舒 畅，吴振启

(1.湖北省黄石市中心医院肿瘤内科 435000；2.湖北医药学院，湖北十堰 442000)



·论 着·

不同剂量吡格列酮对膀胱癌上皮细胞生长的影响*

目的 研究不同剂量吡格列酮对膀胱癌上皮细胞生长的干预效果。方法 选取膀胱癌患者60例，将其随机分为低剂量组(n=30)和高剂量组(n=30)，分别采用1 μmol/L和10 μmol/L吡格列酮进行干预治疗。分别在干预治疗1、2、3、4 d时检测膀胱癌上皮细胞存活率，在干预治疗4 d时检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达水平及Ⅲ型胶原浓度，对结果进行统计分析。结果 随着干预治疗时间的延长，两组患者膀胱癌上皮细胞存活率均明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)，且在干预治疗2、3、4 d时高剂量组膀胱癌上皮细胞存活率低于低剂量组，差异均有统计学意义(P<0.05)。高剂量组患者的α-SMA mRNA、CTGF mRNA表达水平和Ⅲ型胶原浓度均显着低于低剂量组，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 较高剂量的吡格列酮可能通过进一步降低α-SMA mRNA、CTGF mRNA表达水平和Ⅲ型胶原浓度，从而诱导膀胱癌上皮细胞的凋亡，效果优于低剂量吡格列酮。

吡格列酮； 膀胱癌； 上皮细胞； 凋亡

膀胱癌是发生在膀胱黏膜上的恶性肿瘤,其中膀胱尿路上皮癌是膀胱癌的常见类型，约占90%。临床中主要以化疗、手术或二者结合为主，尽管短期效果比较显着，但是远期预后不甚理想，5年生存率仅约30%[1]。如何更加有效地治疗改善患者症状、提高生存率成为当前研究热点。随着癌细胞干预技术的不断发展，应用吡格列酮来抑制膀胱癌上皮细胞的生长并诱导其凋亡成为临床治疗膀胱癌的新思路。吡格列酮应用在乳腺癌、肺癌等肿瘤细胞抑制研究中取得了比较理想的临床效果[2]，但膀胱癌上皮细胞与吡格列酮的干预效果研究较少。本研究选取不同剂量吡格列酮对膀胱癌上皮细胞生长的影响，为吡格列酮在膀胱癌的临床治疗中提供了新的思路，且取得一定的治疗效果，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 连续选取2013年5月至2014年5月入本院诊断为膀胱癌患者共60例，经本院伦理委员会批准及患者知情同意后，将其随机分为低剂量组和高剂量组，每组各30例，其中低剂量组男性18例，女性12例，年龄38～65岁，平均(51.5±6.2)岁，病程6个月至2年，平均(1.3±0.4)年；临床表现：膀胱刺激征为主(尿频、尿急和尿痛)14例，排尿困难7例，血尿9例。高剂量组男性17例，女性13例，年龄36～74岁，平均(52.8±7.3)岁，病程8个月至4年，平均(1.4±0.8)年；临床表现：膀胱刺激征为主16例，排尿困难6例，血尿8例。两组在性别、年龄、病程和临床表现等方面差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法 两组患者均采取吡格列酮(中美华东制药公司生产)干预治疗，其中低剂量组应用吡格列酮1 μmol/L，高剂量组应用10 μmol/L。使用RPMI1640培养液将吡格列酮稀释到规定标准，之后抽取膀胱癌患者上皮细胞，对其进行培养研究[3]。

1.3 观察指标 细胞存活率采用自动酶检测仪对样本数量进行读取并计算3次检测结果平均值作为实验结果，分别检测干预治疗1、2、3、4 d时两组的膀胱癌上皮细胞存活率。Ⅲ型胶原浓度采用ELISA法检测，检测步骤严格按照试剂盒(大连泛邦公司生产)说明书进行。α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和结缔组织生长因子(CTGF)mRNA采用免疫组化SP法检测，其试剂盒由北京中衫生物技术有限公司提供，以β-actin为内参基因，检测结果分别以α-SMA mRNA和CTGF mRNA与β-actin的比值表示。在干预治疗4 d时检测两组α-SMA mRNA、CTGF mRNA表达水平及Ⅲ型胶原浓度。

2 结 果

2.1 不同干预治疗时间两组患者膀胱癌上皮细胞存活率比较 干预治疗1 d，两组患者的上皮细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05)；随着时间的延长，两组的上皮细胞存活率较干预治疗1 d时有所降低，差异有统计学意义(P<0.05)；且高剂量组在干预治疗2、3、4 d时上皮细胞存活率明显低于低剂量组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 不同干预治疗时间两组患者膀胱癌上皮细胞存活率比较(%)

注：与本组干预治疗1 d时比较，*P<0.05；与低剂量组比较，#P<0.05。

2.2 两组患者α-SMA mRNA、CTGF mRNA、Ⅲ型胶原检测结果比较 高剂量组患者的α-SMA mRNA、CTGF mRNA表达水平及Ⅲ型胶原浓度均显着低于低剂量组，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 两组患者α-SMA mRNA、CTGF mRNA、Ⅲ型胶原检测结果比较

3 讨 论

膀胱尿路上皮癌可分非肌层和肌层浸润性两种，临床主要以经尿道膀胱肿瘤电切术、化疗或者化疗+手术治疗为主，化疗有效率仅在60%左右，手术治疗的5年生存率与化疗效果相当，预后均不甚理想。近几年专家开始从膀胱癌上皮细胞生长作为突破点，发现吡格列酮能有效抑制膀胱癌上皮细胞生长并诱导其凋亡，辅助手术或化疗手段，显着提高了患者临床治疗效果，延长其生命，提高了生存质量。

