伍启康，陈斌鸿，陈展泽，郑雪莲，戴伟良

(广东省佛山市第一人民医院检验科 528000)



·论 着·

Grubbs法在酶联免疫吸附试验乙型肝炎两对半室内质控的应用探讨

伍启康，陈斌鸿，陈展泽，郑雪莲，戴伟良

(广东省佛山市第一人民医院检验科 528000)

目的 探讨Grubbs法结合±3 s、±2 s和7T规则在乙型肝炎两对半酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测中的临时室内质控的可行性。方法 查阅同一质控批号的ELISA乙型肝炎两对半定量检测的连续20批室内质控数据，并对Grubbs法结合±3 s、±2 s和7T规则应用进行统计分析。结果 ELISA乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗体(HbsAb)、乙型肝炎E抗原(HbeAg)定量测定中20次测定值均处于在控状态；乙型肝炎E抗体(HbeAb)定量测定中Grubbs法显示20次测定值均处于在控状态，但第13次测定结果违反了±2 s规则，判定为警告状态，保留数据，且予以注意，积极分析原因，避免后续的检测继续警告甚至失控；乙型肝炎核心抗体(HbcAb)测定20次测定值均处于在控状态。结论 Grubbs法结合±3 s、±2 s和7T规则能作为ELISA乙型肝炎两对半定量检测的临时室内质控方法。

Grubbs法； 酶联免疫吸附试验； 室内质控

室内质量控制(IQC)是临床实验室检测结果可靠性的前提，做好IQC是临床实验室检测质量的保证。国内大部分市县级医院普遍应用酶联免疫吸附试验(ELISA)来检测乙型肝炎两对半，ELISA试剂盒的有效期短，批号更换频繁，短时间内难以积累最佳条件下20次质控物的检测结果[1]。Grubbs法是一种离群值检验的统计方法，该法只需测定3次，即可对第3次结果进行质控分析，适用于试剂有效期短，批号更换频繁或不常开展的检验项目[2]。但Grubbs法也存在着自身的缺陷，具体表现为“回顾性失控检出”现象和前3次测定结果对后续质控结果的影响较大，不能直接用于本室日常的IQC。因此，作者探讨了Grubbs法结合±2 s、±3 s和7T规则作为ELISA乙型肝炎两对半定量检测临时IQC的可行性，现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验试剂 ELISA乙型肝炎两对半定量检测试剂盒[丰华公司，乙型肝炎表面抗原(HBsAg)试剂批号201112003，乙型肝炎表面抗体(HbsAb)试剂批号201205001，乙型肝炎E抗原(HbeAg)试剂批号201209002，乙型肝炎E抗体(HbeAb)试剂批号201208002，乙型肝炎核心抗体(HbcAb)试剂批号201203002]。

1.1.2 质控血清

1.1.3 实验仪器 全自动酶免疫分析仪(安图Auto CLIA)。

1.2 方法

1.2.1 乙型肝炎两对半定量检测 采用ELISA法进行检测，严格按照试剂盒操作步骤和全自动酶免仪的操作要求进行检测。

1.2.3 结合其他规则分析 在应用Grubbs法对测定值进行室内质控分析的同时，结合±2 s、±3 s和7T规则，±2 s为警告规则，±3 s和7T为失控规则。当Grubbs法与以上3个规则相矛盾时，应当从Grubbs法与±2 s、±3 s和7T规则的适用条件、质控方法的性能与缺陷以及测定值的统计学分析结果综合判定可疑测定值的质控状态，确保室内质控的及时准确，保障实验室检测结果的质量。

