c-myc基因和p53蛋白在喉癌切缘组织的表达与局部复发的相关性研究

余晓虹，罗鸿，朱晓玲,李鹤,刘开瑞

(襄阳市中心医院北区耳鼻喉科,湖北 襄阳 441003)



c-myc基因和p53蛋白在喉癌切缘组织的表达与局部复发的相关性研究

余晓虹，罗鸿，朱晓玲,李鹤,刘开瑞

(襄阳市中心医院北区耳鼻喉科,湖北 襄阳 441003)

目的 通过检测c-myc基因(c-myc)和p53蛋白在喉癌切缘组织的表达，探讨其与术后局部复发的相关性。方法 选择接受治疗的喉癌患者201例，将患者按复发与否分成复发组和非复发组，校正一般资料后，采用免疫组化法对两组患者喉癌组织和切缘组织中c-myc和p53蛋白的表达进行比较。结果 (1)在喉癌组织中，c-myc蛋白在复发组和未复发组表达的阳性率分别为54.5%和50．0%，差异无统计学意义(P>0.05)；p53蛋白在复发组和未复发组表达的阳性率分别为84.8%和91.1%，差异无统计学意义(P>0.05)；(2)在切缘组织中，c-myc蛋白在复发组和未复发组表达的阳性率分别为66.7%和20.8%，差异有统计学意义(P<0.05)；p53蛋白在复发组和未复发组表达的阳性率分别为84.8%和81.0%，差异无统计学意义(P>0.05)；(3)边缘黏膜异型增生型发生率在复发组和未复发组分别是63.6%和45.8%，差异无统计学意义(P>0.05)。结论 切缘组织中c-myc蛋白的表达与喉癌术后局部复发具有明显相关性，或可作为局部复发状况的预测指标。

喉癌；局部复发；c-myc；p53

作为头颈外科常见肿瘤之一,喉癌的治疗方法随着科学技术的进步不断优化、改善。然而，术后局部复发时有发生,且是喉癌治疗失败的主要原因[1]，给患者和亲属带来极大痛苦，不仅面临再次手术或治疗，对其心理也有消极影响。目前研究[2-4]认为，手术切缘组织是否安全与术后局部复发有明显相关性，而c-myc基因(c-myc)和p53等癌基因与喉癌的发生相关。因此，本研究旨在通过检测c-myc和p53蛋白在喉癌切缘组织的表达，探讨其与术后局部复发的相关性，以期确定能预测喉癌术后局部复发危险性的基因蛋白，作为标志物对术后恢复以及辅助治疗提供可靠参考数据，降低术后局部复发的出现。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2010年1月至2016年1月在襄阳市中心医院接受治疗的喉癌患者201例，其中男性175例，女性26例，年龄43～82(58.9±7.6)岁，病程0.4～8.7(3.5±2.1)年。排除标准：脑血管疾病或功能障碍者；肿瘤有转移或转移迹象者；有严重内科疾病者；意识不清且精神状态差者。根据国际通用肿瘤分期系统TNM，所有调查对象均为T1期，其中T1a 89例，T1b 112例。将患者按复发与否分成复发组和未复发组，复发组： 33例，即手术切缘组织HE染色阴性，但术后经病理学鉴定为局部复发；未复发组：168例，即2年随诊期内无局部复发现象。使用自动天平测量患者身高和体质量，计算其体质量指数(BMI)。结果显示，两组性别、年龄、病程、BMI等方面差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。本研究经襄阳市中心医院医学伦理委员会批准，患者均签署知情同意书。

表1 两组患者一般资料比较±s

1.2 研究方法 切缘组织取材：镜下使用CO2激光将喉癌组织整块切除，经钳夹清除炭化组织后在肿瘤组织周围0.5 mm处另取4块组织作为切缘组织标本。标本处理：4%中性甲醛固定后用石蜡包埋，4 μm连续切片。免疫组化方法：采用SP法，两种抗体工作浓度均为1∶100，以磷酸盐缓冲液替换一抗制作切片作为阴性对照，以阳性切片为阳性对照。

1.3 判断方法 免疫组化阳性结果：信号呈棕黄色或棕褐色，p53蛋白位于细胞核内，c-myc蛋白同时位于细胞核和细胞质内。染色结果：为确保结果的准确性及可靠性，采用双盲法，由2名经验丰富病理科医师在光学显微镜下随机选择5个视野，然后选取每个视野中100个细胞，对阳性细胞进行计数，计算阳性细胞的百分比，取5个视野的平均值作为该标本阳性细胞数的比例，若阳性细胞≥10%则判定为阳性结果(+)，若阳性细胞<10%则判定为阴性结果(-)。典型图片见图1～10。

