ELISA联合NAT技术对血液筛查的应用价值和输血残余风险的对比分析

林玉蓓 鲁思文△ 项汉城 詹晓燕

(1.江苏省中医院输血科，江苏 南京 210029；2.江苏省血液中心供血科，江苏 南京 210000)



ELISA联合NAT技术对血液筛查的应用价值和输血残余风险的对比分析

林玉蓓1鲁思文1△项汉城2詹晓燕1

(1.江苏省中医院输血科，江苏 南京 210029；2.江苏省血液中心供血科，江苏 南京 210000)

目的 探讨ELISA联合NAT技术对血液筛查的应用价值并对其输血残余风险进行对比分析。方法 选择无偿献血者标本共计58 810人份为研究对象，采用两种不同厂家生产的ELISA试剂盒进行乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、丙肝抗体(抗-HCV)及艾滋病抗体(抗-HIV)的检测，并采用核酸扩增技术(NAT)进行HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA的检测，对ELISA阴性、NAT阳性的标本进行追踪分析。结果 58 810人份血清中ELISA检测结果为阳性有607例，阳性率1.03%，其中HBsAg阳性率0.52%(305/58 810)，抗-HCV阳性率0.32%(188/58 810)，抗-HIV阳性率0.19%(114/58810)；NAT检测结果为阳性有260例，阳性率0.44%，其中HBV DNA阳性率0.22%(128/58 810)，HCV RNA阳性率为0.14%(80/58 810)，HIV RNA阳性率0.09%(52/58 810)。对14例ELISA阴性、NAT阳性标的献血者进行定期采血随访分析，其中8例证实为窗口期HBV感染，6例证实为隐匿性乙型肝炎。结论 ELISA检测对HBV感染存在一定的漏检率，在血液筛查中，取消一遍ELISA 检测，增加一遍NAT检测，可有效降低输血感染残余风险，提高输血安全。

酶联免疫吸附试验； 核酸扩增技术； 血液筛查； 残余风险

输血传染病的预防和控制是血液安全最重要的关注点之一。本文旨在分析ELISA联合NAT技术对血液筛查的应用价值并通过对ELISA阴性、NAT阳性标本的追踪分析，探讨NAT检测技术对降低输血传播疾病残余风险的可行性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2011年1月至2013年1月来自江苏省血站无偿献血者标本共计58 810人份。其中男32 453人份(55.2%)，女26 357人份(44.8%)，年龄18～55岁，平均年龄(28.3±18.9)岁，所有献血者均符合国家标准GB 18467-2001《献血者健康检查要求》后方可献血。每位献血者均平行采集两管血液，离心后一管采用ELISA法进行检测，另一管采用NAT法进行检测。

1.2 检测方法 按照标准要求，采用ELISA法进行乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、丙肝抗体(抗-HCV)及艾滋病抗体(抗-HIV)的检测。采用不同试剂厂家检测2遍，HBsAg试剂盒购自上海科华生物工程股份有限公司、厦门英科新创科技有限公司，抗-HCV试剂盒购自北京万泰生物药业股份有限公司、珠海丽珠生物试剂有限公司，抗-HIV试剂盒购自荷兰生物梅立埃、北京万泰生物药业有限公司。采用NAT技术进行HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA的检测，检测试剂购自美国诺华诊断公司，为三联荧光病毒TMA 核酸检测试剂盒，可同时检测 HBV、HCV、HIV三种病毒。主要检测仪器：STAR全自动进样仪、FAME2420 全自动酶联免疫分析仪、荧光PCR仪、核酸提取仪等。

1.3 对ELISA阴性、NAT阳性标本的随访分析 对于ELISA阴性、NAT阳性的患者，通过省血站及时与献血者取得联系，重新采集血样进行乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗体(抗-HBs)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝e抗体(抗-HBe)、乙肝核心抗体(抗-HBc)、抗-HCV及抗-HIV的检测，于第0，7，14，21，28天进行采样追踪分析，监测感染的状态及血清学的转换。

2 结 果

2.1 ELISA检测结果 阳性607例(1.03%)，其中有12份标本HBsAg与抗-HCV同时阳性，其中HBsAg阳性率0.52%(305/58 810)，抗-HCV阳性率0.32%(188/58 810)，抗-HIV阳性率0.19%(114/58 810)。

