黄敏坚 张远新 李平
急性肺损伤(ALI)是由各种肺内外致病因素引起的肺部失控性炎症反应，导致肺泡毛细血管损伤为基本病理生理特点的急性进行性呼吸衰竭，其严重阶段称为急性呼吸窘迫综合征。本文通过制备油酸型急性肺损伤兔模型，采用血必净注射液进行治疗，通过实验观察能减轻肺损伤，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 实验动物分组 取新西兰兔30只，雌雄不限，体重1.8~2.2 kg，平均体重2.0 kg。随机分为三组：空白对照组，单纯急性肺损伤组，血必净治疗组(ALI+血必净)。每组再按照1 h、12 h、24 h、36 h、48 h分为5个时段，每个时段2只家兔分别进行观察。
1.2 试剂 试剂油酸(oleic acid，OA)，天津市津北精细化工有限公司产品，血必净注射液(规格10ml/支，天津红日药业有限公司产品)，戊巴比妥钠，肝素，生理盐水。
1.3 油酸型ALI动物模型制备 方法：沿家兔耳缘静脉注入油酸0.8 ml/kg，复制油酸肺损伤动物模型。注入油酸30 min后可出现较典型的ALI表现。ALI诊断标准：氧合指数(PaO2/FiO2)≤300 mm Hg。病理指标：油酸致伤后，肺脏体积增大，表面可见大小不等的暗红色斑片状病灶，切面可有淡红或白色泡沫样液体溢出；光镜下观察，肺组织内有白细胞浸润，可见肺间质及肺泡水肿，肺出血明显，肺组织湿/干(W/D)比值明显升高。
1.4 实验方法 ALI成模后，治疗组予耳缘静脉注入血必净注射液10 ml/kg。空白对照组及ALI组予生理盐水10 ml/kg注射。于1 h、12 h、24 h、36 h、48 h耳缘动脉抽血，应用ELISA方法检测血清TNF-a、IL-6含量，处死并分离肺组织，取右肺组织进行组织切片，在光镜下观察病理形态变化。游离左肺，称量湿质量(wet weight，W)，经脱水后，再称量干质量(dry weight，D)，以W/D比值表示肺组织含水量。
1.5 统计学处理 实验数据均通过SPSS 13.0软件处理。计量资料以(s)表示，组间差异比较用方差分析，模型前后数据比较用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 血清TNF-α、IL-6含量的变化见表1、表2。
2.2 单纯ALI组W/D比值明显高于正常对照组，说明油酸致肺损伤后，肺泡内大量的液体溢出；血必净治疗24 h后W/D值明显下降，即肺水肿有一定程度的减轻。见表3。
表1 血清TNF -α含量的变化(s)ng/ L
表1 血清TNF -α含量的变化(s)ng/ L
*与单纯ALI组比较，P<0.05；△与正常对照组比较，P<0.05
组别 T1 T12 T24 T36 T48正常对照组 193.5±28.4 201.2±33.6 197.3±40.4 190.3±37.2 205.7±32.8单纯 ALI组 503.5±46.7△ 587.3±47.2△ 562.5±43.1△ 309.4±42.5△ 365.5±32.6△血必净治疗组 496.4±50.2 401.6±48.3* 203.5±46.8* 201.3±46.4* 233.5±40.5*
表2 血清IL-6含量的变化(s)ng/ L
表2 血清IL-6含量的变化(s)ng/ L
*与单纯ALI组比较，P<0.05；△与正常对照组比较，P<0.05
组别 T1 T12 T24 T36 T48正常对照组 176.8±30.3 185.2±32.5 180.6±34.6 179.2±31.4 186.3±33.2单纯ALI组 268.6±38.7 502.3±40.6△ 658.4±38.5△ 564.3±41.5△ 470.4±37.6△血必净治疗组 296.5±36.3 229.5±38.2* 203.3±37.6* 189.3±40.2* 191.6±38.7*