1.4 统计学方法 使用SPSS 17．0统计软件对资料进行分析。计量数据(正态)的比较为成组t检验。计数资料(非等级)则采用χ2检验。显着性水准α=0.05。

2 结果

2.1 喉癌组织中c-myc和p53蛋白的表达 c-myc蛋白：复发组和未复发组的阳性细胞百分比分别为54.5%(18/33)和50．0%(84/168)，差异无统计学意义(P>0.05)；p53蛋白：复发组和未复发组的阳性细胞百分比分别为84.8%(28/33)和91.1%(153/168)，差异无统计学意义(P>0.05)，具体见表2。

图1 喉癌组织中p53(+)，SP法(×40)

图2 喉癌组织中p53(-)，SP法(×40)

图3 喉癌组织中c-myc(+)，SP法(×40)

图4 喉癌组织中c-myc(-)，SP法(×40)

图5 切缘组织中p53(+)，SP法(×40)

图6 切缘组织中p53(-)，SP法(×40)

图7 切缘组织中c-myc(+)，SP法(×40)

图8 切缘组织中c-myc(-)，SP法(×40)

图9 异型增生手术切缘p53(+)，SP法(×40)

图10 异型增生手术切缘c-myc(+)，SP法(×40)

2.2 切缘组织中c-myc和p53蛋白的表达 c-myc蛋白：复发组和未复发组的阳性细胞的百分比分别为66.7%(22/33)和20.8%(35/168)，差异有统计学意义(P<0.05)；p53蛋白：复发组和未复发组的阳性细胞的百分比分别为84.8%(28/33)和81.0%(136/168)，差异无统计学意义(P>0.05)。具体见表2。

表2 两组患者喉癌和切缘组织中c-myc和p53蛋白阳性细胞表达的比较/例(%)

2.3 切缘黏膜异型增生状况 201例患者中，切缘黏膜无异型增生116例，轻度异型增生56例，中度异型增生29例。其中，复发组发生切缘黏膜异型增生型增生患者21例，无异型增生的患者12例；未复发组发生切缘黏膜异型增生型增生的患者77例，无异型增生的患者91例，差异无统计学意义 (P>0.05)。具体见表3。

表3 两组患者切缘黏膜异型增生状况比较/例(%)

注：两组比较χ2=3.499，P=0.061。

3 讨论

喉癌可分继发性喉癌和原发性喉癌两种。继发性喉癌指其他部位的恶性肿瘤转移至喉部致使喉部发生肿瘤，较为少见；而原发性喉癌指原发部位在喉部的肿瘤，以鳞状细胞癌为主，相对常见。现目前，喉癌的发生尚无明确病因，但研究[5-7]表明，吸烟、饮酒、空气污染、职业因素、病毒感染、性激素、放射线等都是其可能的危险因素。早发现、早诊断、早治疗对于缓解喉癌所致危害非常重要，不仅可提高患者的术后生存率，还可保留喉的发音功能，同时减少术后并发症[8-10]。其治疗方式主要为手术治疗、放射治疗、化疗及生物治疗等，有时会采取多种方式联合治疗的手段[11]。若对早期喉癌患者采取适当治疗手段，5年生存率高于90%[12]。复发和转移是影响其预后效果的主要因素。喉癌的症状主要为咳嗽、声嘶、呼吸困难、吞咽困难、颈部淋巴结转移等。

p53是一种肿瘤抑制基因，在所有恶性肿瘤中，50%以上会出现该基因的突变。p53基因突变后，由于其空间构象的改变，将失去对细胞生长、凋亡和DNA 修复的调控作用，p53基因由抑癌基因转变为癌基因。喉癌患者中，p53基因发生突变的概率约为60%，是目前发现的与喉癌发生关系最为密切的癌基因[13]。

c-myc既是一种可易位基因，又是一种多种物质调节的可调节基因，也是一种可使细胞无限增殖、获永生化功能、促进细胞分裂的基因。c-myc基因参与细胞凋零，与多种肿瘤的发生、发展与转归密切相关，研究表明[14]，其与喉癌的发生可能存在一定联系。

早期喉癌患者二氧化碳激光治疗失败的原因主要是由于术后局部复发，本研究中复发组A中所有患者均接受了喉部分切除术。目前，判断二氧化碳激光治疗手术切除部分是否足够或者手术切缘是否安全的主要手段仍然是病理学检查。然而，本研究中33例局部复发患者常规病理学检查组织切缘均为阴性，说明病理学检查的不确定性太大，往往不能很好的预测术后局部复发的可能性。因此，探索更为准确、可靠的检查标准及方法很有必要。

本研究结果显示，喉癌组织中，c-myc蛋白在复发组和未复发组表达的阳性率分别为54.5%和50．0%，差异无统计学意义(P>0.05)，说明c-myc在喉癌组织的表达与喉癌复发的发生及演进无明显关系；p53蛋白在复发组和未复发组表达的阳性率分别为84.8%和91.1%，差异无统计学意义(P>0.05)，说明p53在喉癌组织的表达与喉癌复发的发生及演进也无明显关系。