2 结 果

2.1 Grubbs法质控分析结果 将获得的20次质控测定值按照Grubbs法的操作进行统计分析，HbsAg、HbsAb、HbeAg、HbeAb所得结果均处于在控状态；HbcAb的20次质控测定值按照Grubbs法的操作进行统计分析，显示第3次测定值为1.72，可疑值为1.72，SI上限大于n2s且小于n3s，即处于“警告”状态，而其后的测定值均处于在控状态，如图1所示，按照Grubbs法规则应舍去可疑值1.72，重新测定再分析，则20次测定结果均处于在控状态，如图2所示，但图2中出现比可疑值1.72大的测定值被判为在控的现象，观察可见前两次测定值相距较近，经分析应将前两次(1.12,1.03)看作一次测定取平均值(1.08)作为测定值，从第4次测定值开始进行质控，则20次测定结果均处于在控状态。

图1 Grubbs法应用于ELISA法HbcAb定量测定质控分析结果(剔除可疑值前)

图2 Grubbs法应用于ELISA法HbcAb定量测定质控分析结果(剔除可疑值后)

2.2 ±2 s、±3 s和7T规则质控分析结果 ±2 s、±3 s和7T规则对质控数据进行分析，除HbeAb定量测定中第13次测定结果违反了±2 s规则外，HbsAg、HbsAb、HbeAg、HbcAb的各个测定值均处于在控状态。HbeAb具体质控分析见图3，该次测定数据判定为警告状态，保留数据，且予以注意，积极分析原因，避免后续的检测继续告警甚至失控。

图3 ±2 s、±3 s和7T规则应用于ELISA法HbeAb定量测定质控分析结果

3 讨 论

目前，大部分临床实验室免疫学检验项目多采用ELISA的方法，其中乙型肝炎两对半定量试剂盒的应用较为广泛，但ELISA试剂盒收到酶试剂的限制，有效期较短，批号更换频繁，应选择一种更合适的质控方法作为更换试剂盒批号时的临时质控方法，以便于在更换试剂盒批号保证检验质量。

Grubbs法是一种离群值检验的统计方法，一组测定值中明显偏离测定值群体的过大值或过小值称为离群值，它可能是测定结果随机波动的极值，也可能是与群体测定值非属同质总体的异常值[3]。Grubbs法用于正态分布的样本中判断异常值，应用于室内质控即从所有质控品测定值中判断明显偏离测定均值的可疑测定值是否为异常值，从而判断检测是否在控。由此可见，Grubbs法并不是判断当次检验结果是否处于质控状态的方法，而是判断当次及之前测定值中偏离均值最远的测定值是否失控的方法。正因这一特点，Grubbs法存在着“回顾性失控检出”的缺陷，具体表现为在测定次数较少时有些离群值可能不一定会显示失控，但随着测定次数增加，测定值逐渐趋于稳定，这时以前的离群值将“暴露”出来显示为失控，这些离群值称为“迟后异常值”[4]。这种情况多出现在最初几次测定、均值及标准差不断改变和CV偏大时，观察结果可见本研究各项质控测定值CV大部分在25%以内，结合±2 s、±3 s规则即可避免“回顾性失控检出”现象。

值得注意的是，本次质控过程中出现了Grubbs法对可疑值的错判现象(图1)。HbcAb定量测定中第3次测定值1.72按照Grubbs法判定应当删去，应重新测定作统计分析数据，表1中第11次测定值为1.83，第18次测定值为1.82，这两个测定值均比可疑值1.72大，但都判定为在控状态，这种结果可归因于前两次测定值(1.12和1.03)相距较近，而跟第3次测定结果相距较远。当前3次测定值的CV值小于5%时，第4个在控数据允许CV值范围超过16%就提示失控[5]，作者认为当前两个测定值相距较近时，对第3个测定值的允许CV值范围就越小，则对第3个测定值的判定越容易出现假失控。文献[6]也表明若测定过程中前两次测定值相等时，SI上限和SI下限均为一常数，此时Grubbs法已不能起到监控作用，这种问题是由于样本量少，造成的抽样误差引起的，解决方法是增加样本量，把两次相同的测定值看成是一个测定结果，从第4次测定值开始进行质控。由后期制作的L-J图作回顾分析时也可见可疑值1.72并未失控，此时应结合±2s、±3s和7T规则作出判断。作者认为应取前两次测定值的平均值作为一次测定的结果，保留可疑值1.72，从第4次测定开始作质控分析，则20次测定值均处于在控范围，这一结果也符合L-J图回顾分析的结果。HbeAb定量测定中Grubbs法显示20次测定值均处于在控状态，但第13次测定结果2.39违反了±2 s规则，应当结合实际分析，可疑值未违反Grubbs法失控规则，此结果判定为“警告”，可保留数据但应予以注意，积极分析原因，避免后续的检测继续告警甚至失控。

