阮耀祥，黄莹洁，侯晓敏，牛龙刚，刘 宇，张明升

血栓素A2（TXA2）主要由血小板中的前列腺素 H2在TXA2合酶作用下生成，有促进血小板聚集和收缩血管平滑肌作用，参与多种心血管疾病及肾脏疾病的发生［1］。TXA2收缩血管平滑肌的机制为：激活环核苷酸门控通道引起细胞内钙增加［2］以及激活 TXA2受体和磷 脂酶 C［3］。Kaye等［4］发现格列苯脲阻断ATP敏感的钾通道可减弱血栓素A2受体激动剂U46619的收缩反应。相关研究表明，妊娠大鼠肠系膜动脉和子宫动脉对TXA2的收缩反应降低［5］；雌二醇增强离体肺血管对U46619的收缩反应［6］。迄今鲜见U46619对不同脏器微动脉收缩反应差异的比较性研究及其与内皮的关系。

1 材料与方法

1.1 药品与试剂 单硝基精氨酸甲酯（L-NAME）、U46619和吲哚美辛（Indomethacin）购自Sigma公司，HEPES购自AMRESCO公司，其余试剂（分析纯）购自天津大茂化学试剂厂。

1.2 实验仪器 Multi Wire Myograph System（丹麦DMT），PowerLab Chart（澳大利亚埃德仪器），恒温水浴锅（成都泰盟），精密pH计（上海精科实业），分析天平（Sartorius公司）。

1.3 实验动物 3月龄雄性Sprague-Dawley大鼠（220g～250 g），由山西医科大学实验动物中心提供，许可证编号：SCXK（晋）2009～0001。

1.4 离体动脉环的制备 大鼠断头处死，立即取出心脏、脑组织、肾脏、肺脏、肠系膜放入盛有4℃台式液的平皿中。去除血管周围组织，迅速显微分离出肾内动脉、肺内动脉、冠状动脉、大脑中动脉和肠系膜动脉。分离时细心，动作轻巧，防止损伤血管，注意保护血管内皮，剪成3mm长的动脉环并用钢丝固定于DMT的传感器上。

1.5 基本实验流程 浴槽内盛5mL台氏液，持续通氧，维持液温在37℃，每20min换液，平稳60min后用KCl（60mmol／L）收缩动脉环，当收缩值＞1mN且连续两次相同刺激的收缩值差异小于10%时表明血管活性好，开始正式实验。以KCl收缩值为100%，计算不同状态U46619的收缩百分率（U46619的收缩值／KCl的收缩值×100%）。

1.6 统计学处理 用PowerLab Chart采集，并计算收缩百分率，实验结果以均数±标准差（x±s）表示。应用SPSS 13.0分析，Sigmaplot10.0作图。U46619收缩的内皮机制采用t检验，U46619收缩组织的差异性采用单因素方差分析。

2 结 果

2.1 静息状态下U46619对大鼠微动脉的收缩作用 U46619对五种微动脉均能发现明显的收缩反应。U46619对微动脉的收缩作用由强到弱依次为：肾内动脉（IRA）、大脑中动脉（CMCA）、肺内动脉（IPA）、冠脉（CA）、肠系膜动脉（MCA）。U46619的收缩能力具有明显的血管源差异性，详见表1。

表1 U46619收缩大鼠五种动脉环作用的组织差异性（x±s）

2.2 一氧化氮合酶（NOS）在U46619收缩微动脉中的作用浴槽内加入NOS抑制剂L-NAME增强U46619收缩冠脉、大脑中动脉、肾内动脉和肺内动脉的作用（n=6）。详见图1。

图1 L-NAME对U46619收缩大鼠动脉环作用的影响

2.3 环氧合酶（COX）在U46619收缩微动脉中的作用 浴槽内加入非选择性COX抑制剂吲哚美辛阻断COX途径下游产物的生成，仅减弱U46619收缩肾内动脉和肠系膜动脉的作用。详见图2。

图2 Indomethacin对U46619收缩大鼠动脉环的影响

3 讨 论

本实验观察了TXA2受体激动剂U46619对不同组织来源的微动脉收缩作用，并探讨了U46619反应的微血管异质性及其与NO和前列腺素类物质产生的关系。结果表明，U46619明显收缩静息状态下的肾内动脉和大脑中动脉，而轻微收缩肠系膜动脉，提示微动脉环核苷酸门控通道的敏感性和（或）TXA2受体、磷脂酶C的表达存在组织间差异。

内皮在调节血管张力方面发挥重要作用，主要途径为：合成和释放内皮源性的舒张因子如NO、前列环素（PGI2），参与激活毒蕈碱型受体诱导的舒张效应。血管内皮细胞释放的NO作用于血管平滑肌细胞，激活可溶性鸟苷酸环化酶（sGC），进而增加胞内环鸟苷酸（cGMP）的浓度，导致细胞内Ca2＋浓度或敏感性降低，引起血管舒张［7］。花生四烯酸在环氧合酶作用下产生PGI2、TXA2、前列腺素E2等物质［8］，TXA2具有较强的血管收缩作用。本研究表明，L-NAME预孵显着增强提高冠脉、大脑中动脉、肾动脉和肺动脉对U46619的收缩反应，提示在这些微动脉中NO-sGC-cGMP活性较高；预孵吲哚美辛只减弱肾动脉和肠系膜动脉对U46619的收缩反应，提示COX途径（促进TXA2的合成和释放）参与了TXA2所致的肾动脉和肠系膜动脉的收缩。

不同部位微动脉对U46619的收缩反应存在血管异质性，这可能与NO和前列腺素类物质的产生能力不同有关。

［1］ Sakariassen KS，Alberts P，Fontana P，et al.Effect of pharmaceutical interventions targeting thromboxane receptors and thromboxane synthase in cardiovascular and renal diseases［J］.Future Cardiol，2009，5（5）：479-493.

［2］ Leung YK，Du J，Huang Y，et al.Cyclic nucleotide-gated channels contribute to thromboxane A2-induced contraction of rat small mesenteric arteries［J］.Plo Sone，2010，5（6）：e11098.

［3］ Feng J，Liu Y，Chu LM，et al.Thromboxane-induced contractile response of human coronary arterioles is diminished after cardioplegic arrest［J］.Ann Thorac Surg，2011，92（3）：829-836.

［4］ Kaye AD，Nossaman BD，Santiago JA，et al.Differential effects of glibenclamide on responses to thromboxane A2mimic，U46619，in the pulmonary and hindquarters vascular beds of the cat［J］.Eur Pharmacol，1997，340（2-3）：187-193.

［5］ Goulopoulou S，Hannan JL，Matsumoto T，et al.Pregnancy reduces RhoA／Rho kinase and protein kinase C signaling pathways downstream of thromboxane receptor activation in the rat uterine artery［J］.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2012，302（12）：H2477-H2488.

［6］ Farhat MY，Ramwell PW，et al.Estradiol potentiates the vasopressor response of the isolated perfused rat lung to the thromboxane mimic U-46619［J］.J Pharmacol EXP Ther，1992，261（2）：686-691.

［7］ 邝素娟，邓春玉，张光燕，等.二烯丙基三硫化物对大鼠离体肾内动脉血管张力的影响［J］.中国药理学通报，2011，27（10）：1409-1413.

［8］ 王勋，罗珊珊，蒋嘉烨，等.鸟苷对大鼠胸主动脉环的舒张作用及机制［J］.中国药理学通报，2011，27（11）：1540-1543.