本研究分别采用1 μmol/L与10 μmol/L两种剂量对膀胱癌患者进行干预治疗，结果发现：膀胱癌上皮细胞的存活率与吡格列酮的剂量呈负相关。且有研究报道膀胱癌上皮细胞凋亡速度与数量与吡格列酮的剂量呈正相关[3-4]。但是，实际治疗中吡格列酮剂量的选择需要根据膀胱癌患者病情进展及自身实际情况，寻找合适的剂量，以提高临床治疗效果和避免对身体造成不可逆性损伤[5-7]。本研究还发现，α-SMA mRNA、CTGF mRNA表达水平和Ⅲ型胶原浓度与吡格列酮剂量也呈负相关，说明较高剂量的吡格列酮可能通过进一步降低α-SMA mRNA、CTGF mRNA表达水平和Ⅲ型胶原浓度，从而诱导膀胱癌上皮细胞凋亡，效果优于低剂量[8-9]。

目前关于不同剂量吡格列酮对膀胱癌上皮细胞生长影响的研究资料还较少，大剂量吡格列酮的应用安全性尚缺乏相关文献支持，其远期效果仍然需要时间验证。本研究所得出的结论从病理学上具有一定的可行性，临床短期效果也较理想，且无明显不良反应事件发生，可能与本研究样本量较小，观察时间较短有关。因此，在临床应用安全性上还无法得出准确结果，还需要更多的基础研究和大规模临床随机对照试验加以验证。

[1]刘芳,苟蓉,黄俊,等.C3a、C5a及其受体拮抗剂对肾小管上皮细胞β-catenin表达的影响[J].四川大学学报：医学版,2011,42(1):74-77.

[2]朱启伟,王浩,叶平,等.吡格列酮对缺氧/复氧后新生大鼠心肌细胞线粒体膜电位的影响[J].四川大学学报：医学版,2011,42(6):784-788.

[3]李里,朱迪,孙逊.转运体介导的肾靶向雷公藤内酯醇前体药物TPS-L-Carnitine的合成及体外细胞摄取研究[J].四川大学学报：医学版,2012,43(6):936-940.

[4]朱建宁,吴开杰,管振锋,等.DAB2IP在膀胱移行细胞癌组织中的表达及与临床预后的相关性研究[J].四川大学学报:医学版,2014,45(4):591-594.

[5]伍仕敏,艾洪武,熊焰,等.吡格列酮对HepG2细胞增殖和凋亡的影响及机制研究[J].中国药理学通报,2011,27(7):975-981.

[6]万政强,陈晨,伏林山,等.吡格列酮对胶质瘤细胞生长的抑制研究[J].东南大学学报：医学版,2013,32(1):42-45.

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[8]Fu H,Zhang J,Pan J,et al.Chemoprevention of lung carcinogenesis by the combination of aerosolized budesonide and oral pioglitazone in A/J mice[J].Mol Carcinog,2011,50(12):913-921.

[9]李书芳.吡格列酮对2型糖尿病大鼠肾脏雷帕霉素靶蛋白表达的影响[D].南昌：南昌大学，2011.

(收稿日期：2015-01-25 修回日期：2015-04-15)

Effects of different dose of pioglitazone on growth of epithelium cells in patients with bladder cancer*

SHUChang1，WUZhen-qi2

(1.DepartmentofOncology,HuangshiMunicipalCentralHospital,Huangshi,Hubei435000,China;2.HubeiUniversityofMedicine,Shiyan,Hubei442000,China)

Objective To study the interventional effects of different doses of pioglitazone on the growth of epithelium cells in the patients with bladder cancer.Methods A total of 60 cases of bladder cancer were selected and randomly divided into the low dose group(n=30) and the high dose group(n=30).1 μmol/L of pioglitazone and 10 μmol/L of pioglitazone were respectively adopted to conduct the interventional therapy in the two groups.The survival rate of bladder cancer epithelium cells was detected on 1,2,3,4 d of interventional therapy.The expression levels of α-SMA mRNA and CTGF mRNA,and collagen Ⅲ level were detected on 4 d of interventional therapy.The results were performed the statistical analysis.Results the cells survival rate of bladder cancer epithelium cells in the two groups was significantly decreased along with the interventional therapy duration extending,and the difference was statistically significant(P<0.05),moreover the survival rates of bladder cancer epithelium cells on 2,3,4 d of interventional therapy in the high dose group were significantly lower than those in the low dose group,the difference was statistically significant(P<0.05).The expression levels of α-SMA mRNA,CTGF mRNA and collagen Ⅲ level in the high dose group were significantly lower than those in the low dose group,the difference was statistically significant(P<0.05).Conclusion Higher dose of pioglitazone has better effect than low dose of pioglitazone,which may further reduce the expression levels of α-SMA mRNA and CTGF mRNA,and collagen Ⅲ level,thus induces the apoptosis of bladder cancer epithelial cells.

pioglitazone; bladder cancer; epithelium cell; apoptosis

2015-03-15

2015-07-15)

湖北省卫生厅科研基金资助项目(JX3B27)。

舒畅，男，硕士，住院医师，主要从事肿瘤相关研究。

舒 畅1，吴振启2

(1.湖北省黄石市中心医院肿瘤内科 435000；2.湖北医药学院，湖北十堰 442000)

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.19.026

A

1672-9455(2015)19-2878-02