王丽娜 朱艳 张丽

(1.汉中市人民医院皮肤科,陕西 汉中 723000；2.陕西省核工业二一五医院中西医结合外科学，陕西 咸阳 712000；3.陕西省核工业二一五医院皮肤科,陕西 咸阳 712000)

皮肤黑色素瘤(CMM)是一种广泛浸润皮肤表皮、皮下组织及其黏膜深层组织的皮肤肿瘤，具有发病率高、恶性程度高、预后差等特点，近年来发病率和病死率呈上升趋势[1]。研究[2]发现，CMM的发生与遗传、过度光照、摩擦刺激、个人免疫抑制等因素有关。Toll样受体4(TLR4)是启动细胞内炎症信号传导的关键因子，在免疫调节和全身炎症反应中发挥着重要作用[3]。有研究[4]指出，血管新生是肿瘤发展的重要病理特征，血管内皮生长因子(VEGF)是一种由正常细胞或肿瘤细胞及其相关间质细胞生成分泌的促血管内皮细胞生长因素，在血管生成中发挥着重要作用。本文主要探讨TLR4、VEGF在CMM组织中的表达及其与临床病理特征的关系。

1 资料与方法

1.1临床资料 选择本院2019年4月至2021年5月收治并行手术治疗的88例CMM患者为研究组，其中男48例，女40例；年龄(47.55±8.31)岁；Clark分级：I级19例，Ⅱ级13例，Ⅲ级10例，Ⅳ级26例，V级20例。另选择同期收治的行手术治疗的71例皮内痣患者为对照组。对照组中男46例，女42例；年龄(47.94±8.25)岁。纳入患者临床及病理资料均完整；均经组织病理学确诊为CMM；入院前未接受任何治疗。已排除合并其他恶性肿瘤者；除皮肤外其他部位有黑色素瘤者；肝肾功能不全、风湿免疫性疾病、严重感染性疾病患者。两组临床资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。患者及家属均知情同意。

1.2方法 兔抗人TLR4多克隆抗体(北京博奥森生物技术有限公司)、兔抗人VEGF单克隆抗体(北京博奥森生物技术有限公司)，免疫组织化学染色试剂盒、光学显微镜、DAB显色液等均由实验室提供。将病理蜡块按照常规连续切片，切片厚3μm，均按照试剂盒说明书进行TLR4、VEGF免疫组化染色。

1.3结果判断 染色判读：TLR4阳性为细胞质或胞膜着色呈棕黄色，VEGF细胞质胞浆或细胞膜内出现均匀棕黄色颗粒为阳性。细胞免疫组化结果均由两位病理科医师在双盲条件下进行独立判断，每张切片随机选取5个高倍视野(×200)，每个视野分别记录50个肿瘤细胞的染色强度与染色密度，采用半定量计数法判定染色结果，染色强度：无色0分，淡黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分；染色密度：着色细胞比例≤5%0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分。两者记分相乘，≤3分为阴性表达，>3分为阳性表达。

2 结 果

2.1阳性表达 TLR4、VEGF在CMM组织中的阳性表达明显高于皮内痣(P<0.05)。见表1。

表1 TLR4、VEGF在CMM和皮内痣组织中的阳性表达

2.2临床病理特征的关系 不同Clark分级、淋巴结转移的CMM患者TLR4、VEGF阳性表达比较有差异(χ2=19.471、4.718，P<0.05)。见表2。

表2 TLR4、VEGF表达与CMM临床病理特征的关系

2.3相关性分析Spearman相关性分析结果显示，VEGF表达阳性和TLR4计数同样呈正相关。见表3。

表3 CMM组织TLR4与VEGF的相关性

3 讨 论

既往研究[5]指出，CMM发病机制较为复杂，多与遗传、环境、免疫缺陷等因素有关，容易造成某一细胞基因水平生长调控失常，使细胞增殖与凋亡出现异常，进而出现癌变。肿瘤细胞的免疫活性可识别肿瘤逃避集体免疫系统，在肿瘤发展过程中发挥着重要作用。研究[6]显示，肿瘤细胞上表达的TLRs的激活对抑制免疫细胞的抗肿瘤作用具有重要作用，同时其能够通过介导炎症因子和细胞因子，提高炎症反应，造成肿瘤微环境中的免疫细胞聚集，进一步释放更多的促血管生长因子和细胞生长，加重肿瘤严重程度。TLR4是参与炎症和感染调控过程中的细胞表面受体，高TLR4水平与细胞的增殖和高蛋白合成存在密切关联[7]。研究[8]发现，TLR4可通过My888进一步激活ERK1/2入核调节核转录蛋白活性，进而促进成纤维细胞的生长和胶原沉积。有研究指出[9]，慢性炎症会增加肿瘤发生和发展的概率，而TLR4在炎症反应中，发挥着启动适应性免疫反应的重要作用，不仅在免疫细胞上有表达，在肿瘤细胞上同样有表达。细胞因子和生长因子是参与CMM发病、发展中的重要因子，痔细胞可通过产生生长因子和趋化因子，进而上调生长因子VEGF表达，进而引发CMM细胞浸润和转移[10]。胡燕燕等[11]研究发现，血管新生在CMM垂直生长期的转移侵袭活动中发挥着重要作用，而VEGF是调节病理性和生理性血管新生的重要信号通路因子，血管新生肿瘤良好血供的解剖学基础，因此VEGF在肿瘤发生发展中发挥着重要作用。

本文结果显，TLR4、VEGF在CMM组织中的阳性表达明显高于皮内痣，提示相较于正常皮肤组织，CMM组织中TLR4、VEGF阳性表达呈现高水平。此外不同Clark分级、淋巴结转移的CMM患者TLR4、VEGF阳性表达比较有差异，提示TLR4、VEGF在CMM肿瘤的侵袭和转移中发挥着重要作用。研究[12]显示，CMM的侵袭和转移是多因素的复杂过程，其中TLR家族和VEGF家族中的细胞因子和蛋白高表达在肿瘤转移中发挥着重要作用。同时VEGF表达阳性和TLR4计数同样呈正相关，推测原因可能是肿瘤微环境中的VEGF可通过下调TLR4的表达进而负向调控肿瘤细胞的免疫功能。