唐 芳,何文军,尹向阳,唐林国

(1.广东省广州市人口和计划生育科学研究所中心实验室,广州 510410;2.广东省中医院芳村分院检验科,广州 510370）

在生化分析仪的使用过程中,试剂间的携带污染问题长期存在[1-3],其隐蔽性强,往往是导致错误结果甚至是引起误诊的一个重要原因,在实际工作中表现为某一项目的测定结果经常偏低或偏高,或出现试剂不稳定现象[4]。因此试剂间携带污染问题不容忽视。本科使用罗氏COBAS 400全自动生化分析仪原装配套试剂检测血清总二氧化碳(total carbon dioxide,TCO2)时,曾出现上午8:00校准TCO2,第2天上午8:00如不再行校准,质控结果偏低甚至失控的现象,而使用同型号仪器与试剂的另一家医院却不存在此问题。分析发现本科采用罗氏COBAS 400全自动生化分析仪开展的肝功能项目中,总胆汁酸(total bile acid,TBA)与 TCO2均使用409 nm波长,TBA试剂在管道中不易冲洗,为了解是否TBA对TCO2试剂产生干扰,进行如下实验。

表1 TBA试剂组分与不同样本混合后的TCO2检测结果(mmo l/L)

表2 调整前后校准周期及室内质控CV值的比较

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器 409 nm酶法TCO2试剂及TCO2校准液(25 mmo l/L)由罗氏公司提供(原装配套);TBA试剂(循环酶法)由东欧公司提供;TCO2质控血清由英国RANDOX公司提供;COBAS 400全自动生化分析仪为罗氏公司产品。

1.2 方法 (1)分别将TBA-R1、TBA-R2试剂各200μL作为待测标本检测TCO2;(2)分别检测TCO2校准液、TCO2质控血清、患者血清中TCO2;(3)分别将 TCO2校准液、TCO2质控血清、患者血清与R1试剂各100μL按比例 1∶1混合后检测TCO2;(4)分别将 TCO2校准液、TCO2质控血清、患者血清与R2试剂各100μL混合后检测TCO2;(5)按试剂应用比例,分别将其与 TCO2校准液 ,TCO2质控血清,患者血清按(3∶1∶4)混合(即R1:90μL,R2:30μL,TCO2校准液/TCO2质控血清/患者血清:120μL)进行检测;(6)取40例患者血清,每例血清先采用COBAS 400全自动生化分析仪检测TBA后,再检测TCO2,计算40例患者血清TCO2的平均值①,然后在不测TBA情况下,直接检测40例血清标本的 TCO2,计算此时TCO2的平均值②。上述步骤均重复2次,取平均值。将测试项目 TCO2置于 TBA之前,设置附加清洗程序(每次加完TBA试剂后用专用清洗液和去离子水各清洗2次),统计调整参数前后各6个月的TCO2室内质控变异系数(coefficient of variation,CV)值,比较调整前后的校准周期。

1.3 统计学处理 利用SPSS12.0统计软件对40例患者血清标本TCO2的平均值①和平均值②结果进行成组t检验,以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

TBA各试剂组分与不同样本混合后TCO2的检测结果见表1。TBA-R2试剂对 TCO2结果影响最大,其中,对 TCO2质控血清的TCO2检测结果影响尤为明显。40例患者血清标本,先测 TBA,再测TCO2所得的平均值①为20.2 mmol/L,不测TBA而直接检测TCO2所得的平均值②为23.5 mmo l/L,平均值①和平均值②比较,差异有统计学意义(P＜0.05),提示TBA试剂所携带的污染对TCO2结果有影响。调整前后校准周期及室内质控CV值见表2,调整测试顺序和设置附加清洗程序后TCO2试剂稳定性得到保证,调整前校准周期为1 d,调整后为7 d,调整前后室内质控CV值结果接近。