在切缘组织中，c-myc蛋白在复发组和未复发组表达的阳性率分别为66.7%和20.8%，差异有统计学意义(P<0.05)，说明c-myc在切缘组织的表达与喉癌复发的发生及演进有一定相关性；p53蛋白在复发组和未复发组表达的阳性率分别为84.8%和81.0%，差异无统计学意义(P>0.05)，说明p53在边缘组织的表达与喉癌复发的发生及演进也无明显关系。

边缘黏膜异型增生型发生率在复发组和未复发组分别是63.6%和45.8%，差异无统计学意义(P>0.05)，说明边缘黏膜异型增生型的发生率与喉癌复发的发生及演进无明显关系。

综上所述，切缘组织中c-myc蛋白的表达与喉癌术后局部复发具有明显相关性，或可作为局部复发状况预测的指标。

[1] Mutlu P,Mutlu M,Yalçin S,et al.Association between XRCC3 Thr241Met polymorphism and laryngeal cancer susceptibility in Turkish population[J].Eur Arch Otorhinolaryngol，2015，272(12):3779-3784.

[2] Luo XN,Chen LS,Zhang SY,et al.Effectiveness of chemotherapy and radiotherapy for laryngeal preservation in advanced laryngeal cancer:a meta-analysis and systematic review[J].Radiol Med,2015，120(12):1153-1569.

[3] Ghosh R,Dutta R,Dubal PM,et al.Laryngeal neuroendocrine carcinoma A population-based analysis of incidence and survival[J].Otolaryngol Head Neck Surg，2015，153(6):966-972.

[4] Mishra A,Ahmed K,Froghi S,et al.Systematic review of the relationship between artificial sweetener consumption and cancer in humans:analysis of 599,741 participants[J].Int J Clin Pract,2015，69(12):1418-1426.

[5] 朱奕,王胜资.吸烟相关性喉癌发生机制的研究进展[J].中国眼耳鼻喉科杂志,2015,15(3):213-215.

[6] 耿敬,席淑新,周苹,等.中国人群喉癌发病率影响因素的Meta分析[J].护士进修杂志,2015,30(17):1554-1558.

[7] Cata JP,Zafereo M,Villarreal J,et al.Intraoperative opioids use for laryngeal squamous cell carcinoma surgery and recurrence:a retrospective study[J].Med Oncol,2016，33(4):31.

[8] 刘萱,冯俊伟,刘华,等.喉癌术后患者的生活质量及影响因素[J].中国老年学杂志,2015,35(7):1953-1954.

[9] 陈文杰,王斌全,高伟,等.喉癌流行病学特征及影响因素分析[J].中国当代医药,2015,22(12):43-46.

[11] 刘权忠.CO2激光喉镜显微手术治疗早期声门型喉癌疗效观察[J].安徽医药,2015,19(6):1167-1168.

[12] Timme DW,Jonnalagadda S,Patel R,et al.Treatment selection for T3/T4a laryngeal cancer chemoradiation versus primary surgery[J].Ann Otol Rhinol Laryngol,2015，124(11):845-851.

[13] Pei SG,Wang JX,Wang XL,et al.Correlation of survivin,p53 and Ki-67 in laryngeal cancer Hep-2 cell proliferation and invasion[J].Asian Pac J Trop Med,2015，8(8):636-642.

[14] 龙小博,胡双,曹平平,等.癌基因c-myc在喉癌组织中的表达及意义[J].临床耳鼻咽喉头颈外科杂志,2009，23(24):1127-1129.

Correlation between the expressions of c-myc gene and p53 protein in laryngeal cancer edge tissues and local recurrence

YU Xiaohong,LUO Hong，ZHU Xiaoling,et al

(DepartmentofOtolaryngology,XiangyangCentralHospital,Xiangyang,Hubei441003,China)

Objective To explore the correlation of c-myc gene and p53 protein with local recurrence in laryngeal cancer edge tissues.Methods Totally 201 patients with laryngeal cancer treated in Xiangyang Central Hospital were assigned into 2 groups,recurrence group and non-recurrence group.The expressions of c-myc gene and p53 protein in laryngeal cancer edge tissues were analyzed after correcting clinical data between two groups.Results In laryngeal cancer tissues,the positive rates of the expression of c-myc gene in group A and group B were 54.5% and 50.0% respectively,and they were not statistically different(P>0.05);the expressions of p53 protein in group A and group B were 84.8% and 91.1% respectively,and they were not statistically different either(P>0.05).In edge tissues,the positive rates of the expression of c-myc gene in group A and group B were 66.7% and 20.8% respectively,and they were statistically different (P<0.05);the expression of p53 protein in group A and group B were 84.8% and 81.0% respectively,and they were not statistically different(P>0.05).The incidences of mucosa dysplasia on edge tissues in group A and group B were 63.6% and 45.8% respectively,and they were not statistically different(P>0.05).Conclusions The expression of c-myc gene in edge tissues has obvious correlation with postoperative local recurrence of laryngeal cancer,which can become a forecast indicator of local recurrence.

Laryngeal cancer;Local recurrence;c-myc;p53

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.10.029

2016-03-25，

2016-07-12)