张东旭 范引科 郭淑云 李穆琼 李晓晔 刘雪英▲

1第四军医大学药学系药物化学与药物分析学教研室，陕西西安 710032；2.陕西省中医药研究院，陕西西安 710003；3.第四军医大学附属唐都医院药剂科，陕西西安 710038

芝麻素为白色针状晶体，是芝麻油中所含的一种木脂素类化合物，是芝麻中的主要活性成分，具有抗高血压、保肝、抗氧化、降低胆固醇等功效[1]。日本东京大学医学院首次研究证实芝麻素具有抗癌功效，对肝癌、皮肤癌均有抑制作用，认为低浓度的芝麻素饮食可能作为肝癌的抑制剂[2]。我国对芝麻的利用仅限于其保健作用，作为临床药物使用的研究极少。为此，我们拟通过抑瘤试验、延长生命试验、免疫试验及增效减毒试验进一步验证其作用，为本品进入临床提供实验依据。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

电子天平购自于北京赛多利斯天平厂 (型号：BS210S， 精确度：0.1 mg)，Olympus 普通光学显微镜，SW-CJ-2D型双人净化工作台购自于苏州净化设备有限公司生产(型号：NO.0504192%)，Taisite 洁净工作台，TDZ4AWS台式低速自动平衡离心机。

1.2 药物及试剂

芝麻素（上海静融生物科技有限公司生产，批号：110836-201005），环磷酰胺（MTX）注射液（江苏恒瑞医药股份有限公司生产，规格：0.2 g，批号：20110903），5-氟脲嘧啶（5-FU）注射液（上海旭东海普药业有限公司生产，规格：10 mL：0.25 g，批号：111033）。

1.3 实验动物及瘤株

ICR小鼠由西安交通大学医学院实验动物中心提供，体重18～22 g，实验动物质量许可证号：SCXK（陕）2007-001。 饲养条件：室温（23±2）℃；日光灯采光，光暗周期 12 h/12 h（光照时间为 7∶00～19∶00）；动物自由获取水和食物。小鼠S180肉瘤细胞株由第四军医大学实验动物中心引进。

2 方法与结果

2.1 实验方法

2.1.1 芝麻素对小鼠移植性S180肉瘤生长的影响按文献所述方法[3-5]，取ICR小鼠50只（雌雄各半），体重18～22 g，在超净工作台内制备瘤细胞悬液，无菌条件下于小鼠腋下接种瘤细胞悬液0.2 mL，计瘤细胞数约为1×107个/mL。24 h按体重随机分为5组，分别为荷瘤组（常水 10 mL/kg）、环磷酰胺（CTX）40 mg/kg 组和芝麻素 1.0、0.5、0.25 g/kg 剂量组。 接种 S180 瘤细胞后次日开始给药，1次/d，连续给药10 d，末次给药后次日，称体重后处死小鼠，剖取瘤块，计算体重和抑瘤率。试验重复3次。肿瘤抑制率=[（对照组平均瘤重-给药组平均瘤重）/对照组平均瘤重]×100%

2.1.2 芝麻素对S180腹水瘤小鼠生存时间的影响按文献所述方法[5-8]，取ICR小鼠50只，雌雄各半，体重18～22 g，在超净工作台内制备瘤细胞悬液，无菌条件下于小鼠腋下接种瘤细胞悬液0.2 mL，计瘤细胞数约为1×107个/mL。24 h按体重随机分为5组，分别为荷瘤组 （常水10 mL/kg）、CTX组40 mg/kg和芝麻素1.0、0.5、0.25 g/kg 剂量组。接种 S180 腹水瘤细胞后次日开始给药。1次/d，连续给药10 d。给药结束后继续观察，记录各组小鼠生存时间，计算生命延长率。实验中对照组7 d内病死率小于20%，无一只生存期超过4周，治疗组观察期以60 d为限。

2.1.3 CTX和5-FU治疗S180荷瘤小鼠的增效作用按文献所述方法[9-11]，小鼠90只，雌雄各半25只，体重18～22 g，取生长良好的腹水型肿瘤小鼠，脱臼处死，超净工作台内制备瘤细胞悬液，计瘤细胞数约为1×107个/mL，每只小鼠腋部皮下接种0.2 mL瘤细胞液，即接种2×106个瘤细胞。次日按体重随机分为9组，分别为荷瘤组（常水 10 mL/kg）、芝麻素（0.5 g/kg）组、芝麻素（0.25 g/kg）组、CTX（10 mg/kg）组、5-FU（20 mg/kg）组、芝麻素 0.5 g/kg+CTX 组、芝麻素 0.5 g/kg+5-FU 组、芝麻素 0.25 g/kg+CTX 组、芝麻素 0.25 g/kg+5-FU组。接种S180瘤细胞后次日开始给药，1次/d，连续给药10 d，末次给药后次日，称体重后处死小鼠，剖取瘤块，计算体重和抑瘤率。再根据Nuebb分数乘积法计算芝麻素+CTX组和芝麻素+5-FU组的理论效应值， 即 （Fa）1.2=1-[1-（Fa）1]×[1-（Fa）2]，（Fa）1和（Fa）2分别为芝麻素+CTX组和芝麻素+5-FU组的抑瘤率。当合并用药效应大于理论相加效应时，则表示两者间有协同作用。

