向 尹，杨 阳,周 杰
(1.四川省乐山市人民医院检验科 614000；2.西南医科大学医学检验系，四川泸州 646000)
HBVDNA载量与肝硬化和原发性肝癌的相关性探究
向 尹1，杨 阳1,周 杰2
(1.四川省乐山市人民医院检验科 614000；2.西南医科大学医学检验系，四川泸州 646000)
目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)DNA载量与肝硬化和原发性肝癌的相关性。方法 选择乐山市人民医院2014年3月到2015年3月的住院患者中感染HBV的患者552例，用实时荧光定量PCR检测其入院时的HBVDNA载量，根据临床诊断分别统计阳性组与阴性组中肝硬化和原发性肝癌患者例数。结果 统计显示DNA阳性组345例，DNA阴性组207例，DNA阳性组的肝硬化患病率为44.93%，DNA阴性组的肝硬化患病率为35.75%，差异有统计学意义(P<0.05)。DNA阳性组的原发性肝癌患病率为8.12%，DNA阴性组的原发性肝癌患病率为7.25%，差异无统计学意义(P>0.05)。结论 感染HBV病毒的患者HBVDNA载量与肝硬化的发生有关，与原发性肝癌的关系仍需进一步探讨。
肝硬化；肝肿瘤；肝炎病毒，乙型；DNA；HBVDNA；原发性肝癌
乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的以肝脏损害为主的全身性传染病，是发病率极高的肝炎之一。HBV 感染者部分发展成肝炎，部分为正常携带者，也有部分发展成肝硬化和肝癌。相关报道表明HBV DNA载量高水平是HBV感染者发生肝硬化和原发性肝癌的危险因素。但这一结论是否因地区的不同而有差异还未见报道。本文通过对四川省乐山地区HBV感染者的HBV DNA载量和临床诊断进行分析，探讨该地区感染HBV人群的HBV DNA载量与肝硬化和原发性肝癌的相关性。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择2014年3月至2015年3月在乐山市人民医院治疗的HBV感染患者552例为研究对象。其中男376例(68.1%)，女176例(31.9%)；年龄16～84岁，平均(53.52±13.80)岁。诊断标准：入院当天检查HBV DNA载量、乙型肝炎两对半，两对半除乙型肝炎表面抗体外的任一项结果阳性则判断为HBV感染者。纳入标准：患者临床诊断符合全国肝硬化和原发性肝癌诊断标准[1]。所有患者均未系统使用抗病毒、保肝等药物，未合并其他类型肝炎病毒感染，同时排除药物性、 酒精性、 自身免疫性、代谢性等肝炎，以及糖尿病、甲状腺功能亢进、严重心血管等疾病[2]。
1.2 方法
1.2.1 仪器与试剂 HBV DNA载量测定使用中山大学达安基因股份有限公司的DA7600型全自动实时荧光定量PCR仪，试剂采用同公司生产的HBV核酸定量检测试剂盒(批号2014008-011，2015002-004)。
1.2.2 标本采集 所有研究对象均于入院时或入院后1 d清晨空腹抽取静脉血5 mL，以3 000 r/min离心5 min后取血清备用。
1.2.3 DNA提取及检测 将待测样本、阳性定量参考品、阴性质控品、HBV 强阳性质控品、HBV临界阳性质控品进行同步处理，按试剂盒说明书进行操作。提取的DNA加入PCR反应管，用全自动实时荧光定量PCR仪进行检测。HBV DNA检测结果载量大于或等于1 000拷贝为阳性，小于1 000拷贝为阴性。
1.2.4 患者临床资料的收集 调查552例研究对象是否患肝硬化和原发性肝癌，分别统计HBV DNA阳性和HBV DNA阴性结果中肝硬化和原发性肝癌的例数。
1.3 统计学处理 采用SPSS19.0统计软件进行分析，计数资料用率表示，组间采用χ2检验，检验水准α=0.05，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
在552例研究对象中HBV DNA阳性者有345例，HBV DNA阴性者有207例。HBV DNA阳性者中患肝硬化者有155例，为44.93%，HBV DNA阴性者中患肝硬化者有74例，为35.75%，差异有统计学意义(P<0.05)。HBV DNA阳性者中患原发性肝癌者有28例，为8.12%,HBV DNA阴性者中患原发性肝癌者有15例，为7.25%,差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。
表1 DNA结果与肝硬化、原发性肝癌关系
3 讨 论
目前，HBV感染呈世界性流行，据WHO报道，每年约有 100 万人死于 HBV 感染所致的肝衰竭、 肝硬化和原发性肝细胞癌[3]。我国是HBV感染高流行区，一般人群乙型肝炎表面抗原阳性率约9.75%，大约15.00%～40.00%的慢性HBV感染者会发展为肝硬化和晚期肝病[4]。
目前多用乙型肝炎两对半(HBsAg、HBsAb、HBeA、HBeAb、HBcAb)，以及HBV DNA的联合检测来对HBV感染进行诊断。HBV DNA 是 HBV 感染最直接、 最灵敏和最特异性的指标，其水平高低可直接反应HBV感染者体内病毒复制水平。国内外已有研究报道血清HBV DNA 载量可预测 HBV 慢性感染者的肝硬化发病率，肝硬化的发病率以剂量依赖方式，随 HBV DNA 水平的增加而升高[5]。日本一项关于HBV载量同HBV相关肝硬化患者发生原发性肝癌关系的研究发现， HBV DNA 水平与原发性肝癌相关，超过5年的高HBV DNA水平发生原发性肝癌的风险性明显增高，维持3年或更长的低HBV DNA水平可能能够阻止原发性肝癌发生。亦有研究认为高滴度病毒血症的波动可能提示严重的肝细胞的破坏，至少在短期内会增加发生原发性肝癌的危险性[6]。
本文通过对乐山地区HBV慢性感染者的肝硬化状况的研究发现，乐山地区HBV慢性感染者的HBV DNA载量与肝硬化的发生有关，HBV DNA阳性患者的肝硬化发生率高于HBV DNA阴性患者。国内外已有研究报道血清 HBV DNA 载量可预测 HBV 慢性感染者的肝硬化发病率[5]。HBV DNA持续高载量可能导致肝细胞变性或坏死，病因持续存在，肝细胞的不断损伤、坏死，导致肝细胞再生、修复、纤维化，形成假小叶；肝纤维化发展的同时，伴有显着的、非正常的血管增殖，使肝内门静脉、肝静脉和肝动脉3个血管系之间失去正常关系，出现交通吻合支等，这加重了肝细胞的营养障碍，是促进肝硬化发展的重要机制[7]。