Grubbs法主要使用于定量分析，只要质控测定值在在控条件下呈正态分布的情况下皆可应用[7]。文献[8]报道Grubbs法前3次测定值对后续测定值的质控影响较大，易出现假失控和假在控，沈菁等[3]认为可结合实验室的实际情况，制订合适的允许CV范围，可减少假失控和假在控的结果，作者认为是一种合理、可行之法。

本研究表明Grubbs法结合±3 s、±2 s和7T规则能作为ELISA乙型肝炎两对半定量检测临时室内质控方法是可行的，当测定值累积到20次后，应绘制L-J质控图作为日常室内质控方法。

[1]袁明月,文鸿雁,杨志,等.基于Grubbs准则的小波阈值改进研究[J].人民长江,2014,14(10):69-71.

[2]张璇,程敏熙,肖凤平.利用Origin对数据异常值的剔除方法进行比较[J].实验科学与技术,2012,1(10):74-76.

[3]沈菁,徐如梅,池春燕,等.即刻法用于酶联免疫吸附试验室内质控的探讨[J].海南医学,2009,20(4):11-13.

[4]丁海明,潘婉仪.ELISA定性实验“即刻法”室内质控的评价与应用[J].现代医学检验杂志,2009,24(3):28-30.

[5]陈飞.即刻法在手工ELISA室内质控方法中的探讨和改良[J].国际检验医学杂志,2011,32(19):2242-2243.

[6]段红蕾,吴青梅,李洁,等.Grubbs与Levey-Jennings质控图在唐氏筛查质量控制中的应用[J].检验医学,2009,2(10):155-156.

[7]秦晓光.如何正确理解和使用“即刻性”质控法[J].中华检验医学杂志,2006,29(2):190-192.

[8]周守勤,孔斌,张作青,等.Grubbs法在酶联免疫法室内质控中探讨[J].临床和实验医学杂志,2011,22(10):1791.

Study on application of Grubbs method in internal quality control for hepatitis B determination by ELISA

WUQi-kang,CHENBin-hong,CHENZhan-ze,ZHENGXue-lian,DAIWei-liang

(DepartmentofClinicalLaboratory,FoshanMunicipalFirstPeople′sHospital,Foshan,Guangdong528000,China)

Objective To investigate the feasibility of the Grubbs method combined with the ±3 s,±2 s and 7Trule applied to the temporary internal quality control method for hepatitis B determination by ELISA.Methods The continuous 20 batches of internal quality control data in the hepatitis B quantitative determination by ELISA at the same quality control batch number were consulted and the application of Grubbs method combined with the ±3 s,±2 s and 7Trule was statistically analyzed.Results The 20 times detection values in the HBsAg,HbsAb and HbeAg quantitative determination by ELISA were in the controlled state;the 20 times detection values displayed by the Grubbs method in the HbeAb quantitative determination were in the controlled state,but the thirteenth detection results violated the ±2 s rule,which was judged as a warning condition,its data were retained and paid attention,the reasons were actively analyzed to avoid the subsequent determination being warning or out of control again;the 20 times detection values in the HbcAb quantitative determination by ELISA were in the controlled state.Conclusion The Grubbs method combined with the ±3 s,±2 s and 7Trule can be used as the temporary internal quality control method for hepatitis B determination by ELISA.

Grubbs method; ELISA; internal quality control

伍启康，男，本科，副主任技师，主要从事临床检验工作。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.14.048

A

1672-9455(2015)14-2088-02

2015-02-25

2015-03-20)