3 讨 论

在使用生化分析仪的过程中,试剂针以及管道不可避免要同各种不同的试剂接触[5-6]。一般的生化项目分析仅需要几微升体积的标本,而试剂的加样体积往往需要几十微升至几百微升,当遇到较难清洗的试剂时,常规的方式难以彻底清洗干净。如果前一个分析项目的试剂组分中含有干扰下一个分析项目的成分,就极易造成分析项目间的试剂携带污染[7]。

生化分析仪在使用过程中,不同检测项目间会存在交叉污染。检测人员需了解相邻检测项目是否存在干扰或被干扰的可能[8]。COBAS 400全自动生化分析仪采用的试剂除TBA为开放试剂外,其余均为原装配套试剂,R1、R2试剂使用同一试剂针。采用409 nm酶法检测TCO2,即利用磷酸烯醇式丙酮羧化酶催化样本中的TCO2生成草酰乙酸和磷酸,草酰乙酸在苹果酸脱氢酶催化下形成苹果酸,同时还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinam ide adenine dinucleotide,reduced,NADH)类似物氧化成NAD+类似物,在409 nm波长处可检测吸光度的下降值,样品中TCO2含量与吸光度成正比,与TBA测定使用了相同的波长[9-11],TBA试剂成分的残留对TCO2试剂产生影响,导致后者不稳定,影响检测结果。尽管 COBAS 400全自动生化分析仪使用1次性比色杯,而管道内并未用大量去离子水冲洗,导致TBA试剂在管道中残留,这是试剂污染产生的重要原因。

本实验提示TBA试剂对血清TCO2的测定有明显干扰,其中 R1试剂对 TCO2的影响较R2小,两者混合后影响有所减少,R1试剂的吸样量为几百微升,而R2试剂的吸样量仅为几十微升,两者用量悬殊也可能是本实验试剂携带污染影响降低的原因之一。调整附加清洗程序的顺序后此类现象消失,质控情况明显好转。这种通过调整测试顺序和设置附加清洗程序的方法,延长TCO2校准周期,质控CV值同每天校准一次时无明显差异,达到了预期效果,保证了在1个质控期(24 h)内结果的准确性与稳定性,从而延长TCO2校准周期,减少失控次数,达到了保证质量的同时,节约了人力和试剂成本。

[1] 胡亚远,沈舜钦.生化自动分析技术的现状及发展方向[J].实用医技杂志,2007,20(4):375-394.

[2] 粟文堂,杨华喜,刘雯.Dimension AR全自动生化分析仪CO2电极测血清总CO2的应用及评价[J].实用医学杂志,2007(9):1122-1123.

[3] 张秀明,李健斋,魏明竟,等.现代临床生化检验学[M].北京:人民军医出版社,2001:759-765.

[4] 张国伟,张少锋.雅培C8000生化分析仪总蛋白试剂的携带污染对血清镁测定的干扰及对策[J].检验医学,2007,22(6):749-750.

[5] 顾国宝,陈洁,李燕,等.全自动生化仪使用中项目间的交叉污染的探讨[J].上海医学检验杂志,2002,17(3):176-177.

[6] 陈继中,李旭光,唐吉斌.试剂携带污染对血清总胆汁酸测定结果的影响及消除措施[J].检验医学,2006,21(3):228-230.

[7] 蒋兴亮,任娟.双试剂溴甲酚绿法测定清蛋白的临床评价[J].重庆医学,2009,38(4):454-455.

[8] 李健,秦苏.日立7060-C生化分析仪使用中交叉污染的研究[J].重庆医学,2005,34(3):435.

[9] 丁振若,于文彬,苏明权,等.现代检验医学[M].北京:人民军医出版社,2007:681-682.

[10]韩志钧,黄志锋,卢业成,等.临床化学常用项目分析法[M].3版.沈阳:辽宁科学技术出版社,2005:357-377.

[11]Lynch MB.The measurement of total carbon dioxide(tCO2)in b lood specimens[J].Am JKidney Dis,2001,37(5):1106-1108.