在对乐山地区HBV慢性感染者的原发性肝癌状况的研究中发现，乐山地区HBV慢性感染者的HBV DNA载量与原发性肝癌患病率差异无统计学意义(P>0.05)，需进一步探讨。原发性肝癌的病因和发病机制尚未完全明确，根据高发区流行病学调查，原发性肝癌的发生与多种因素有关，如病毒性肝炎食物和饮水，毒物与寄生虫，遗传因素等，而HBV感染则是原发性肝癌发生的首要危险因素之一[8]。原发性肝癌的非手术疗法虽然已有进展，但手术切除仍是目前最有效的治疗方法。晚期原发性肝癌切除后复发率高，易转移，有研究显示，高病毒负荷是肝癌术后复发的一项重要危险因素，术前血清HBV DNA高水平的患者，在术后出现肝细胞破坏增加、血清谷丙转氨酶(ALT)升高、肝功能损害加剧的危险性增高[4]。目前HBV 引起肝癌发生的机制尚未完全明确，有研究发现，原发性肝癌的发生与 DNA 的损伤密切相关，几乎所有 HBV 诱导的肝癌中，都能发现整合的病毒 DNA。另有学者指出HBV DNA复制水平在原发性肝癌发生中可能起着一定的作用，原因是HBV DNA的高水平复制可能导致更多HBV DNA整合到肝细胞核酸中，增加突变概率，激活癌基因，从而导致肝癌的发生[9]。
病毒的持续感染，与肝硬化、原发性肝癌密切相关。HBV感染是肝硬化最常见的病因，原发性肝癌患者中约90%有HBV感染的背景，且原发性肝癌大多在肝硬化的基础上发展而来。慢性乙型肝炎，肝硬化与原发性肝癌的关系已得到公认[10]。对于肝硬化，现有的治疗方法尚不能逆转已发生的肝硬化，对于代偿期患者，治疗旨在延缓肝功能失代偿、预防肝细胞肝癌；对于失代偿患者，则以改善肝功能、治疗并发症、延缓或减少对肝移植需求为目标。当前乙型肝炎疫苗的预防注射已经降低HBV的感染及其引起的肝硬化和原发性肝癌的发生。对有HBV感染史的HBeAg阴性患者均应常规检测HBV DNA，并采用适当的抗病毒治疗进行早期干预。
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Correlation between HBV DNA load and liver cirrhosis，hepatocellular
XiangYin1,YangYang1,ZhouJie2
(1.TheLaboratoryDepartment,People′sHospitalofLeshan,Leshan,Sichuan614000,China;2.DepartmentofClinicalMedicine,SoutheastMedicalUniversity,Luzhou,Sichuan646000,China)
Objective To investigate the correlation between hepatitis B virus deoxyribonucleic acid (HBV DNA) load and liver cirrhosis,hepatocellular carcinoma (PHC).Methods We chose 552 cases with hepatitis B virus infection in Leshan people′s hospital from 2014 March to 2015 March,and used real-time fluorescence quantitative PCR to detect the HBV DNA load.According to the results,patients were divided into DNA positive group and DNA negative group.The two groups of patients with liver cirrhosis and primary liver cancer patients were statistically analysed separately.Results There were 345 patients in DNA positive group while 207 patients in DNA negative group.Cirrhosis prevalence rate of DNA positive group was 44.93%，while the rate of DNA negative group was 35.75%,and there was significant difference between them(P<0.05).Hepatocellular carcinoma prevalence rate of DNA positive group was 8.12%,while the rate of DNA negative group was 7.25%,and there was no significant difference between them(P>0.05).Conclusion Hepatitis B virus DNA load in the patients infected by HBV is connected with the occurrence of liver cirrhosis,but the relationship with the hepatocellular carcinoma is still need to be further discussed.
liver cirrhosis；liver neoplasms；hepatitis B virus；DNA；HBV DNA；primary hepatic carcinoma
向尹(1977-)，主管技师，本科，主要从事临床检验学方面研究。
论着·临床研究
10.3969/j.issn.1671-8348.2016.23.022
R
A
1671-8348(2016)23-3231-02
2016-04-19
2016-06-24)
