李庆伟，李威，杨继东，喻刘杨，龙健

作者单位：荆门市人民医院，a血管介入科，b肿瘤科，湖北 荆门 448000

肝细胞癌是指发生在正常肝脏组织细胞的恶性肿瘤，具有侵袭性强、发病率和死亡率高的特点［1］。肝动脉化疗栓塞术（TACE）通过导管技术将化疗药物和栓塞剂注入至肝癌供血动脉，达到局部化疗和血管栓塞的效果，但其疗效并不十分理想［2］。因此探索影响肝细胞癌病人TACE 疗效的影响因素以指导临床治疗具有重要意义。miR-597 是位于8p23.1 染色体上的miRNA，与癌症的发生、发展具有一定的关系。既往研究［3］报道，miR-597-5p 可通过靶向转录增强子相关域转录因子1从而抑制肝细胞癌的增殖、迁移和侵袭。梅孝臣等［4］研究显示，miR-597 在肝细胞癌组织中表达降低，且通过靶向Rab23 抑制肝细胞癌细胞的周期和凋亡，进而影响细胞增殖能力。但目前尚无关于肝细胞癌组织miR-597 表达与TACE 预后关系的相关研究。基于此，本研究特探讨肝细胞癌组织miR-597 表达与临床病理特征、TACE疗效的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料纳入标准：（1）临床病理学确诊为肝细胞癌病人；（2）入院前均未进行手术切除、靶向治疗、化疗等；（3）入院后均进行TACE 治疗，预期生存期＞3 个月；（4）病人或其近亲属签署知情同意书。排除标准：（1）合并心、肾功能不全者；（2）伴有其他恶性肿瘤、糖尿病、脑血管疾病；（3）伴有内分泌系统疾病；（4）存在TACE 治疗禁忌证；（5）合并全身性感染性疾病。

根据以上标准，选取2019 年1 月至2021 年1 月荆门市人民医院收治的肝细胞癌病人136 例，男75例，女61 例；年龄范围为30～75 岁，年龄（56.34±8.96）岁；Child-Pugh分级：A级55例，B级81例；TNM分期：Ⅰb+Ⅱ期74 例，Ⅲa 期62 例。本研究符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》相关要求。

1.2 方法

1.2.1肝细胞癌组织miR-597 表达水平检测 经肝穿刺取病人肝细胞癌组织约10 mg，用研棒碾碎后采用Trizol 试剂提取细胞总RNA，紫外吸收法检测RNA 的纯度和浓度，并将RNA 反转录为cDNA。根据实时荧光定量聚合酶链式反应法检测miR-597表达水平，U6 作为内参。反应条件为：95 ℃作用5 min，95 ℃反应20 s，60 ℃反应40 s，共循环40 次；miR-597 正向引物为5'-ACACTCCAGCTGGGTGTGTCACTCGATGAC-3'，反向引物为5'-TGGTGTCGTGGAGTCG-3'；U6 正向引物为5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'，反向引物为5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'。采用2-ΔΔCt法计算miR-597 的相对表达量。

1.2.2病人TACE 方法 病人入院后，应用Seldinger 法经皮股动脉穿刺插管，在影像学指导下将导管超选择插入肿瘤供血动脉，行动脉造影，明确后经导管进行5-氟尿嘧啶（500～1 000 mg）、奥沙利铂（150～200 mg）灌注，再用40%碘化油进行栓塞，必要时辅助使用明胶海绵。治疗次数根据动脉供血情况间隔3周治疗1次，共治疗2～3次。

1.2.3随访及分组 随访3个月，TACE 疗效参照改良的实体瘤疗效评定标准（mRECIST）［5］进行评价。完全缓解：所有目标病灶经影像学检查显示其动脉期无增强显影且病人AFP 水平恢复至正常水平，并至少维持4周；部分缓解：所有目标病灶经影像学检查显示其直径总和降低30%；疾病稳定：所有目标病灶经影像学检查显示其直径总和升高或降低程度低于20%；疾病进展：所有目标病灶经影像学检查显示其直径总和升高≥20%或有新的病灶出现。将完全缓解、部分缓解病人分为有效组，将疾病进展、疾病稳定病人分为无效组。

1.2.4病人资料收集 收集并整理病人资料，如性别、年龄、肿瘤长径、肿瘤数目、肿瘤部位、TNM 分期、病理分化、Child-Pugh 分级、门静脉癌栓、淋巴结转移、微血管侵犯（采用MR 功能成像进行判断）、血清甲胎蛋白（AFP）、miR-597表达水平等。

