安胜英，马学会，刘观忠
(河北农业大学动物科技学院，保定 071000)
发酵中药添加剂对肉仔鸡免疫机能和抗氧化机能的影响
安胜英，马学会，刘观忠
(河北农业大学动物科技学院，保定 071000)
本试验旨在研究发酵中药制剂对肉仔鸡免疫机能和抗氧化机能的影响。发酵中药是将中药粉剂(组方为黄芪、贯众、板蓝根、何首乌、山楂、女贞子、艾叶)按比例加入六神曲、淀粉、水混匀，在30 ℃的生化培养箱中发酵48 h制得。为了检测该制剂的使用效果，特做以下试验：180只1日龄雄性AA肉仔鸡随机分为3个处理，每个处理6个重复，每个重复10只鸡，分别饲喂日粮：A组，饲喂基础日粮；B组，饲喂基础日粮+0.5%中药；C组，饲喂基础日粮+0.5%发酵中药。试验结果表明：(1)与空白对照组相比，发酵中药显着提高了3周龄仔鸡胸腺指数(P<0.05)、血清溶菌酶的活性(P<0.05)、6周龄仔鸡血浆谷胱甘肽过氧化物酶的活性(P<0.05)，显着降低了6周龄仔鸡腿肌MDA含量(P<0.05)；(2)与中药对照组相比，发酵中药显着提高了3周龄仔鸡胸腺指数(P<0.05)、ND抗体水平(P<0.05)。结果表明，发酵中药显着改善肉仔鸡的免疫机能和抗氧化机能，其使用效果优于中药组。
肉仔鸡；发酵中药；免疫机能；抗氧化机能
中草药是我国宝贵的文化遗产，是几千年来中华民族同疾病作斗争的智慧结晶，随着对中药制剂的深入研究，微生物发酵中药作为一种新的中药炮制方法日益受到人们的重视，与中药相比，发酵中药具有明显优势。张文等[1]报道，与未发酵中药复方相比，经过芽孢菌7348发酵后的中药对大肠杆菌、沙门氏菌具有抑制作用或显着抑制作用，对金黄色葡萄球菌具有显着或极显着的抑制作用；崔聪[2]研究证明，山茱萸发酵后对自由基清除率有大幅度的提高，尤其是山茱萸嗜酸乳杆菌发酵组的效果最好；韩春杨等[3]利用自制菌液发酵中药后制得发酵中药，该制剂显着提高了肉鸡免疫机能、改善了生产性能；刘观忠等[4]报道，利用六神曲中的酵母菌发酵中药制得的发酵中药显着提高了肉仔鸡生产性能，改善了血液生化指标。为了进一步验证发酵中药的实际应用效果，本研究对发酵中药添加剂对肉仔鸡免疫机能和抗氧化机能的影响进行了检测，旨在为发酵中药在家禽上的合理应用提供科学参考。
1 材料与方法
1.1 试验动物与日粮
180只1日龄雄性AA肉仔鸡随机分为3个处理，每个处理6个重复，每个重复10只鸡，分别饲喂日粮：A空白对照组，饲喂基础日粮；B中药对照组，饲喂基础日粮+0.5%中药；C发酵中药组饲喂基础日粮+0.5%发酵中药。日粮配方及免疫程序另文报道[2]，其他按常规进行。
1.2 中药及发酵中药制剂的制备
中药组方：黄芪、贯众、板蓝根、何首乌、山楂、女贞子、艾叶，将上述7味中药粉碎，过60目筛，按一定比例混合即得中药粉剂；发酵中药组是将上述中药粉剂加六神曲、淀粉、水按比例混匀，手握成团，撒开即散为宜，装入发酵罐中，压实密封，在30 ℃生化培养箱中密封发酵48 h。
1.3 样品采集及分析方法
在21和42日龄，每个重复取1只鸡颈静脉放血，屠宰，摘除脾、胸腺、法氏囊，分别称重；接血分离血清和血浆各一份并分装，于-30 ℃冷冻保存，血清用于测定免疫指标，血浆用于测定抗氧化指标；在仔鸡腿肌相同部位取样，4 ℃冰箱冷藏，24 h后制成10%的组织匀浆，用于测定肌肉中MDA含量和SOD活性。
1.3.1 免疫器官指数 免疫器官指数= 器官重量/活体体重×100%。
1.3.2 血清溶菌酶活性、球蛋白含量、NDV抗体水平 血清溶菌酶活性利用比浊法测定，血清与应用菌液反应后，根据透光度计算溶菌酶含量。
血清球蛋白(GLB)由总蛋白和白蛋白之差求出，血清总蛋白(TP)用双缩脲法，血清白蛋白(ALB)用溴甲酚绿比色法，以上试剂盒均购自于南京建成生物工程研究所，按照说明书进行测定。
NDV抗体水平用微量法红细胞凝集抑制(HI)试验测定。
1.3.3 抗氧化机能 总超氧化物歧化酶(T-SOD)采用黄嘌呤氧化法测定；血浆及腿肌中MDA的测定：采用硫代巴比妥酸(TBA)法测定；谷胱甘肽过氧化物酶的活性(GSH-PX)以催化GSH的反应速度来表示。腿肌匀浆蛋白质测定采用考马斯亮蓝法(CBB)，试剂盒均为南京建成生物公司产品，严格按照说明测定。
1.4 统计方法
试验数据采用SPSS17.0的One-Way ANOVA进行单因素方差分析，采用LSD法进行多重比较，数据差异性以P<0.05为显着水平。
2 结 果
2.1 免疫器官指数
在第3周龄，发酵中药组肉鸡胸腺指数显着(P<0.05)高于其他各组，在第6周龄，各个免疫器官指数之间没有显着差异(表1)。
2.2 血清溶菌酶的活性、球蛋白含量和ND抗体水平
第3周龄，发酵中药组溶菌酶活性显着高于空白组(P<0.05)，而中药组肉仔鸡血清中球蛋白水平(P<0.05)、ND抗体水平(P<0.05)显着降低，到第6周龄，中药组球蛋白含量显着升高(P<0.05)，而溶菌酶的活性、ND抗体水平各组之间差异均不显着(表2)。
2.3 仔鸡抗氧化机能
结果表明，6周龄发酵中药(P<0.05)和中药组(P<0.05)的仔鸡血浆的GSH-PX活性都显着升高，发酵中药组(P<0.05)，中药组(P<0.05)腿肌的MDA含量都显着降低(表3)。
