新疆哈萨克族、汉族血浆非对称二甲基精氨酸水平与原发性高血压的相关性研究

秦 练,王 忠,王 丽,陈少泽,唐 辉,段军仓,任宏强

(1.石河子大学医学院第一附属医院心内二科，新疆石河子 832002；2.石河子大学药学院药物分析实验室，新疆石河子 832002)

论着·临床研究

新疆哈萨克族、汉族血浆非对称二甲基精氨酸水平与原发性高血压的相关性研究

秦 练1,王 忠1,王 丽1,陈少泽1,唐 辉2,段军仓1,任宏强1

(1.石河子大学医学院第一附属医院心内二科，新疆石河子 832002；2.石河子大学药学院药物分析实验室，新疆石河子 832002)

目的 探讨血浆非对称二甲基精氨酸(ADMA)与原发性高血压的相关性。方法选择哈萨克族原发性高血压患者(n=93)及汉族患者(n=112)，以哈萨克族(n=81)及汉族(n=100)健康人作为健康对照组，采用反相高效液相色潽法(RP-HPLC)法分别检测两个民族原发性高血压患者及健康对照组人群血浆中ADMA水平，同时检测肝、肾功能，血脂、血糖、果糖胺等生化指标。结果两个民族原发性高血压患者血浆ADMA水平较健康人群显着升高(P<0.01)，血浆ADMA水平与高血压患者血压水平呈正相关(哈萨克族r=0.715,P<0.01；汉族r=0.645,P<0.01)。结论新疆哈萨克及汉族血浆ADMA水平与原发性高血压之间均具有相关性，提示ADMA可能参与了原发性高血压的发生及发展。

新疆哈萨克族;非对称二甲基精氨酸;高血压

原发性高血压(essential hypertension，EH) 具有高致残率及致死率，是由多危险因素导致的常见疾病之一。我国疾病预防控制中心的一项横断面研究显示，2010年中国成年人高血压患病率已高达33.5%[1],但患病人群对该疾病知晓率、控制率及治疗率均明显低于发达国家水平[2]，不同地区、不同民族高血压患病率存在差异。EH发生及发展的始动机制之一是血管内皮功能损伤，非对称二甲基精氨酸作为一氧化氮合酶(NOS)的内源性抑制剂，在人体内通过对NOS产生竞争性抑制作用导致血管内皮细胞NO/NOS通路障碍，NO合成减少；同时NO的抑制平滑肌细胞收缩、血管收缩调节作用及抗血小板聚集等功能进一步下降[3]。近年来ADMA已成为EH发病新的研究热点，本研究应用反相高效液相法对新疆哈萨克族、汉族高血压人群血浆ADMA进行检测，比较两个民族血浆ADMA水平是否存在差异，进一步探讨ADMA与EH之间的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 通过流行病学调查选择新疆玛纳斯县旱卡子滩乡、沙湾县东湾镇哈萨克族EH及健康人群；同期选择石河子大学医学院第一附属医院体检中心汉族EH患者及健康人群作为研究对象。选择年龄35～70岁，按2010年中国高血压防治指南标准,确诊为EH患者，哈萨克族EH患者93例作为病例组，其中男 48例(52%)，女45例(48%)，平均年龄(46.1±10.6)岁；哈萨克族健康人群81例作为对照组，其中男39例(48%)，女42例(52%)，平均年龄(45.3± 11.7)岁；选择本院体检中心汉族EH患者112例作为病例组，其中男62例(55%)，女 50例(45%)，平均年龄为(47.2± 10.0)岁；汉族健康人群共计110例作为对照组，其中男59例(54%)，女51例(46%)，平均年龄(46.1±12.7)岁。将研究对象严格按统计学标准分为病例组及对照组。入选病例组与对照组之间年龄、性别差异均无统计学意义(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 标本采集及生化指标检测 入选病例均隔夜禁食12 h，晨起后取肘前静脉血10 mL并分成两份，于普通离心管及5 mL乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝保存。普通离心管中静脉血以3 000 r/min转速于4 ℃离心15 min后于-80 ℃冰箱保存。生化指标于石河子大学医学院第一附属医院检验科检测(各项指标均由同一人员使用同一仪器，统一标准完成)。检测项目及正常值范围：总胆固醇(<5.72 mmol/L)、低密度脂蛋白胆固醇(<3.37 mmol/L)、高密度脂蛋白胆固醇(0.90～1.45 mmol/L)、三酰甘油(<2.3 mmol/L)、血糖(3.91～6.21 mmol/L)、果糖胺(10～286 μmmol/L)等。

