惠 春，卢梦骁，林大专，张凌赢，曾宪东
1.长春医学高等专科学校，吉林长春 130031；2.同济大学数学系，上海 200092
荔枝（Litchi chinesis Sonn.）属于无患子科植物，因具有较高的营养价值和养颜滋补作用，被视为“果中珍品”。据《本草纲目》记载：“常食荔枝能补脑健身，治疗瘰疬，开胃益脾[1]。”荔枝壳作为荔枝食用后的废弃物被扔掉，造成了资源浪费和环境污染。有报道[2]荔枝壳中含有多种活性成分，如黄酮、酚酸和多糖类物质，有较高的加工利用价值。活性多糖对降血压、降血脂等有一定功效[3]。目前对荔枝核、肉中多糖的提取方法研究较多，而对荔枝壳中多糖的提取方法研究鲜见报道，本研究立足荔枝壳废弃物的再利用，并对其活性成分多糖提取条件进行优化，以最大限度提高荔枝壳中多糖的提取率。
1 仪器与材料
1.1 仪器
TU1800双光束紫外可见分光光度计 （北京普西通用仪器责任有限公司）。电子天平BS224S（赛多利斯科学仪器北京有限公司）。
1.2 材料
荔枝壳（购于长春药材公司）、苯酚（开原市化学试剂一厂）、硫酸（北京化工厂）、95%乙醇（北京化工厂）、无水乙醇（北京化工厂）等均为分析纯试剂。D-无水葡萄糖 （批号：110833-200904，中国药品生物制品检定所）
2 方法与结果
2.1 方法
2.1.1 供试品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的荔枝壳5.0 g，水提浓缩后定容于100 ml的容量瓶中。精密吸取上述提取液10 ml，用5倍量95%的乙醇醇沉过夜，离心（4000 r/min）后用95%乙醇洗涤醇沉物，用水定容于25 ml容量瓶中，即制备得荔枝壳多糖供试品溶液。
2.1.2 荔枝壳多糖的测定方法 依据以葡萄糖为标准品的硫酸-苯酚比色法[4]。
2.1.3 对照品溶液的配制 精密称取干燥至恒重的无水葡萄糖0.0146 g，定量转移至100 ml容量瓶中，用水稀释至刻度，即得0.146 mg/ml的对照品溶液。
2.1.4 标准曲线的制备[5]精密吸取 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml上述对照品溶液至5支具塞试管中，然后依次加入蒸馏水至2 ml，再各加6%苯酚试剂1.0 ml，摇匀后精密加入浓硫酸5 ml，放置。5 min后置沸水浴中加热，15 min后立即转入冷水浴中。至室温后在490 nm波长处测定吸收度，即得标准曲线，以质量M对吸收度A作线性回归，得回归方程：A=0.007788M-0.05088，r=0.9999。
2.1.5 精密度试验 精密量取微波提取法项下“5号”样品（精密称取干燥至恒重的荔枝壳0.5040 g，用95%乙醇索式提取，脱脂后，将预处理后的样品加1∶20倍的水，在100℃、3 min、900 W功率下于微波萃取仪内提取，合并提取液，定容于100 ml容量瓶中，即得），共制备6份，按标准曲线制备项下的方法测定吸光度，结果RSD为0.642%（n=6），表明精密度符合要求。
2.1.6 稳定性试验 精密量取对照品溶液0.6 ml，照“2.1.4”项下的方法测定吸光度，每隔30 min测定一次，至2.5 h时，测得RSD为0.585%（n=6），说明吸光度在150 min内稳定。
2.1.7 重现性试验 精密量取微波提取法 （功率单因素影响）项下“5号”样品1.0 ml，按标准曲线的制备项下的方法测定吸光度，重复操作6次，测得RSD为0.902%（n=6）。
2.1.8 加样回收率试验 精密吸取微波提取法（功率单因素影响）项下“5号”样品液 0.5 ml（6份），分别加入对照品溶液0.5 ml，照样品测定项下方法测定吸光度，计算回收率，结果测得 RSD=0.463%（n=6）。
2.1.9 荔枝壳多糖样品液的测定 精密吸取1.0 ml荔枝壳多糖样品液，按“2.1.4”标准曲线制备项下的方法操作。
2.2 结果
2.2.1 单因素试验结果 单因素中的提取次数、提取时间、料液比、提取温度对多糖得率的影响，见图1～4。
图1 提取次数对多糖得率的影响
图2 提取时间对多糖得率的影响
2.2.2 正交试验结果 选择正交表L9（34），以提取时间、温度和料液比做如下三因素、三水平的正交实验。因素—水平设计，见表 1；正交试验结果，见表 2、3。
3 讨论
3.1 单因素试验结果讨论
3.1.1 提取次数对多糖得率的影响 图1显示，随着提取次数的增加，样品多糖得率无显着性递增，考虑时间和能源的节俭不浪费，以选择提取2次较为合适。
3.1.2 提取时间对多糖得率的影响 图2显示，3 h以前，随着提取时间的延长多糖得率上升较大，3 h以后，多糖得率随着时间的变化不显着。
表1 因素水平表
表2 L9（34）正交试验极差分析结果
3.1.3 料液比对多糖得率的影响 图3显示，当料液比为1∶30时，多糖得率达到最高点。
3.1.4 提取温度对多糖得率的影响 图4显示，当提取温度达到90℃以后，温度提高对多糖得率的影响显着。
表3 正交试验方差分析结果
3.2 正交试验结果讨论
从以上实验结果和方差分析，可以得出以下结论：
3.2.1 由RC＜RA＜RB可以依次排列出影响荔枝壳中多糖得率的因素顺序为提取温度、提取时间和料液比。
3.2.2 由 k1A＜k2A＜k3A、k1B＜k2B＜k3B和 k3C＜k2C＜k1C可以得出 A3B3C1为荔枝壳多糖提取的最佳工艺条件，即提取时间为3 h、提取温度为 100℃、料液比为1∶20。
3.3.3 在 α=0.05 水平下，F0.05（2，2）=19，由于 F 均小于 F0.05（2，2）=19，故A、B、C三因素对荔枝壳中多糖得率影响均不显着。
[1]唐小俊,池建伟,张名位,等.荔枝多糖的提取条件及含量测定[J].华南师范大学学报,2005,4(2):27-31.
[2]杨宝,赵谋明,李宝珍,等.荔枝壳活性成分提取工艺条件研究[J].食品与机械,2004,20(6):28-30.
[3]吴仲梁,韩伟,陶军,等.快速检测食品中金黄葡萄球菌的检测方法[J].中国食品工业,2003,(6):56-57.
[4]董周勇,池建伟,杨公明,等.荔枝多糖微波提取工艺研究[J].食品工业科技,2006,(3):118-121.
[5]吴雅静,张名位,孙远明,等.荔枝多糖的超声辅助提取工艺优化研究[J].华南师范大学学报:自然科学版,2007,(7):119-124.