1.3 观察指标肝细胞癌组织miR-597 表达与病人临床病理特征的关系；病人TACE 治疗情况及有效组和无效组肝细胞癌组织中miR-597表达水平比较；影响肝细胞癌病人TACE 疗效的相关因素：比值比（OR）、95%置信区间（95%CI）。

1.4 统计学方法将SPSS 26.0 软件用以统计学分析，计量资料以±s形式进行描述，比较采用独立样本t检验；以例（%）描述计数资料，以χ2检验；采用logistic 多元回归分析探讨影响肝细胞癌病人TACE疗效的因素。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肝细胞癌组织miR-597 表达水平与临床病理特征关系136 例肝细胞癌病人癌组织中miR-597表达水平为0.456±0.041；miR-597 表达水平与伴门静脉癌栓、伴淋巴结转移、肿瘤长径、TNM 分期、病理分化、Child-Pugh 分级等临床病理特征有关（P＜0.05）。见表1。

表1 肝细胞癌组织miR-597表达水平与临床病理特征关系/± s

表1 肝细胞癌组织miR-597表达水平与临床病理特征关系/± s

临床病理特征性别miR-597的表达量t值1.66 P值0.100女男年龄0.450±0.032 0.461±0.043 1.38 0.170≤60岁＞60岁肝硬化史0.452±0.052 0.463±0.033 0.56 0.576无有门静脉癌栓0.459±0.038 0.455±0.034 9.64＜0.001无有淋巴结转移0.481±0.043 0.414±0.032 6.30＜0.001无有肿瘤部位0.478±0.046 0.436±0.031 1.40 0.164左肝右肝肿瘤长径0.461±0.041 0.452±0.034 9.79＜0.001≤5 cm＞5 cm肿瘤数目0.486±0.052 0.408±0.031 1.26 0.210单发多发TNM分期0.460±0.043 0.451±0.039 7.18＜0.001Ⅰb+Ⅱ期Ⅲa期病理分化0.479±0.053 0.429±0.023 6.25＜0.001低分化中、高分化Child-Pugh分级0.438±0.035 0.483±0.049 8.61＜0.001 A级B级微血管侵犯0.490±0.043 0.433±0.034 1.99 0.049无有甲胎蛋白0.463±0.046 0.448±0.041 1.72 0.088≤400 μg/L＞400 μg/L 0.462±0.045 0.449±0.038

2.2 病人TACE 治疗结果及有效组和无效组癌组织miR-597 表达水平比较经TACE 治疗后，有效者30 例（完全缓解4 例，部分缓解26 例），占总人数的22.06%（30/136）。有效组癌组织中miR-597 表达水平高于无效组（0.827±0.054 比0.351±0.046，t=48.12，P＜0.01）。

2.3 影响肝细胞癌病人TACE 疗效的相关因素分析两组病人肿瘤长径、TNM 分期、病理分化、Child-Pugh 分级、淋巴结转移、门静脉癌栓、微血管侵犯、AFP、miR-597 表达水平比较差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 肝细胞癌136例有效组和无效组的一般资料比较

将上述P＜0.1 的因素记为自变量进行赋值：肿瘤长径（≤5 cm=0，＞5 cm=1）、肿瘤数目（单发=0，多发=1）、TNM分期（Ⅰb+Ⅱ期=0，Ⅲa期=1）、病理分化（中、高分化=0，低分化=1）、Child-Pugh 分级（A 级=0，B 级=1）、淋巴结转移（无=0，有=1）、门静脉癌栓（无=0，有=1）、微血管侵犯（无=0，有=1）、AFP（≤400 μg/L=0，＞400 μg/L=1）、癌组织miR-597 表达水平（实测值），另将TACE 疗效记为因变量（有效=0，无效=1）进行logistic 回归分析，结果显示肿瘤长径、TNM 分期、病理分化、Child-Pugh 分级、淋巴结转移、门静脉癌栓、微血管侵犯、AFP、癌组织miR-597 表达水平均是肝细胞癌病人TACE 疗效的影响因素（P＜0.05）。见表3。

表3 肝细胞癌136例多因素logistic回归分析

3 讨论

对于错失手术根治的最佳时机的肝细胞癌病人临床上首选方式为TACE。TACE 治疗通过栓塞肝动脉，可阻断肝细胞癌血供，同时在肿瘤局部聚集高浓度的化疗药物以最大限度发挥药物对肿瘤细胞的杀伤作用，促进肿瘤细胞坏死［6］，但其治疗效果并不十分理想。本研究结果显示，TACE 治疗后的有效率为22.06%，表明肝细胞癌病人TACE 治疗可能受多种因素的影响而存在临床疗效较低的情况。因此探讨影响肝细胞癌病人TACE 治疗的相关因素对提高临床疗效具有重要指导意义。