1.2.2 ADMA检测方法及步骤 (1)标准品溶液配制：将5 mg ADMA标准品加入50 mL超纯水并漩涡混匀5 min(标准品储备液浓度：100 μg/mL，于4 ℃冰箱冷藏)。(2)OPA衍生剂：于40 mL避光储液瓶中加入邻苯二甲醛200 mg，硼酸溶液36 mL，甲醇4 mL及三巯基丙酸200 μL；将上述溶液漩涡混匀10 min冷藏备用[4]。(3)色谱条件：色谱柱为Agilent C18柱(5 μm,3.9 mm×250 mm)，流动相A为0.05 μmmol/L乙酸钠溶液(pH 6.8)，流动相B为甲醇(65:35)等度洗脱，进样量20 μL/次，流速1 mL/min。紫外检测器吸收值通道A 203 nm，通道B 254 nm[5]。(4)标准曲线制备：于5支1.5 mL离心管中依次加入不同量及浓度的ADMA储备液，再一次加入空白血浆，配制成浓度依次为0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 μg/mL的血浆标准品溶液。按血浆样本处理方法进行处理，同时记录色谱图，以峰面积为纵坐标，ADMA浓度为横坐标进行线性回归，得到直线回归方程Area=1 680.2C+5 251.6，r2=0.999 4，其含量在0.1～2.0 μg/mL之间有良好的线性关系。(5)血浆样品检测：于1.5 mL离心管加入200 μL待测血浆及乙腈800 μL，涡旋混匀5 min，4 ℃ 12 000 r/min低温离心15 min；取上清液100 μL，加OPA衍生剂100 μL涡旋混匀，避光反应3 min，将反应后产物经0.22 μm微孔滤膜过滤，取滤液进行测定[6]。色谱图可见血浆中ADMA峰形良好，分离完全，无杂质峰干扰。

2 结 果

2.1 病例组与对照组血浆ADMA水平比较 与同民族的对照组相比，两个民族病例组年龄、血清葡萄糖、果糖胺、体质量指数、总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇水平比较差异均无统计学意义。两个民族病例组血浆ADMA水平均高于各自对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；哈萨克族病例组血浆ADMA水平高于汉族病例组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

2.2 哈萨克族与汉族病例组血浆ADMA水平与各自对照组比较 哈萨克族与汉族病例组血浆ADMA水平明显高于各自对照组(P<0.01)，二者差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

2.3 哈萨克族与汉族病例组ADMA水平比较(根据血压分层) 按2010年中国高血压指南标准，将哈萨克族及汉族高血压患者按血压水平进行分层，采用秩和检验，两民族高血压患者血浆ADMA水平均随血压水平增高而逐渐增高(P<0.01)，见表2、3。

2.4 哈萨克族与汉族血浆ADMA浓度与EH相关性分析 经双变量相关分析发现两个民族患者血浆ADMA 水平均与EH之间呈正相关(哈萨克族r=0.715,P<0.01；汉族r=0.645,P<0.01)。

2.5 哈萨克族与汉族族病例组ADMA水平与高血压危险因素关联性分析 根据实验结果，按血浆ADMA水平进行分层，分析两民族血浆ADMA水平与高血压危险因素相关指标的关联性，根据公式求得哈萨克族总胆固醇与ADMA的列联系数为0.269，低密度脂蛋白与ADMA列联系数为0.247，汉族胆固醇与内脏脂肪素的列联系数为0.24，低密度脂蛋白与ADMA列联系数为0.239。结果提示哈萨克族、汉族ADMA水平均与总胆固醇、低密度脂蛋白相关，虽然具有统计学意义，但关系不密切，见表4、5。

表1 哈萨克族与汉族病例组与对照组相关临床指标及血浆ADMA水平比较

GLU:血清葡萄糖；FROCT：果糖胺；BMI:体质量指数；LDL-C:低密度脂蛋白胆固醇；HDL-C：高密度脂蛋白胆固醇；a：P<0.05，与同民族对照组比较；b：P<0.05，与汉族病例组比较。

表2 哈萨克族高血压患者不同血压水平与血浆ADMA浓度比较M(P75～P25)

表3 汉族高血压患者不同血压水平与血浆ADMA浓度比较M(P75～P25)

表4 哈萨克族ADMA水平与EH危险因素关联性分析(n)

表5 汉族ADMA水平与EH危险因素关联性分析(n)

