miR-29b及相关炎症因子水平与冠脉CTA钙化积分的相关性*

司东雷，李静，李文洪，董丽娟**，王玮娜，胡杰，赵梦鸥，王书行

(1.河北医科大学附属石家庄第三医院 CT/MRI科，河北 石家庄 050011；2.邯郸市第二医院 心内二科，河北 邯郸 056001；3.河北医科大学附属石家庄第三医院 医保科，河北 石家庄 050011)

冠心病又称冠状动脉粥样硬化性心脏病，是较为常见的心血管疾病之一，多发于中老年人[1]。冠状动脉钙化是冠状动脉粥样硬化发展到一定程度的体现，也是冠状动脉粥样硬化的标志[2]。临床对冠心病的诊断主要依据为冠状动脉的狭窄程度，冠状动脉成像(coronary CT angiography，CTA)用于评估冠脉血管狭窄程度效果较好，在此基础上得出的钙化积分(coronary artery calcium score，CACS)则具有更好的敏感度和特异性[3]。冠状动脉粥样硬化的发展通常伴随炎症的发生，炎症反应离不开炎症细胞及炎症因子的作用，近年的研究发现微小RNA也对粥样硬化的形成有一定影响，Glaucylara G等[4]研究发现微小RNA对机体组织炎性反应及冠心病病情等均有一定作用，本研究观察miR-29b及炎症因子水平与CACS的关系，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年3月—2020年3月收治的60例冠状动脉造影诊断为冠心病的患者为观察组，同期60例冠状动脉造影正常的其他患者为对照组。观察组患者根据CACS再分为轻度钙化组(n=13，≤100分)、中度钙化组(n=27，>100～<400分)、重度钙化组(n=20，≥400分)。本研究获得医院医学伦理委员会批准(2019-21号)。观察组纳入标准：(1)符合冠心病诊断标准[5]；(2)年龄≥18岁；(3)首次确诊冠心病；(4)患者及家属签署知情同意书。观察组排除标准：(1)合并恶性肿瘤患者；(2)肝、肾及肺功能异常患者；(3)合并免疫系统疾病患者；(4)有精神障碍者；(4)合并传染性疾病患者；(5)接受过冠状动脉相关手术治疗患者；(6)有钙代谢异常患者。

1.2 方法

1.2.1基本资料 记录受试者性别、年龄、体质量指数(BMI)、高血压史、糖尿病史、吸烟史、饮酒史等基本资料，高血压诊断符合《中国高血压防治指南2018年修订版》[6]标准，糖尿病诊断符合《中国2型糖尿病防治指南(2017年版)》[7]标准，吸烟史指每天吸1支烟及以上累积达1年，饮酒史指每周饮酒超过30 g达半年以上。

1.2.2血清指标检测 于2组患者入院时抽取早晨空腹静脉血5 mL，3 000 r/min离心5 min，分离血清备用；采用酶联免疫吸附法检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平，检测仪器为美国卡迪克公司的血脂检测仪，试剂盒由上海西唐生物科技有限公司生产；采用免疫透射比浊法检测血清C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)水平，检测仪器为北京普朗新技术有限公司的全自动生化分析仪，试剂盒由上海西唐生物科技有限公司生产；提取血清总RNA，通过miR Base数据库获取微小RNA-29b(miR-29b)相关成熟序列，设计引物，采用实时荧光定量法检测微小RNA纯度和浓度，计算miR-29b的相对表达量，试剂盒武汉致众科技股份有限公司生产。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 基本资料比较

两组被检者性别、年龄、BMI、高血压史、糖尿病史、吸烟史、饮酒史比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 两组被检者基本资料比较Tab.1 Comparison of basic data between two groups

2.2 血清学指标

结果显示，观察组患者血清TC、TG、LDL-C、CRP、IL-6、IL-10水平高于对照组，HDL-C、miR-29b水平低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 两组被检者血清指标比较Tab.2 Comparison of serum indexes between

2.3 不同程度钙化组冠心病患者基本资料比较

不同程度钙化组冠心病患者性别、年龄、BMI、高血压史、糖尿病史、吸烟史、饮酒史、TC、TG、LDL-C、HDL-C比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 不同CACS患者基本资料比较Tab.3 Comparison of basic data of patients with different CACS

2.4 不同程度钙化组冠心病患者血清指标

不同程度钙化组冠心病患者TC、TG、LDL-C、HDL-C比较差异无统计学意义(P>0.05)；随着患钙化程度的加重，miR-29b逐渐降低，CRP、IL-6、IL-10逐渐升高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 3组不同程度钙化组冠心病患者血清学指标比较Tab.4 Comparison of serum indexes in patients with different

2.5 冠心病患者与CACS的多因素回归分析

回归分析显示，血清miR-29b(OR=1.392，95%CI为1.207～2.004)、CRP(OR=1.701，95%CI为1.039～2.897)、IL-6(OR=1.218，95%CI为1.114～1.385)及IL-10(OR=1.714，95%CI为1.197～2.215)是冠心病患者重度钙化的危险因素(P<0.05)。见表5。