表3 三组家兔各时段W/D比值(s)ng/L
表3 三组家兔各时段W/D比值(s)ng/L
*与正常对照组比较，P<0.05；△与单纯ALI组比较，P<0.05
组别 T1 T12 T24 T36 T48正常对照组 6.58±0.43 6.39±0.46 6.40±0.38 6.52±0.40 6.83±0.42单纯 ALI组 10.37±0.39* 10.87±0.40* 10.32±0.41* 10.79±0.47* 10.59±0.48*血必净治疗组 6.85±0.42△ 6.27±0.45△ 6.14±0.37△ 6.22±0.46△ 6.43±0.42△
3 讨论
急性肺损伤是临床上常见的急症之一。因其发病机理至今尚未完全清楚，病死率极高。且多数病例常于发病数天内死亡。因此，ALI至今仍是临床比较棘手的问题之一[1]。研究证实，急性肺损伤(ALI)病理生理为炎症反应导致肺毛细血管内皮和肺泡上皮损伤，肺微血管内皮细胞肿胀、结构破坏，发生凋亡或坏死[1]。由中性粒细胞为主介导的肺脏局部炎症反应致肺毛细血管通透性增高性肺水肿，肺泡液渗出，形成富含蛋白质的肺水肿及透明膜形成，并伴有肺间质纤维化。TNF-α是引起ALI的启动因子，它可通过诱导NO，内皮素、氧自由基、多肽递质、脂质递质和黏附分子等的产生而发挥作用[2]。促炎症细胞因子主要由肺内炎症细胞、上皮细胞、内皮细胞和纤维母细胞在局部产生[3]。本实验通过家兔耳缘静脉注射油酸复制急性肺损伤模型。油酸是一种具有较强毒性的饱和脂肪酸，主要通过氧化应激反应、促凝血活性增高以及内皮素作用等机制导致肺损伤，破坏肺泡上皮屏障，同时油酸对肺毛细血管内皮细胞、肺泡Ⅱ型上皮细胞等有直接毒性作用，降低肺泡上皮主动清除肺泡内液体的效率[4]。通过注射油酸后动物即出现呼吸窘迫、紫绀，呼吸频率明显增快，1 h后血气分析示严重的低氧血症。病理检查发现肺间质和肺泡水肿、肺间质和肺泡出血、毛细血管充血、中性粒细胞浸润等急性肺损伤的基本病变。在ALI模型制备成功后1 h，血清TNF-α开始升高，于伤后12 h 升高达峰值，24 h已开始下降，但在48 h仍高于正常对照组。IL-6 于伤后1 h开始升高、12~24 h 仍有非常明显的增高，TNF -α、IL-6 在创伤后不同时间升高，可能提示他们的因果关系。TNF -α早期出现，说明其是ALI的关键性始动因子，而IL-6的随之出现并且持续较长时间，则可能是细胞因子群活化后级联反应不断扩大的增强因子[5]。
近年来，关于中医药治疗ALI越来越受到重视，从临床上观察能改善症状，但具体的机理仍在探讨中。血必净注射液主要组成为丹参、川芎嗪、阿魏酸、芍药苷、红花黄色素A等[6]。文献报道，血必净注射液能在体内外有效拮抗LPS，抑制体内多种炎性介质的病理生理作用，具有抗细菌毒素、降低内毒素水平、调节免疫及炎性介质、改善微循环、保护血管内皮细胞等作用，对应激性脏器损伤具有良好的保护作用。并通过保护血管内皮细胞，通过提高超氧化物歧化酶活性等途径，保护和修复应激状态下受损的脏器[7]。本实验研究显示，血必净注射液组与对照组比较血清TNF-α、IL-6活性明显改善(P<0.05)，W/D值明显下降，渗出减轻。提示血必净注射液对ALI家兔具有肺保护效应，可减轻ALI肺组织炎性细胞浸润、淤血和上皮细胞损伤，但其具体机制还需进一步探讨。
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