秦少文,张方琪
(1.中部战区总医院呼吸与危重症医学科,武汉 430070;2.中国人民解放军联勤保障部队第九八七医院呼吸与危重症医学科,陕西宝鸡 721000)
非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是肺癌的一种主要类型,其中腺癌和鳞状细胞癌占大多数[1-3]。尽管目前在早期检测和治疗选择方面进行了广泛的研究,但该病依旧治疗困难,晚期患者的5年生存率低于15%[4-5]。因此,寻找与NSCLC诊断及预后相关的生物标志物十分必要。长链非编码RNA(long noncoding RNA,lnc RNA)已被发现在许多癌症发生、发展过程中起着关键作用[6-8],且可参与包括NSCLC在内的肿瘤的发生、发展[9-11]。RUNX1-IT1由RUNX1基因的内含子转录,RUNX1的异常表达与NSCLC的进展密切相关[12]。但目前为止,RUNX1-IT1未在NSCLC中被报道过。miR-195被发现在NSCLC中表达下调,并抑制NSCLC的细胞增殖[13]。已有研究证实,lncRNA RUNX1-IT1和miR-195之间存在调控位点。本研究旨在探讨lncRNA RUNX1-IT1和miR-195在NSCLC中的表达及其临床意义,现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2017年5月至2019年5月于武汉某三级甲等医院接受手术治疗的106例NSCLC患者为研究对象。纳入标准:(1)术前未接受放化疗及相关辅助治疗;(2)临床资料及术后随访资料完整,且病理标本保存完好;(3)经病理科检测及本院两位副主任医师确诊为原发性NSCLC。排除标准:(1)合并其他恶性肿瘤;(2)严重心、肝、肾功能不全;(3)伴有重度支气管扩张或慢性阻塞性肺疾病;(4)合并有严重免疫系统缺陷或血液病;(5)患者资料不全,依从性差,不配合。106例研究对象中男56例,平均年龄(58.53±10.87)岁,女50例,平均年龄(61.84±11.62)岁;腺癌46例,鳞癌60例;TNM分期Ⅰ～Ⅱ期39例,Ⅲ～Ⅳ期67例;有淋巴结转移55例,无淋巴结转移51例;高分化63例,低-中分化43例。
1.2 方法
1.2.1标本采集
采集研究对象NSCLC组织及癌旁正常组织(距癌组织>5 cm)。术后通过门诊、电话及复查等方式对患者每3个月进行1次随访,随访截止时间为2022年5月31日,随访终点为随访时间终止或患者死亡。
1.2.2实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)
采用Trizol®试剂(美国Invitrogen公司)提取实验所用组织中的总RNA,另经NanoDrop 2000测定RNA的质量和浓度。用PrimeScript RT试剂盒(日本Takara公司)将总RNA逆转录成cDNA。qPCR的检测采用StepOnePlus real-time PCR系统(美国Applied Biosystems公司)和SYBR®Premix Ex TaqTM试剂(日本Takara公司)。反应体系为:cDNA产物2 μL,2× SYBR®Premix Ex TaqTMⅡ 8 μL,上下游引物各1 μL,50× ROX Reference Dye 0.4 μL,RNase-Free H2O 7.6 μL。反应条件为:95 ℃ 5 min;95 ℃ 15 s,58 ℃ 40 s,72 ℃ 30 s,共40个循环。以U6为内参,lncRNA RUNX1-IT1和miR-195的表达水平以2-ΔΔCt表示。实验所用引物序列见表1。
表1 实验所用引物序列
1.3 统计学处理
2 结 果
2.1 lncRNA RUNX1-IT1和miR-195表达水平比较
与癌旁组织比较,NSCLC组织lncRNA RUNX1-IT1表达水平明显升高,miR-195表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),见表2。
表2 lncRNA RUNX1-IT1和miR-195表达水平比较
2.2 lncRNA RUNX1-IT1和miR-195表达水平与患者临床病理特征关系
根据lncRNA RUNX1-IT1和miR-195表达水平,将NSCLC患者分为lncRNA RUNX1-IT1高表达(≥3.65±0.33)、低表达(<3.65±0.33)和miR-195高表达(≥0.46±0.05)、低表达(<0.46±0.05)。lncRNA RUNX1-IT1高表达患者中有淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、低-中分化的比例明显高于低表达患者(P<0.05);miR-195低表达患者中有淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、低-中分化的比例明显高于高表达患者(P<0.05),见表3。