表5 冠心病患者狭窄冠状动脉钙化程度的多因素回归分析Tab.5 Multivariate regression analysis of calcification degree in stenotic coronary arteries of the patients with coronary heart disease

2.6 miR-29b、CRP、IL-6、IL-10与CACS的相关性分析

相关性分析结果显示，血清miR-29b水平与CACS呈负相关(r=-0.583，P<0.001)，与血清CRP、IL-6、IL-10 与CACS呈正相关(r=0.677、0.641、0.496，P<0.001)。见表6。

表6 血清miR-29b、CRP、IL-6、IL-10与CACS的相关性分析Tab.6 Association of serum miR-29b,CRP,IL-6,and IL-10 with CACS

3 讨论

冠脉钙化在临床中对冠心病具有预警作用，也是冠心病患者治疗后评估疗效的可靠指标，出现钙化往往意味着动脉粥样硬化存在，而高钙化面积对于预测动脉狭窄具有高敏感度和特异性[8]。CACS用于心血管事件的预测安全且有效，目前常用检测方式为影像学技术，CTA检测具有简单、方便、风险小、费用少、能重复等特点，还能对冠脉的钙化程度和狭窄程度进行定量分析[9]。但目前有关冠心病患者miR-29b及炎症因子水平与CACS的关系的研究较少，本研究旨在通过探讨miR-29b及炎症因子水平与CACS的关系，为临床诊断及治疗此类患者提供依据。

本研究结果显示，观察组患者血清TC、TG、LDL-C、CRP、IL-6、IL-10水平高于对照组，HDL-C、miR-29b水平低于对照组，提示血清TC、TG、LDL-C、CRP、IL-6、IL-10、HDL-C、miR-29b与冠心病密切相关，在冠心病患者中TC、TG、LDL-C、CRP、IL-6、IL-10水平较高，HDL-C、miR-29b水平较低。有研究证实，血脂异常是导致冠心病的最重要的危险因素，TC、TG、LDL-C过高或HDL-C过低都会引发冠心病，冠心病患病风险与TC、TG、LDL-C水平呈正相关，与HDL-C水平呈负相关[10-12]，这与本研究结果相似。近年来有研究发现，微小RNA是一种重要转录调节因子，与粥样硬化形成相关，其广泛存在于正常细胞内，能调控遗传因素、染色体和氧化应激相关因子，同时具有调节脂代谢的作用[13]。miR-29b作为一种新发现的与脂代谢相关的因子，与冠心病和冠状动脉粥样斑块的形成关系密切，miR-29b能调节上皮及间质里的巨噬细胞，形成脂质核心，并最终导致脂肪肝[14]。冠心病的形成与发展中一直伴随有慢性炎症发生，炎性细胞及炎症因子在冠心病的发生到斑块破裂中起重要作用，其中CRP与粥样硬化的形成直接相关，CRP能诱导单核细胞黏附分子和细胞趋化蛋白-1产生并使血管内皮功能紊乱，增加斑块的不稳定性[15]。IL-6贯穿冠心病炎症发生的全程，IL-6浓度上升会导致斑块产生破裂，斑块面积持续增加，引发急性心肌梗死[16]。IL-10能抑制组织因子表达，通过抑制单核/巨噬细胞及T淋巴细胞合成致炎因子，减少炎症发生，减缓冠脉粥样硬化进程，稳定斑块[17]。因此检测冠心病患者miR-29b及炎症因子水平对后续病情的诊断与研究可提供有意义的参考。

本次研究显示，随着患者钙化程度加重，miR-29b逐渐降低，CRP、IL-6、IL-10逐渐升高，且经相关性分析证实miR-29b与CACS呈现负相关，CRP、IL-6、IL-10与CACS呈现正相关，提示miR-29b、CRP、IL-6、IL-10与冠脉钙化程度及冠脉病变程度相关。miR-29b通过调节巨噬细胞参与冠心病病变，同时miR-29b低表达能促进淋巴细胞聚集和胆固醇形成，调节局部的炎性微环境，能减少炎症反应发生[18]。有研究指出，冠状动脉粥样硬化并非都伴有钙化，CRP和非钙化的软斑块有关，CRP导致斑块破裂与纤维帽内的炎症反应相关，CRP引发心脏突发事件体现的是斑块的组成成分和稳定性，而非负荷量，冠状动脉粥样硬化斑块的钙化是机体为了维持冠脉系统稳定做出的反应机制，认为CRP与CACS无明显相关性，但其对心血管事件的预测仍有重要价值[19]，这与本研究的结果存在一定差异，可在后续研究中进一步探讨。IL-6在炎症反应中具有核心调节作用，能诱发CRP合成，造成血黏度上升，促凝因子生成增加，导致冠脉粥样硬化疾病进展，而IL-10同时发挥抗炎作用，IL-10的升高也意味着炎症反应也在升高，这也间接反映了冠心病的病变程度[20]。

综上所述，miR-29b及炎症因子水平与CACS密切相关，对冠心病的钙化程度及病情评估具有一定参考价值。