杨赟平，杨双双，张莉萍
（重庆医科大学附属第一医院检验科 400016）
人乳头瘤状病毒（human papillomavirus，HPV）是一种具有高度宿主特异性的嗜上皮病毒，人类是其惟一宿主。研究表明，HPV感染可能诱导多种肿瘤的发生，例如结膜鳞状细胞癌、头颈部肿瘤、食管癌、乳腺癌、子宫颈癌、前列腺癌、阴茎癌等［1］；宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，发病率仅次于乳腺癌，居女性恶性肿瘤的第二位。在全世界范围内，宫颈癌的发病率和病死率均较高，我国每年宫颈癌的新发病例超过13万，占全球的1／4～1／3，给家庭和社会造成巨大的经济和社会负担［2］。HPV疫苗的问世使宫颈癌的预防成为可能。目前在发达国家HPV疫苗已经应用于临床，但研究表明HPV基因型的分布具有明显的年龄和地区分布特异性［3］，因此，临床使用HPV疫苗应考虑此异质性，目前在中国基于年龄分布的HPV感染研究报道较少，因此，本研究基于高危型HPV感染的现状以及年龄进行分层分析，旨在为HPV疫苗在重庆地区人群中的使用提供流行病学参考。
1 资料与方法
1.1 一般资料 采集2008年4月至2012年1月本院就诊的10 856例女性患者，年龄14～82岁，回顾性收集患者的相关临床信息。根据HPV检测结果将10 856例女性患者分为HPV阳性组和HPV阴性组。
1.2 方法
1.2.1 标本采集及保存方法 用无菌棉拭子将宫颈口过多的分泌物轻轻擦拭干净，更换宫颈刷，将其置于宫颈口，轻轻顺时针旋转5周，所有标本置已加有专用细胞保存液的取样管内，拧紧瓶盖，立即送检。
1.2.2 试剂及仪器 购于广东潮州凯普生物化学有限公司的HPV分型检测试剂盒，thermal cycler S1000PCR扩增仪以及Hybrimax医用核酸分子快速杂交仪。
1.2.3 DNA提取 取含有宫颈细胞的细胞保存液0.5mL，按照凯普生物化学有限公司的细胞裂解液说明书步骤提取DNA。
1.2.4 PCR扩增 按照说明书配置PCR mix，加入1μL DNA模板，瞬时离心5s，PCR反应条件为95℃，9min；94℃，20s；55℃，30s；72℃，30s；循环40次；72℃，5min。
1.2.5 杂交及结果判定 按照说明书进行操作，检测21种HPV基因型，其中高危型（16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型），低危型（6、11、4、43、44型）和其他型（53、66、Cp8304型），并在1h内分析结果。
1.3 统计学处理 采用SAS9.0软件进行统计学分析，计量资料采用表示，用t检验分析两组之间的差异，计数资料采用率表示，并采用χ2检验分析不同年龄组型感染率的差异，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 HPV检测结果 在10 856例妇科门诊样本中，HPV阳性者4 050例，检出率为37.3%，检出高危亚型2 956例，检出率为27.2%。其中，单一感染者2 472例，多重感染者484例，其中以二重感染最为常见。而在414例二重感染标本中以16型合并其他高危感染（52、58、33、18、31、39、56型）最为常见，其中16型合并52、58型感染最常见。
2.2 高危型HPV基因亚型分布 本院门诊就诊妇女单一高危型HPV感染率为22.8%。2 472例女性HPV单一亚型感染标本中，16型911例，18型160例，31型73例，33型203例，35型12例，39型64例，45型14例，51型15例，52型441例，56型41例，58型413例，59型23例，68型102例。16型（36.8%）最为常见，其次为52型（17.8%），58型（16.7%）。
2.3 HPV感染的年龄分层分布情况 HPV阳性组2 956例和HPV阴性组7 900例；HPV阳性组平均（35.99±8.63）岁，HPV阴性组平均（35.81±8.59）岁。结果显示 HPV阳性组和阴性组年龄分布差异无统计意义（t＝3.59，P＞0.05），不同年龄段 HPV感染率差异有统计学意义（χ2＝21.57，P＜0.01）。10 856患者中90例年龄信息不全，其中含有HPV高危型阳性者14例，因此将10 766女性患者按照年龄不同分为4个年龄段，分别为14～＜30岁，30～＜40岁，40～＜50岁，≥50岁。统计不同年龄段女性患者的高危型HPV感染率，结果显示14～＜30岁感染率为24.3%，30～＜40岁为28.0%，40～＜50岁为28.4%，≥50岁感染率为31.9%，随着年龄增长，HPV感染率也逐渐增加，≥50岁患者感染率最高，见表1。
表1 不同年龄段女性患者高危型HPV感染率
3 讨 论
HPV感染是女性宫颈癌以及癌前病变的主要病因，目前已发现100多种HPV基因型，其中至少有40多种基因型主要侵袭生殖道［4］。根据其导致的病变程度，可将其分为高危型、低危型以及其他型［5］。随机对照研究结果显示HPV的检测能够比细胞学检测更早期地发现持续性HPV感染相关瘤变［6］。由于高危型HPV与肿瘤发生有直接关系，因此，高危型HPV的检测则可能反映早期瘤变，在西方国家已成为妇女普查项目之一［7］。2006年，HPV预防性疫苗，获美国FDA批准上市，其的问世使得宫颈癌的预防和攻克成为可能。目前HPV疫苗主要针对的是高危型16型和18型、低危型6型和11型［8］。但由于HPV基因型的分布具有明显的地区差异，因此研究各个地区HPV高危型的分布有利于有针对性地进行HPV疫苗研发和临床应用［9］。本研究结果显示本院就诊妇女HPV检出率为37.3%，高于国外报道的20%～25%［10］，分析其原因可能是由于本研究的样本来自门诊就诊妇女，可能存在选择偏倚。高危型HPV分型分析显示重庆妇女的HPV易感基因型以16型、52型、58型为主，这与国内其他报道相一致［11］，而作为西方国家HPV感染主要基因型的18型则相对少见，此外，HPV感染主要以单一型感染为主，在多重感染中则以16型合并52型、58型感染最为多见［12］，提示针对16型＋58＋52型三价HPV疫苗的研制将可能覆盖大多数易感人群。进一步的HPV感染与年龄的相关性分析结果显示；HPV感染患者年龄差异无统计学意义，HPV感染的年龄分布结果显示：随着年龄增长，HPV感染率也逐渐增加，≥50岁患者感染率最高。这与国外报道“双峰型”感染率一致［13］，提示不同地区HPV感染率的年龄分布特点也各有差异，这也为HPV疫苗的临床使用提出了新的挑战，各地区应因地制宜的选择最佳接种年龄。对多重感染的年龄相关性分析结果显示，不同年龄段多重感染呈倒“U”字，与Jin等［14］报道不一致，可能与研究对象异质性有关。但由于HPV疫苗对已感染的HPV的患者无明显治疗作用，推测早期接种可能意义更大，本研究显示于本院就诊的25岁以下的患者仅占12.15%。综上所述，本研究结果为重庆地区HPV疫苗临床使用前基因型的选择以及年龄的考虑等提供了流行病学资料。
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