2.2 NAT检测结果 阳性260例(0.44%)，其中有8份标本HBV DNA与HCV RNA同时阳性，其中HBV DNA阳性率0.22%(128/58 810)，HCV RNA阳性率0.14%(80/58 810)，HIV RNA阳性率0.09%(52/58 810)。

2.3 ELISA与NAT检测结果对比 607例ELISA检测为阳性的标本中，有361例经NAT检测为阴性，其中HBV DNA阴性者180例，占49.9%，HCV RNA阴性者110例，占30.5%，HIV RNA阴性者71例，占19.7%。58 203例ELISA检测为阴性的标本中，有14例经NAT检测为阳性，均为HBV DNA阳性。见表1。

表1 ELISA与NAT检测结果对比

2.4 对ELISA阴性、NAT阳性标本的随访分析 对14例ELISA阴性、NAT阳性标的献血者由省血站进行定期采血追踪分析，14例献血者均为HBV DNA阳性，第0天，乙肝五项阴性、HBV DNA阳性的有8例，经第0，7，14，21，28天的追踪分析，均表现为HBsAg阳性，其中大三阳者5例，小三阳3例，追踪期间ALT升高明显，HBV DNA阳性，病毒载量持续增高，证实为窗口期HBV感染；另有6例虽HBsAg阴性，但HBcAb持续阳性，证实为隐匿性乙型肝炎。

3 讨 论

2012年初，国家卫生部颁布新的《血站技术操作规程》，对血液筛查的检测方法有了新的要求，即允许采供血机构采用 ELISA检测技术和NAT检测技术对血液进行安全检测，NAT技术在我国逐步推广，对降低输血风险有重要意义。作为临床用血单位，面临患者用血安全问题，更应支持两种方法的“双保险”检测。

本研究发现，样本无偿献血者中，ELISA检测阳性率1.03%，其中HBsAg阳性率0.52%，抗-HCV阳性率0.32%，抗-HIV阳性率0.19%。NAT检测阳性率0.44%，其中HBV DNA阳性率0.22%，HCV RNA阳性率0.14%，HIV RNA阳性率0.09%。说明研究样本献血者中不合格的指标主要是乙型肝炎病毒。本研究发现，607例ELISA检测为阳性的标本中，有361例经NAT检测为阴性，其中HBV DNA阴性者180例，占49.9%，HCV RNA阴性者110例，占30.5%，HIV RNA阴性者71例，占19.7%。58 203例ELISA检测为阴性的标本中，有14例经NAT检测为阳性，均为HBV DNA阳性，说明ELISA检测有漏检标本，存在一定的输血传播疾病风险。

ELISA与NAT 检测技术在血液筛查中存在互补作用，主要体现在以下两个方面：(1)NAT可降低窗口期对用血安全的影响。ELISA是以血液中抗体、抗原为检测对象的，而病毒从进入人体到产生足够数量的抗体时往往需要较长的时间，此为窗口期。有研究发现，70%的HCV及 90%的HBV及HIV及漏检是由于窗口期引起的[1]，而NAT是以血液中病原体的核酸为检测对象的，大大缩短了窗口期，而且在感染早期，保护性抗体尚未产生，病毒载量很高，传染性很强，因此NAT可降低窗口期对用血安全的影响[2]。(2)ELISA可弥补NAT的漏检情况。虽然抗体在机体出现的时间较晚，但持续时间较长，而病毒在外周血中的存在有间歇性现象， ELISA可弥补NAT的漏检情况，因此NAT也不能完全替代ELISA在血液筛查中的作用，两者结合更能提高临床用血的安全性[3-4]。

[1] 曾劲峰，郑欣，许晓绚. ELISA 检测与 NAT 在血液筛查应用中的互补性研究[J].中国输血杂志，2012，25(10)：1012-1015.

[2] 吴敬林，周仲民. 核酸检测降低输血残余风险研究现状[J]. 齐齐哈尔医学院学报，2014，35(8)：1198-1199.

[3] 莫丕立，吴军军，马联．核酸检测技术在采供血机构中的应用[J].中国输血杂志，2011，24(9) : 821-823．

[4] 王芳，栾燕，刘显智．核酸检测技术(NAT)在献血者人类免疫缺陷病毒筛查中的应用[J].中国输血杂志，2010，23(10)：892-894.

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△通信作者，E-mail：lusiwen_1969@126.com，13776668755