表1 肉仔鸡免疫器官指数
Table 1 Immune organ index of broilers %
周龄Week分组Group胸腺指数Thymusindex脾脏指数Spleenindex法氏囊指数BursalindexA0.16±0.01b0.10±0.020.18±0.023周3weekB0.17±0.02b0.16±0.020.15±0.03C0.23±0.02a0.11±0.010.21±0.03A0.15±0.020.24±0.030.13±0.016周6weekB0.14±0.030.18±0.030.12±0.02C0.15±0.030.14±0.030.12±0.04
a，b.表中同列平均值肩标字母无相同者差异显着(P<0.05)。下同
a，b.Means in the same column without common superscripts differ significantly(P<0.05).The same as below
表2 肉仔鸡血清免疫指标
Table 2 Serum immune indexes of broilers
周龄Week分组Group溶菌酶/(U·mL-1)Lysozyme球蛋白/(g·L-1)GlobulinND抗体/(Log2)NDantibodyA165.56±14.28b9.68±1.14a7.50±0.29a3周3weekB234.72±17.36ab4.58±1.06b5.00±0.00bC302.06±20.35a8.23±1.12ab7.00±1.08aA283.62±24.783.49±2.04b5.33±1.206周6weekB245.59±24.2710.86±2.24a4.00±0.41C292.58±51.278.22±1.90a3.75±0.25
表3 肉仔鸡抗氧化机能
Table 3 Antioxidant ability of broilers
分组Group血浆T-SOD/(U·mL-1)PlasmaT-SOD血浆GSH-PX/(U·mL-1)PlasmaGSH-PX血浆MDA/(nmol·mL-1)PlasmaMDA腿肌SOD/(U·mg-1)ThighSOD腿肌MDA/(nmol·mg-1)ThighMDAA158.78±7.152449.59±167.13b6.85±0.1025.60±4.881.38±0.34aB175.06±6.913334.71±293.15a6.51±0.7027.72±3.830.64±0.08bC169.22±7.133178.42±212.12a6.09±0.5429.67±8.520.37±0.12b
3 讨 论
本中药组方依据中兽医理论，辨证论治的原则制定。黄芪、首乌、女贞子有补血、养肝肾作用；贯众、板蓝根、艾叶，能清热解毒、驱虫、避秽，用于预防疾病；山楂消积导滞，有促进消化吸收作用。纵观全方，本方调节阴阳平衡，提高机体的正气，可以减少多种疾病，控制肠道寄生虫，从而促增重，改善肉品质。现代大量研究表明，黄芪多糖[5-6]、黄芪复方[7]、女贞子[8]、复方女贞子[9-10]不同程度提高了动物免疫功能。然而在本研究中，中药方的实际应用效果并不理想，中药组虽然提高了溶菌酶的活性，提高了GSH-PX的活性，降低了腿肌中MDA的含量，但是对球蛋白产生的影响是先抑制，后促进。说明中药发挥效果可能有时间效应，另外第3周仔鸡抗体水平受到抑制，这说明中药的使用也可能产生一定的副作用。
本研究发现，发酵中药组的使用效果优于空白组和中药组，与空白组相比，发酵中药显着提高了第3周龄仔鸡胸腺指数、血清溶菌酶的活性。胸腺是动物机体的3个重要的免疫器官之一，发酵中药促进了胸腺的早期发育，有利于提高机体早期的细胞免疫机能；溶菌酶是由巨噬细胞合成的一种重要水解酶，为机体非特异性免疫因子之一，可以反映细胞免疫功能和机体抗感染能力[11]。因此溶菌酶的活性的提高，有利于提高机体非特异性免疫机能。与中药组相比，发酵中药组仔鸡3周龄仔鸡胸腺指数、ND抗体水平都显着高于中药组。说明了发酵中药组细胞免疫、体液免疫机能都优于传统中药。
韩春杨等[3]指出，微生物发酵中药是一种新的中药炮制方法，通过微生物的降解作用，最大限度地提取药物的有效成分和活性物质，并生成新的药物成分，这可能是中药发酵后药效增强的主要机制。并且该作者通过检测分析，发现中药中的一些成分经过发酵后含量增加1～4倍，并且产生了某些新的特征吸收峰；而秦俊杰[12]研究发现，利用从动物肠道中分离出的某菌株对中药黄芪、党参进行发酵，极显着提升了黄芪多糖和党参多糖的含量，最高分别增加了80%和90%；崔聪等[2]研究发现山茱萸多糖经过菌种发酵后，小分子成分含量明显增加，大分子的多糖含量明显下降；朱新术[13]研究表明利用筛选的某乳酸菌株发酵黄芪后，微生物与中药之间产生了协同效果，粗多糖得率提高了131%，菌体浓度提高了110%。微生物与中药之间存在协同效应[14]，有可能也是发酵中药发挥药效的作用机理之一。本研究中所用六神曲含有大量的酵母菌和少量的乳酸菌，复方中药通过酵母菌、乳酸菌发酵后，中药中的成分、以及各成分的含量可能发生了某些改变，鉴于本次试验条件的局限性，仅对发酵中药制剂使用效果进行了初步测定，其作用机制尚需进一步的研究。