3 讨 论

ADMA作为L-精氨酸/ NO通路的内源性抑制因子，通过与L-精氨酸竞争NOS的活性结合位点[7]抑制NOS活性，并促进NOS解耦连[8]；同时还通过竞争阳离子y+转运通路，进一步干扰L-精氨酸向细胞内转运，通过上述两种机制导致内源性NO生成进一步减少。有研究发现高血压患者血浆ADMA水平高于健康对照组[9-10],其水平增高与血管内皮损伤及动脉硬化发生具有相关性[11-12]。但国内外对哈萨克族高血压人群ADMA水平的相关研究较少。本研究采用反相高效液相法检测哈萨克族与汉族高血压人群血浆ADMA浓度，观察到两个民族高血压患者血浆ADMA水平均高于各自对照组，伴随患者血压分级的增高，ADMA水平亦逐渐升高，ADMA水平与高血压之间呈正相关。同时发现ADMA与高血压危险因素中的低密度脂蛋白及胆固醇之间具有一定相关性，虽有统计学差异，但二者关系不密切。

新疆为多民族聚居区，哈萨克族居民主要分布于新疆北部地区,以牧业为主,由于气候较寒冷,生存环境及生活条件较恶劣，哈萨克族牧民饮食结构有自身特点，日常以面食、肉制品及乳制品为主，动物脂肪及盐摄入量高[13],但蔬菜及水果摄入量相对较少，哈萨克族高血压发病率高于同地区汉族人群[14]。Xiao等[15]发现给予小鼠(载脂蛋白E基因缺陷)4周高ADMA饮食后,小鼠血脂水平增高,同时血管粥样硬化病变程度明显增加。同时有报道发现哈萨克族肥胖程度及血脂水平均高于汉族[16]，本研究以石河子市周边哈萨克族牧民及市区汉族EH患者为研究对象，入选人群生活环境及饮食结构相对固定，两个民族血浆ADMA水平差异可能因素有以下几点:(1)基因遗传特性；(2) 少数民族特有的膳食习惯、生活方式；(3)哈萨克族高血压患者疾病知晓率及就诊率低，治疗依从性差。本研究结果具有自身的区域特征，在实验过程中对血浆样本处理、液相条件的选择及ADMA衍生方法等方面均有一定的创新。

伴随血压水平的增高及病情的加重，EH患者血浆ADMA水平逐渐增高，提示ADMA在EH发展的各个阶段持续参与了血管内皮功能的损害，该因子对临床上EH病情监测[17]具有应用价值，同时为研究特异性治疗药物提供线索，但ADMA的其他生成途径及代谢通路，包括转运[18]及调控机制等仍须进一步研究。

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Correlation between plasma asymmetric dimethylarginine and essential hypertension of Kazak and Han nationalities in Xinjiang*

QinLian1,WangZhong1,WangLi1,ChenShaoze1,TangHui2,DuanJuncang1,RenHongqiang1

(1.SecondDepartmentofCardiology,FirstAffiliatedHospitalofMedicalCollege,ShiheziUniversity,Shihezi,Xinjiang832002,China;2.PharmaceuticalAnalysisLaboratory,PharmacyCollegeofShiheziUniversity,Shihezi,Xinjiang832000,China)

Objective To explore the correlation between plasma asymmetric dimethylarginin(ADMA) and essential hypertention(EH) by comparing the difference of plasma asymmetric dimethylarginine levels between Kazak and Han patients with EH in Xinjiang.Methods 91 Kazak and 112 Han patients with EH were selected.81 Kazak and 110 Han healthy people were selected as healthy control groups.The plasma ADMA levels in EH groups and the control groups were measured by using the reverse phase-high performance liquid chromatography(RP-HPLC).Meanwhile the liver function,renal function,blood lipids,blood glucose and fructosamine were measured.Results Kazak and Han patients with EH had higher levels of plasma ADMA than the control groups (P<0.01);there was a positive correlation between the plasma ADMA and blood pressure levels of EH patients in two nationalities(r=0.715,P<0.01 for Kazak;r=0.645,P<0.01 for Han).Conclusion Both Kazak and Han patients with EH have higher levels of ADMA than the respective healthy control group in Xinjiang.The correlation between the plasma levels of ADMA and EH existed,which indicate that ADMA might be involved in the occurrence and development of EH.

Kazak nationality in Xinjiang;asymmetric dimethylarginine;hypertension

:10.3969/j.issn.1671-8348.2015.15.021

兵团医药专项课题基金资助(2012AB0140)。

秦练(1982-)，硕士，讲师/主治医师，主要从事高血压发病基础及临床研究。

R544.1

A

1671-8348(2015)15-2072-04

2014-10-08

2015-01-16)