本研究检测不同临床病理学特征肝细胞癌病人癌组织miR-597 表达水平，结果显示miR-597 表达水平与伴门静脉癌栓、伴淋巴结转移、肿瘤长径、TNM 分期、病理分化、Child-Pugh 分级等方面密切相关。梅孝臣等［4］研究结果显示，低分化、存在门静脉癌栓和淋巴结转移病人的miR-597表达水平高于中高分化、无门静脉癌栓和淋巴结转移病人，此与本研究结果相一致，共同表明miR-597 表达水平可能与病人临床病理特征相关。有研究［7］发现miR-597可阻碍细胞增殖和调控细胞周期，当miR-597 表达降低时，其对癌细胞增殖的抑制作用减弱，则肿瘤细胞可持续生长，且可逐渐发生侵袭和转移等。临床中可通过检测病人miR-597 表达水平，对病人癌症病情进行评估，进而制定针对性治疗措施。miRNA 主要通过与靶基因mRNA 的3'-UTR 序列结合，形成沉默复合体，阻断或降解其翻译过程，进而参与调控人类基因的表达。miR-597 在多种类型恶性肿瘤组织的表达皆与病人预后相关。周蓓等［8］研究报道，miR-597 在乳腺癌中的表达降低，且可通过靶向调控FOSL2 蛋白表达，起到阻碍乳腺癌细胞增殖、侵袭和转移的作用，有效改善病人预后；Wen等［9］研究表明，miR-597-3p 在甲状腺癌中通过靶向RAB23 降低SW579 细胞的增殖、侵袭和转移能力，增强临床疗效。本研究结果显示，有效组癌组织中miR-597 表达水平高于无效组，且多因素分析显示癌组织中miR-597是影响TACE疗效的因素，提示肝细胞癌组织miR-597 异常表达与病人的TACE 疗效密切相关。近年来研究［10］发现，miRNA 参与了肿瘤细胞增殖与凋亡等生物学过程，与肝细胞癌的发生发展密切相关，异常表达的miRNA 可作为肝细胞癌靶向治疗的靶点，并可对病人预后进行判断；某些miRNA 如miR-599 与肝细胞癌病人TACE 治疗预后相关，其低表达是病人预后不良的危险因素，进一步说明miRNA与肝细胞癌病人TACE疗效可能存在一定的相关性。miR-597 可通过对肝细胞癌细胞生长、增殖以及侵袭与转移的抑制作用而增强病人对TACE治疗的敏感性，从而有助于提升疗效。

本研究还发现，Child-Pugh 分级、肿瘤长径、病理分化程度、TNM 分期、淋巴结转移、门静脉癌栓、微血管侵犯和AFP 也是影响TACE 疗效的相关因素。Child-Pugh 分级增加表明肝损害程度越高，自身代偿能力降低，导致TACE 综合疗效较差；肿瘤长径较大时，一期治疗并不能完全清除，术后部分残留在体内的肿瘤组织可能会发生浸润或转移，加重病情，影响治疗效果；病理分化程度越低，TNM 分期越高，表明病人癌症恶性程度越高，病情越严重，影响TACE 疗效；淋巴结转移表明癌细胞已经进行扩散，且癌细胞可通过淋巴途径向远处转移，增加病人病灶数量，提高治疗难度，影响TACE 疗效；门静脉是脏器血液回流的重要途径，门静脉癌栓形成后极易发生肝内扩散和肝外转移，引起肝细胞功能衰竭，影响血液回流，导致预后不良［11］。微血管侵犯会导致微小转移灶的形成，治疗时可能难以对微转移灶进行准确性干预，从而影响TACE 疗效。AFP是诊断肝细胞癌的血清标志物，有研究报道［12］，肝细胞癌病人血清AFP 水平升高则病人TNM 分期增加，表明血清AFP 水平与肝细胞癌临床分期密切相关，从而影响TACE 治疗效果。因此，在临床治疗中要针对上述指标进行详细分析，制定个性化的化疗方案，提高病人肝功能以及生存质量。

综上所述，肝细胞癌组织miR-597 表达水平与病人TNM 分期、肿瘤长径、病理分级有关，且癌组织miR-597表达与肝细胞癌病人TACE 疗效关系密切，有望成为肝细胞癌的一个潜在治疗靶点和预后检测指标。