张小玲 王娟
(西安大兴医院产科，陕西 西安 710002)
复发性流产主要是指持续出现两次或两次以上自然流产[1]。在全部复发性流产患者中，有50%左右的患者无法准确了解其发病原因[2]。主动免疫治疗理念认为，出现不明原因性反复性流产通常与孕妇机体缺乏保护胎儿的抗体有关，从而引起母胎免疫识别紊乱，孕妇机体内免疫系统将胎儿作为“侵入者”，进而使得孕妇流产[3]。本文分析对原因不明性复发性流产患者实施淋巴细胞主动免疫治疗的效果，现报告如下。
1 资料与方法
1.1一般资料 选择2017年10月至2018年10月本院原因不明性复发性流产患者50例，患者年龄30～38岁，平均(34.27±2.11)岁。纳入标准[4]：(1)≥2次不明原因自然流产病史；(2)超声检查无排卵异常；(3)患者及其丈夫染色体检查正常；(4)自身抗体检查均为阴性；(5)无淋巴细胞主动免疫治疗史；(6)患者及其家属知情同意，签署知情同意书。排除标准[5]：(1)家族遗传病史；(2)内分泌系统异常；(3)自身抗体检查阳性。
1.2方法 分别于治疗前以及治疗后3周采集患者空腹上臂静脉血样本5 mL，使用乙二胺四乙酸二钠进行抗凝处理，将其中2 mL血液样本放置在3 000转/min的离心机中进行持续10 min离心处理，选择血清标本，并放置在冰箱中保存。将其中3 mL血液样本进行淋巴细胞分离。每位患者均实施一个疗程(共3次)淋巴细胞主动免疫治疗，每次治疗后暂停3周，随后继续开始治疗。其中淋巴细胞治疗浓度30～50×106个/L，细胞悬液剂量1.5～2.0 mL。淋巴细胞分离液采购至上海融禾医药科技发展有限公司，逆转录试剂盒采购至杭州主诺生物技术有限公司，聚合酶联反应试剂盒采购至上海联迈生物工程有限公司，酶联免疫吸附试剂盒采购至上海恪敏生物科技有限公司。提取血液样本中RNA总量，并进行DNA合成。使用逆转录—聚合酶链反应方法检测患者血液样本中Foxp3和ROR-γt的RNA水平，同时使用酶联免疫吸附测定法检测血液样本中IL-17A和IL-35水平，全部操作均严格依据试剂盒使用说明开展。鼓励全部患者在治疗后3个月内再次妊娠。
1.3观察指标 (1)观察并比较患者治疗前后Foxp3、ROR-γt、EBi3以及IL-17A因子中总RNA表达量[6]。(2)观察并比较治疗前后患者血清样本内中IL-17A以及IL-35水平。(3)对比妊娠成功以及妊娠失败孕妇治疗前后上述指标进行比较。持续随访，了解患者妊娠情况，对于妊娠的孕妇持续随访28周，28周后无流产情况发生即可判定为妊娠成功[7]。
2 结 果
2.1Foxp3、ROR-γt、EBi3及IL-17A中总RNA表达量 治疗前患者Foxp3以及EBi3总RNA表达量均低于治疗后，差异有统计学意义(P<0.05)，治疗前患者ROR-γt以及IL-17A总RNA表达量均高于治疗后，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。
表1 治疗前后Foxp3、ROR-γt、EBi3以及IL-17A中总RNA表达量对比
2.2IL-17A以及IL-35水平 治疗前患者IL-17A(16.23±4.19)ng/L，治疗后(14.51±1.92)ng/L；IL-35(11.55±2.24)ng/L，治疗后(26.37±2.72)ng/L。治疗前患者IL-17A水平高于治疗后，IL-35水平低于治疗后(均P<0.05)。
2.3妊娠成功及妊娠失败孕妇各因子总RNA表达量和水平 随访发现，30例患者妊娠成功，20例患者妊娠失败，两组IL-35、Foxp3以及EBi3比较，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。
表2 妊娠成功及妊娠失败孕妇各因子总RNA表达量和水平对比
3 讨 论
在正常孕妇机体内，存在一种与配偶淋巴细胞发生抵抗作用的特异性IgG抗体，其可对淋巴细胞反应产生抑制作用，避免孕妇机体内淋巴细胞对胚胎滋养层细胞进行杀灭，从而降低孕妇机体免疫系统对胚胎的攻击，其被称作封闭抗体[8]。对于正常孕妇而言，在妊娠早期即可在机体内检测出封闭抗体，并且在妊娠中期其水平可达到峰值。不明原因性反复性流产患者机体内人类白细胞抗原水平较高，因此封闭抗体水平偏低，极易导致孕妇机体免疫系统对胎儿形成攻击，进而出现流产情况[9]。CD4+T淋巴细胞中包含Treg细胞以及Th17细胞两个亚群，Treg细胞对自身T细胞所介导的免疫反应具有抑制作用，从而确保机体内环境平稳[10];Foxp3则是Treg细胞调节因子，Treg细胞可产生IL-35，而IL-35具有调节T淋巴细胞活性的作用，从而发挥抑制免疫反应作用，同时其还可增强Treg细胞增殖能力[11]。Th17细胞转录因子是ROR-γt，其可生成IL-17A，其可通过多种形式对炎症的发生以及发展形成促进作用，并且其还可促进血管生成[12]。
本研究结果中，治疗前患者Foxp3以及EBi3总RNA表达量均低于治疗后(P<0.05)，治疗前患者ROR-γt及IL-17A总RNA表达量均高于治疗后(P<0.05)。治疗前患者IL-17A水平高于治疗后，IL-35水平低于治疗后(均P<0.05)。30例患者妊娠成功，20例患者妊娠失败，两组IL-35、Foxp3及EBi3差异显着(P<0.05)。对患者实施主动免疫治疗可升高Foxp3以及IL-35水平，并且还可降低IL-17A以及ROR-γt水平，说明在发生流产进程中，Th17细胞因子发挥促炎效果，导致机体形成免疫杀伤状态。通过实施主动免疫治疗，使机体形成免疫耐受，从而改善流产情况。
