胡 旭，刘红霞

（河南省南阳市中心医院检验科 473001）

膀胱癌是一种容易复发的恶性肿瘤，流行病学资料显示其复发率可以高达50%～70%，其中30%的患者复发后肿瘤的恶性度会显着增加，可见膀胱癌的早期诊断以及治疗后的严密随访是一项非常重要的工作［1－2］。膀胱镜、尿脱落细胞涂片检查以及病理活检是膀胱癌诊断和随访的传统检查方法，但尿脱落细胞涂片检查敏感性低，特别是对于一些低期级肿瘤，不到30%，膀胱镜和病理活检虽然是诊断的金标准，但它们属于有创检查，对于一些检查的盲区（例如膀胱顶部及膀胱前壁的肿瘤）不能观察和取材［3］。流式细胞术是一项结合了多学科、多领域技术的检测方法，已被广泛的运用于从基础研究到临床实践的各个方面［4］。因此本研究使用流式细胞术分析尿脱落细胞DNA参数的改变，探讨了其在膀胱肿瘤中的临床使用意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2009年10月至2011年4月本院收治的膀胱癌病例68例，其中男44例，女24例，年龄45～74岁，平均（62.7±10.3）岁，所有病例均经病理确诊。68例患者按WHO三级法分为高分化26例、中分化22例、低分化20例。取同期本院需尿脱落细胞检查的非膀胱癌患者30例作为对照，其中男20例，女10例，年龄44～76岁，平均（63.2±10.8）岁；慢性前列腺炎12例，尿路结石10例，腺性膀胱炎8例。两组在性别、年龄等一般临床资料比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 单细胞悬液的制备 采取受试者清晨第2次新鲜中段尿50mL，3 000r／min离心15min弃上清液，取沉淀的细胞磷酸盐缓冲液洗涤3次，用磷酸盐缓冲液调整细胞浓度为106／L，置冰上待测。

1.3 尿脱落细胞的流式细胞仪检测 尿脱落细胞使用DNAPrepKit试剂盒（联科生物科技有限公司）染色，500μL细胞悬浮液中加入5μL碘化丙啶（PI），避光染色30min，健康人淋巴细胞作为对照经相同的处理，前向和侧向散色光设门去除细胞碎片，FL3通道检测DNA分布直方图。S期细胞峰百分比（SPF）＝S期峰道值／（G0／G1＋S＋G2／M）峰道值。膀胱癌的流式细胞术诊断标准 （出现1个即可）：出现异倍体细胞峰；SPF＞15%，并伴有四倍体细胞峰；G0／G1期的变异率（CV）＞9%。

1.4 统计学处理 采用SPSS12.0统计软件处理数据，计数资料以率表示，使用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组阳性率比较 膀胱癌组和对照组流式细胞仪检测的阳性率分别为73.5%和26.7%，膀胱癌组的阳性率显着高于对照组（P＜0.01）。流式细胞仪诊断的敏感性73.5%，特异性86.2%。

2.2 两组流式细胞仪DNA分布 膀胱癌组异倍体细胞、SPF＞15%和G0／G1期CV＞9%检出率均显着高于对照组（P＜0.05）。见表1。

2.3 膀胱癌患者不同分级中DNA分析结果比较 膀胱癌患者异倍体细胞检出率在高、中、低分化组之间差异有统计学意义（P＜0.05）。SPF＞15%和G0／G1期CV＞9%检出率差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表1 两组流式细胞仪DNA分布［n（%）］

表2 3组流式细胞仪DNA分析结果的比较［n（%）］

2.4 膀胱癌患者异倍体细胞检出对患者复发的影响 根据异倍体细胞检出情况将膀胱癌患者分为异倍体组（42例）和无异倍体组（26例），随访2年，统计其治疗后的复发率，结果显示异倍体组复发32例（76.2%），无异倍体组复发12例（46.2%），两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。

3 讨 论

膀胱癌是我国泌尿系统最常见的恶性肿瘤，膀胱癌的高复发率使得术后的随访成为膀胱癌治疗的一个重要组成部分，膀胱镜、病理活检属侵入性检查，对患者会造成一定的痛苦和带来恐惧感，而且容易导致医源性尿路感染，故其临床上的应用受到一定的限制［5］。寻找非侵入性、高敏感性的膀胱肿瘤标志物检测方法，是每一个泌尿外科医生所关心的问题，流式细胞术可以通过细胞内DNA的水平进行细胞周期分析和发现异常细胞［6－7］，整个细胞周期分为 G0／G1、S、G2／M 期 3 个细胞峰，正常细胞DNA的水平在G0／G1和G2／M期成正态分布S期成一个加宽的正态分布，肿瘤细胞处于增殖失控状态DNA合成显着增加就可以在DNA直方图上表现出来，已有研究显示流式细胞学检查对原位癌的诊断可以高达90.0%，在膀胱癌中可以较膀胱镜早3～12个月［8］。本研究显示膀胱癌患者流式细胞仪阳性率显着高于对照组，其检出的敏感性为73.5%，特异性为86.2%，说明了尿脱落细胞的流式细胞术DNA分析是一个无创、客观、灵敏、有效的膀胱癌筛查方法。但是本研究的结果并未达到前人报道的90.0%的诊断准确率，这可能与肿瘤的恶性程度有一定的关系，恶性程度高的肿瘤细胞容易脱落，就可以检测出来［9］。

肿瘤细胞的增殖能力显着超过正常细胞，SPF是反映细胞增殖能力最常用的一个指标，因此SPF的升高就可以提示肿瘤的发生。本研究显示肿瘤细胞的SPF＞15%检出率大于对照组，且在不同肿瘤分级之间无显着性差异，G0／G1期CV＞9%来判断肿瘤存在一定的争议，其受到的影响因素较多，例如尿路感染时CV也可以升高［10］，本研究表明肿瘤细胞G0／G1期CV＞9%的检出率大于对照组，但在不同肿瘤分级之间无显着性差异，说明SPF＞15%和G0／G1期CV＞9%不能用于膀胱癌恶性程度的判断。对照组中异倍体的检出率为0，但SPF＞15%和G0／G1期CV＞9%两个指标都可以检出，提示了流式细胞仪筛查膀胱癌时异倍体是一个特异性的指标，另两个指标应该谨慎，需要结合尿常规和其他检查综合判断。本研究显示膀胱癌患者异倍体细胞检出对患者复发具有一定的预示作用，这可能是随着膀胱癌的恶性度越高、肿瘤分级越低，肿瘤细胞就越容易脱落下来，这样其检出率也就会相应的增加。

综上所述，本研究显示流式细胞术分析尿脱落细胞诊断膀胱恶性肿瘤具有较好的敏感性和特异性，但在临床使用中需要结合尿常规、影像学和其他检查综合判断。

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