总之，本研究发现，与空白组相比，发酵中药显着提高了3周龄仔鸡胸腺指数、血清溶菌酶的活性、6周龄仔鸡血浆谷胱甘肽过氧化物酶的活性，显着降低了6周龄腿肌MDA含量；与中药对照组相比，发酵中药显着提高了5周龄仔鸡胸腺指数、ND抗体水平。结果表明，发酵中药显着改善肉仔鸡的免疫机能和抗氧化机能，其应用效果优于中药组。
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(编辑 郭云雁)
Effects of Fermented Chinese Herbs on Immunity and Antioxidant Ability of Broilers
AN Sheng-ying，MA Xue-hui，LIU Guan-zhong
(CollegeofAnimalScience&Technology，AgriculturalUniversityofHebei，Baoding071000，China)
The experiment was conducted to study the effects of fermented Chinese herbs on immune function and antioxidant ability of broilers.The traditional Chinese herbs(Astragalus，Dryopteris crassirhizoma，Radix isatidis，Polygonum multiflorum，Fructus crataegi，Ligustrum lucidum，Argy wormwood leaf) were mixed evenly in proportion with medicated leaven，starch and water，then fermented under 30 ℃ for 48 h in biochemical incubator.In order to test the effects of the fermented herbs，animal trial was carried out as follows.180 one-day-old male AA broiler chicks were randomly divided into 3 treatments，6 replicates per treatment，10 birds each replicate.The different treatments were fed the following diets：A group，fed basal diet；B group，fed basal diet +0.5% Chinese herbs；C group，fed basal diet +0.5% fermented Chinese herbs.The results showed that：(1) Compared with A group，fermented Chinese herbs significantly improved the thymus index(P<0.05)，serum lysozyme activity of broilers at 3 week(P<0.05)，improved plasma GSH-Px activity at 6 week(P<0.05)，decreased MDA content in thigh muscle of broilers at 6 week(P<0.05)；(2) Compared with B group，fermented Chinese herbs significantly improved the thymus index(P<0.05)，ND antibody level of broilers at 3 week(P<0.05).Overall，the immune function and antioxidant ability of broilers can be improved by the fermented Chinese herbs，which have better applicational effect than the herbs.
broiler；fermented Chinese herb；immunity ability；antioxidant ability
10.11843/j.issn.0366-6964.2015.05.025
2014-08-14
河北省科技支撑项目( 09224015)
安胜英(1972-)，女，河北藁城人，博士，主要从事家禽生产与家禽营养研究，E-mail：asybluesky@163.com
S831；S815.5
A
0366-6964(2015)05-0863-05
