显微镜下观察，高分化腺癌81例，中-低分化腺癌35例；肿瘤浸润肌层者51例、浸润至浆膜层者65例；淋巴结转移52例，无淋巴结转移64例。
1.2试剂及方法P-选择素单克隆抗体购于R&D Systems公司，二抗、DAB购于北京中杉金桥生物技术有限公司。免疫组化采用EnVision两步法。主要操作步骤：（1）石蜡切片，脱蜡至水。（2）抗原修复。采用枸橼酸缓冲液高压抗原修复，高压锅喷气2 min，放置冷却至室温。（3）3%H2O2室温孵育10 min阻断内源性过氧化酶活性。（4）切片滴加非免疫牛血清室温下10 min，以封闭非特异性抗原反应。（5）滴加25 mg/L的鼠抗人P-选择素单克隆抗体，4℃下孵育过夜。然后用PBS缓冲液冲洗3次，每次3 min。（6）每张切片滴加二抗多聚复合物，室温下孵育15 min。PBS冲洗3次，每次3 min。（7）DAB显色、苏木素复染及中性树脂封片。用已知阳性切片作为阳性对照，以0.1 mol/L PBS代替一抗作为阴性对照。1.3结果判断P-选择素阳性信号定位于细胞浆和（或）细胞膜，呈棕黄色颗粒。阳性细胞数＜10%为阴性病例；阳性细胞数 10%为阳性病例。
1.4统计学方法采用SPSS 17. 0统计学软件进行分析，两样本间率的比较采用四格表资料的χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 P-选择素在大肠癌组织和癌旁正常肠黏膜组织的表达P-选择素阳性信号定位于细胞浆和（或）胞膜，呈棕黄色颗粒，其在癌细胞、血管内皮细胞均有表达，见图1。癌组织中癌细胞P-选择素阳性表达率（77.6%，90/116）明显高于癌旁正常肠黏膜腺上皮细胞的阳性表达率（17.5%，10/57），差异有统计学意义（χ2=56.49，P＜0.05）。
2.2大肠癌组织癌细胞中P-选择素蛋白表达与患者临床病理特征的关系大肠癌组织中癌细胞P-选择素阳性表达率在不同性别、年龄、肿瘤直径、分化程度、浸润深度和有无淋巴结转移间差异均无统计学意义，见表1。
Fig. 1 Expression of P-selectin in colorectal cancer cells（EnVision，×200）图1 大肠癌肿瘤细胞P-选择素蛋白表达（EnVision两步法，×200）
Tab.1 The relationship between P-selectin protein expression in colorectal cancer cells and clinical pathological features of patients表1 P-选择素在大肠癌组织癌细胞中的表达情况及其与临床病理特征的关系
3 讨论
P-选择素是一种表达于血小板和血管内皮细胞表面的细胞黏附分子受体，具有广泛的生物学活性，在炎症、血栓形成和肿瘤转移中起重要作用［3-5］。P-选择素有两种变异型：一种为可溶性，在血中以单体形式存在；另一种为膜性，以寡聚状态存在。正常情况下，内皮细胞未受刺激和未激活，P-选择素不表达或低水平表达。
有文献报道在结直肠癌患者血清中可溶性P-选择素水平显着高于健康体检者［2］。血小板是正常人血浆中可溶性P-选择素基础水平的主要来源，而内皮细胞激活是疾病状态下增高的可溶性P-选择素的来源。本研究发现大肠癌组织中癌细胞高表达P-选择素（77.6%），这可能成为肿瘤患者血清中P-选择素水平升高的另一来源之一。
在肿瘤组织水平，以往文献较少研究和讨论P-选择素在肿瘤细胞中的表达和意义。本研究结果显示，P-选择素在大肠癌组织中的癌细胞和血管内皮细胞上均有表达，并且P-选择素在结直肠癌细胞的阳性表达率明显高于正常肠黏膜腺上皮细胞，提示P-选择素可能参与癌细胞的形成和生长。有研究推测，P-选择素可能在癌细胞与血管内皮间存在着双重介导作用，更有利于肿瘤的浸润和转移［6］。本研究分析显示肿瘤组织中癌细胞P-选择素的表达在不同分化程度、浸润深度和有无淋巴结转移患者间差异无统计学意义。肿瘤组织中癌细胞高表达P-选择素的临床和病理意义值得进一步探讨。有关P-选择素基因敲除小鼠的实验研究发现，P-选择素缺失会抑制肿瘤的生长和转移［7-9］；近年有研究认为，P-选择素基因多态性是恶性肿瘤患者发展到恶病质的重要调节因素［10］；P-选择素可吸引调节性T细胞浸润到肿瘤微环境，从而导致大鼠乳腺癌肿瘤细胞的生长和转移［11］。关于大肠癌组织中癌细胞表达的P-选择素对肿瘤形成、生长和转移的影响需要进一步的实验研究和探讨。
综上所述，P-选择素在大肠癌组织癌细胞中有较明显的高表达，该特征对肿瘤生物学行为和机体的影响需要进一步的实验研究和探讨，以期为预测大肠癌的生物学行为和大肠癌的防治提供新思路和方法。
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（2015-08-18收稿2015-10-26修回） （本文编辑李国琪）
Expression and clinical significance of P-selectin in colorectal cancer cells
LUO Chunying1，HUANG Bingchen1，HUANG Qin2，CHEN Jiaxing2，LU Haishan1，WEI Yesheng3，WANG Junli3，HUANG Zhaoquan1
1 Department of Pathology，The Affiliated Hospital of Youjiang Medical College for Nationalities，Guangxi 533000，China；2 Clinical Medical Undergraduate Course Grade 2011，Youjiang Medical College for Nationalitie；3 Department of Clinical Laboratory，The Affiliated Hospital of Youjiang Medical College for Nationalities Corresponding Author E-mail：huangzhq2012@163.com
Objective To investigate the expression and clinical significance of P-selectin in colorectal cancer cells. Methods The protein expression of P-selectin was detected by immunohistochemistry in colorectal cancer tissues（n=116）and corresponding non-tumor normal mucosa（n=57）. The differences of P-selectin expression in colorectal cancer tissues，corresponding non-tumor normal mucosa and the clinical pathological significance were compared and analysed in two groups. Results The expression of P-selectin protein was found not only in vascular endothelial cells but also in colorectal cancer cells. The positive rate of P-selectin expression was apparently higher in colorectal cancer cells（77.6%，90/116）than that in normal mucosa（17.5%，10/57，χ2=56.49，P＜0.05）. However，there were no significance in positive rates of P-selectin in colorectal cancer cells between tumors with different diameters，different degrees of differentiation，different depths of infiltration and with or without lymph node metastasis（80.6%vs. 74.1%，79.0%vs. 74.3%，78.4%vs. 76.9%，82.7%vs. 73.4%，P＞0.05）. Conclusion The high expression of P-seletin in colorectal cancer cells is an important characteristic of colorectal cancer.
colorectal neoplasms；P-selectin；immunohistochemistry；colorectal cancer
R735.3
A
10.11958/20150110
广西自然科学基金项目（2011GXNSFA018194）；广西医学科学实验中心开放基金专项项目（KFJJ2011-05）；自治区级大学生创新创业训练计划立项项目（201410599017）
1广西百色，右江民族医学院附属医院病理科（邮编533000）；2右江民族医学院2011级临床医学本科；3右江民族医学院附属医院检验科
罗春英（1977），女，副教授，硕士，主要从事肿瘤临床病理研究
E-mail：huangzhq2012@163.com
