吴燕华 胡峥 邹文 齐国华
【摘要】 目的：检测不同组织的MiR基因水平，探讨宫颈癌与该基因的关系。方法：收集2012年1月-2013年6月期间来本院及中南大学湘雅二医院治疗的宫颈疾病患者的临床资料，共62例，包括32例良性患者（良性组）和30例恶性患者（观察组），另选择同期来两院行健康体检者30例（对照组），测定其MiR-140水平。结果：观察组MiR-140 OD值为（0.82±0.30），高于对照组的（0.53±0.11）和良性组的（0.61±0.15），比较差异均有统计学意义（P<0.05）；Ⅳ期、Ⅲ期MiR-140 OD值分别为（0.92±0.21）和（0.85±0.23），均明显高于Ⅰ期和Ⅱ期，比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：宫颈癌患者体内MiR-140水平高表达，且病情越重越明显。
【关键词】 MiR-140； 宫颈癌； 疾病分期
宫颈癌是妇科恶性肿瘤较为常见的一种，近年来其发病有年轻化的趋势。其中鳞状上皮癌较为多见。据估计，40%的患者可能在确诊后9个月内病死，针对持续性或复发性宫颈癌，患者病死率几乎高达80%[1-2]。而能否准确进行临床分期，关系到治疗方案的制定及预后的预判，目前临床分期主要通过专科检查来确定，本研究通过检测不同组织的MiR基因水平，探讨宫颈癌与该基因的关系，通过干扰该基因，从而达到治疗宫劲癌的目的，现在将结果报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 收集2012年1月-2013年6月期间本院及中南大学湘雅二医院收治的经手术并病理证实的宫颈疾病患者的临床资料，共62例，其中良性为32例（良性组），恶性肿瘤为30例（观察组）；其中鳞癌25例，腺癌4例，腺鳞癌1例；年龄34～71岁，平均（48.0±10.4）岁；患者主要体征为阴道排液、不规则或接触性出血。另选择同期来两院行健康体检者30例（对照组）。三组患者的年龄等一般资料比较差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。所有研究对象均知情同意。
1.2 试剂与仪器 由日本TOYOBO公司提供的RT-PCR试剂盒；由美国Invitrogen公司提供的Trizol；紫外分光光度计。0.5 mol/LEDTA缓冲液（pH 8.0）、PBS缓冲液（pH 7.2～7.4）。RNA酶抑制剂、反转录反应液、反转录酶、PCR反应液、Taq DNA聚合酶。
1.3 检测方法 取宫颈癌组织，良性组织，正常组织的新鲜标本，无菌条件下放入50 mL的无菌管中，立即置于液氮罐中。所有患者均经病理学检验的证实。用Trizol试剂提取各组细胞总RNA，紫外分光光度计检测mRNA纯度并计算其浓度，RT-PCR条件为：37 ℃ 60 min，95 ℃ 10 min，cDNA产物置于-20 ℃保存。根据Genebank序列，设计上述坏死相关因子和对照β-actin的引物序列并合成。cDNA在引物指导下扩增PCR产物。获得的产物经凝胶电泳后，在凝胶成像系统上分析相关因子mRNA的丰度。
1.4 宫颈癌的临床分期 0期：原位癌（不列入浸润癌治疗效果统计中）；Ⅰ期：癌局限于宫颈（癌扩展到宫体，在分期中不予考虑）；Ⅱ期：癌灶超越宫颈，阴道浸润未达下1/3，宫旁浸润未达盆壁；Ⅲ期：癌灶超越宫颈，阴道浸润已达下1/3，宫旁浸润已达盆壁，有肾盂积水或肾无功能者均列入Ⅲ期，但非癌所致的肾盂积水及肾功能者除外；Ⅳ期：癌播散超出真骨盆，或癌浸润膀肮黏膜及直肠黏膜[3-5]。
1.5 统计学处理 采用SPSS 13.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验，计数资料采用 字2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 三组MiR-140结果比较 本文结果显示，观察组MiR-140 OD值为（0.82±0.30），高于对照组的（0.53±0.11）和良性组的（0.61±0.15），比较差异均统计学意义（P<0.05）。良性组和对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。
2.2 不同分期MiR-140结果比较 本文结果显示，TNM分期中Ⅳ期（n=7）、Ⅲ期（n=13）MiR-140 OD值分别为（0.92±0.21）和（0.85±0.23），均高于Ⅰ期（n=4）（0.60±0.12）和Ⅱ期（n=6）（0.69±0.08），比较差异均有统计学意义（P<0.05）。
3 讨论
宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，适宜的肿瘤标志物的选择对于宫颈癌的辅助诊断、疗效判断等意义重大。MiR-140是micRNAs家族成员之一，可表达于软骨中，并调节其发育。MiR-140的特异性表达及改变可能是致病的主要原因。有学者研究表明，在利用敲除目标基因miR-140制备大鼠疾病模型的过程中，miR-140的缺失和年龄相关，可能原因是miR-140参与了调节软骨发育的过程，导致蛋白多糖丢失及关节软骨的纤维化并伴有加重迹象[6-10]。临床中对于MiR指标在宫颈癌患者中的变化研究并不少见，但是对于MiR-140在宫颈癌患者局部组中的表达研究却极为少见，因此对其进行研究的空间较大。有研究认为，MiR-140对于恶性肿瘤细胞的增殖及分裂，并对细胞的癌变有一定的影响作用，因此对其在良恶性宫颈疾病患者组织中的表达差异也有一定的检测价值。
本研究结果显示，观察组MiR-140 OD值为（0.82±0.30），高于对照组的（0.53±0.11）和良性组的（0.61±0.15），比较差异均有统计学意义（P<0.05）。良性组和对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。提示MiR-140可在肿瘤患者中高表达。本研究采用的分期为FIGO分期标准，结果显示，Ⅳ期、Ⅲ期MiR-140 OD值分别为（0.92±0.21）和（0.85±0.23），均高于Ⅰ期和Ⅱ期，比较差异有统计学意义（P<0.05）。提示，病情越重，MiR-140 OD值越高。
综上所述，宫颈癌患者体内MiR-140水平高表达，且病情越重越明显。
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（收稿日期：2014-01-20） （本文编辑：黄新珍）