表3 lncRNA RUNX1-IT1和miR-195表达水平与患者临床病理特征关系[n(%)]
2.3 不同lncRNA RUNX1-IT1和miR-195表达水平NSCLC患者的生存分析
lncRNA RUNX1-IT1高表达患者3年总生存率为35.60%(21/59),低表达患者为64.40%(38/47);miR-195高表达患者3年总生存率为68.75%(33/48),低表达患者为31.25%(15/58),见图1。
A:lncRNA RUNX1-IT1高、低表达患者的生存曲线图;B:miR-195高、低表达患者的生存曲线图。
2.4 NSCLC患者的预后影响因素分析
以淋巴结转移、TNM分期、分化程度、NSCLC组织lncRNA RUNX1-IT1和miR-195表达情况为自变量,以NSCLC患者随访期间生存状态为因变量,进行多因素Cox比例风险回归模型分析,结果显示有淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、低-中分化、lncRNA RUNX1-IT1高表达、miR-195低表达是NSCLC患者预后的独立危险因素(P<0.05),见表4。
表4 NSCLC患者的预后影响因素分析
3 讨 论
NSCLC具有高发病率及高病死率的特点,虽然目前分子靶向治疗能明显提高NSCLC患者的生存率,但其5年生存率仍然低于20%。由于缺乏有效的早期诊断方式,多数患者在确诊时已至晚期,这也是该病患者预后较差的主要原因之一。因此,寻找能为NSCLC患者诊断和预后提供帮助的生物标志物是十分必要的。
lncRNA具有调节转录、增殖的功能,其分布在细胞核和细胞质中,可为多个蛋白分子提供结合位点。已有多项研究发现,lncRNA在肿瘤组织中有表达差异,可作为肿瘤诊断的生物标志物。如lncRNA MALAT1的下调可以通过增强miR-124和降低STAT3表达来抑制NSCLC的发生、发展。JIANG等[14]发现,lncRNA HOTAIR的下调可通过上调miR-613的表达来抑制NSCLC的肿瘤发生和转移。LI等[15]研究发现,lnc01296/miR-143-3p/ATG2B轴在促进NSCLC进展和紫杉醇耐药性的过程中至关重要。
RUNX1定位于人类染色体21q22区域,已被发现可参与肿瘤细胞的增殖和侵袭,且与患者预后相关[16]。BROWNE等[17]研究发现,RUNX1促进了小鼠乳腺肿瘤的发展,并可能是人类乳腺癌进展和转移的关键促进因素和预后因素。WU等[18]研究显示,miR-216a-3p可通过靶向RUNX1和激活核因子-κB信号通路抑制人胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。另有研究证明,Rasip1部分受转录因子RUNX1调控,可能成为NSCLC的治疗靶点[19]。lncRNA RUNX1-IT1是RUNX1的内含子转录本1,定位于人类染色体21q22.12区域,长度为1 502个核苷酸。已有研究发现,lncRNA RUNX1-IT1在结直肠癌、胰腺癌、恶性多形性腺瘤和口腔鳞癌的发生、发展中扮演重要角色[20-23]。但目前为止,其未曾在NSCLC中被报道过。本研究对106例NSCLC患者癌组织及癌旁组织进行检测,结果发现lncRNA RUNX1-IT1在NSCLC组织中的表达明显上调,说明其表达水平与NSCLC的发生、发展密切相关。随后,本研究探讨了lncRNA RUNX1-IT1的表达水平与患者临床病理特征的关系,发现lncRNA RUNX1-IT1高表达患者3年总生存率明显低于低表达患者。且多因素Cox风险回归模型分析发现lncRNA RUNX1-IT1高表达是NSCLC患者不良预后的独立指标。上述结果表明,lncRNA RUNX1-IT1可能是NSCLC患者预后的生物标志物。
已有研究证明,lncRNA可通过与miRNA竞争性结合来调节肿瘤的进程。miR-195在多种类型的癌症中具有肿瘤抑制功能,如miR-195可通过靶向细胞周期蛋白D1抑制宫颈癌细胞的增殖,其还可通过靶向CHEK1抑制NSCLC[13,24]。WU等[25]研究发现,lncRNA RUNX1-IT1可通过与miR-195发生海绵吸附作用,进而促进胶质母细胞瘤的增殖,且二者间具有结合位点。但二者与NSCLC患者预后的关系却未曾被报道过。本研究发现,miR-195在NSCLC组织中的表达水平明显降低,低表达患者3年总生存率明显低于高表达患者。多因素Cox风险回归模型分析发现miR-195低表达是NSCLC患者不良预后的独立指标,这一结果表明,miR-195同样可能是NSCLC患者预后的生物标志物。
综上所述,lncRNA RUNX1-IT1在NSCLC组织中表达上调,miR-195在NSCLC组织中表达下调,二者均可作为NSCLC患者潜在的预后生物标志物。但目前lncRNA RUNX1-IT1和miR-195在NSCLC中的作用机制尚不明确,需进一步进行基础实验加以证实。