2.1.4 芝麻素对S180荷瘤小鼠CTX毒性的对抗作用按文献所述方法[12]，小鼠72只（雌雄各半），体重18～22 g，取生长良好的腹水型肿瘤小鼠，脱臼处死，超净工作台无菌操作制备瘤细胞液，计数池计数细胞浓度为1×107个/mL，每只小鼠腋部皮下接种0.2 mL瘤细胞液，即接种2×106个瘤细胞。次日按体重随机分为5组，分别为荷瘤组（常水 10 mL/kg）、CTX（40 mg/kg）组和芝麻素 1.0 g/kg+CTX 组、芝麻素 0.5 g/kg+CTX 组和芝麻素0.25 g/kg+CTX组。S180荷瘤接种方法同前。接种S180荷瘤细胞后次日开始给药。1次/d，连续给药10 d。末次给药后次日，自小鼠内眦静脉丛采血，取血20 μL加入到2 mL 2%冰醋酸溶液中摇匀，常规计数外周血白细胞总数。称体重后处死小鼠，剖取瘤块称重，计算抑瘤率。同时剥离左侧股骨，用2%冰醋酸溶液5 mL冲出骨髓内细胞，常规计数细胞总数，即为1根股骨中骨髓有核细胞数。

2.2 统计学方法

采用SPSS 15.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用t检验；计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2.3 结果

2.3.1 芝麻素对小鼠移植性S180肉瘤生长的影响芝麻素 1.0、0.5 g/kg 剂 量能明显 抑 制 小鼠移 植 性S180 瘤体的生长（P ＜ 0.01），芝麻素 0.25 g/kg剂量对S180瘤体的生长也有一定的抑制作用（P＞0.05），表明芝麻素对小鼠移植性S180肉瘤具有一定的抑制作用。见表1。

表1 芝麻素对小鼠移植性S180肉瘤生长的影响（±s）

表1 芝麻素对小鼠移植性S180肉瘤生长的影响（±s）

注：与荷瘤组相比，*P ＜ 0.01；CTX：环磷酰胺；“-”表示无数据

荷瘤组CTX组芝麻素组芝麻素组芝麻素组常水10 mL/kg 40 mg/kg 1.0 g/kg 0.5 g/kg 0.25 g/kg 10 10 10 10 10 5.07±1.36 0.56±0.27*3.63±0.96*3.76±1.29*3.81±1.46-88.95 28.40 25.80 24.80组别 剂量 只数 瘤重（g） 抑制率（%）

2.3.2 芝麻素对S180腹水瘤小鼠生存时间的影响芝麻素 1.0、0.5、0.25 g/kg 剂量组和 CTX 组对荷 S180腹水瘤小鼠的平均生命延长率分别为 32.24%、24.18%、17.96%和 78.82%，平均生存时间明显长于荷瘤组（P＜0.05）。提示芝麻素能明显延长荷S180腹水癌小鼠的生存时间。见表2。

表2 芝麻素对S180腹水瘤小鼠生存时间的影响（±s）

表2 芝麻素对S180腹水瘤小鼠生存时间的影响（±s）

注：与荷瘤组相比，*P﹤0.05，#P ＜ 0.01；CTX ：环磷酰胺；“-”表示无数据

荷瘤组CTX组芝麻素组芝麻素组芝麻素组常水10 mL/kg 40 mg/kg 1.0 g/kg 0.5 g/kg 0.25 g/kg 10 10 10 10 10 14.64±2.94 26.18±2.96#19.36±2.80*18.18±2.96 17.27±2.37-78.82 32.24 24.18 17.96组别 剂量 只数 生存时间（d） 生命延长率（%）

2.3.3 CTX和5-FU治疗S180荷瘤小鼠的增效作用单给芝麻素（0.5 g/kg）、CTX （10 mg/kg）及 5-FU（20 mg/kg）时的抑瘤率分别为31.35%、58.81%及63.52%，而5.0g/kg 芝麻素+CTX组和5.0g/kg 芝麻素+5-FU组具有明显的抑瘤作用，抑瘤率分别为73.77%和75.41%，均大于两者合并用药后的理论相加效应值71.72%和74.96%。提示芝麻素与CTX或5-FU联合应用于肿瘤治疗，具有明显的协同增效作用。见表3。单给芝麻素（0.25g/kg）、CTX（10 mg/kg）及 5-FU（20 mg/kg）时的抑瘤 率分别为 22.54%、58.81%及 63.52%，而5.0g/kg芝麻素+CTX 组和 5.0g/kg芝麻素+5-FU 组具有明显的抑瘤作用，抑瘤率分别为71.92%和73.15%，均大于两者合并用药后的理论相加效应值68.10%和71.74%。提示芝麻素与CTX或5-FU联合应用于肿瘤治疗，具有明显的协同增效作用。见表4。

表3 5.0g/kg芝麻素对CTX和5-FU抗小鼠移植性S180肉瘤的增效作用（±s）

表3 5.0g/kg芝麻素对CTX和5-FU抗小鼠移植性S180肉瘤的增效作用（±s）

注： 与荷瘤组相比，*P ＜ 0.01；CTX： 环磷酰胺；5-FU：5-氟尿嘧啶；“-”表示无数据

荷瘤组芝麻素组CTX组5-FU组芝麻素+CTX芝麻素+5-FU常水20 mL/kg 0.5 g/kg 20 mg/kg 20 mg/kg 0.5 g/kg+10 mg/kg 0.5 g/kg+20 mg/kg 4.88±0.97 3.35±0.73 2.01±0.75*1.78±0.52*1.28±0.18*1.20±0.39*-31.35 58.81 63.52 73.77 75.41----＞ 71.72＞ 74.96组别 剂量 瘤重（g） 抑制率（%） （Fa）1.2

表4 0.25g/kg芝麻素对CTX和5-FU抗小鼠移植性S180肉瘤的增效作用（±s）

表4 0.25g/kg芝麻素对CTX和5-FU抗小鼠移植性S180肉瘤的增效作用（±s）

注：与荷瘤组相比，*P＜0.01；CTX：环磷酰胺；5-FU：5-氟尿嘧啶；“-”表示无数据

荷瘤组芝麻素组CTX组5-FU组芝麻素+CTX芝麻素+5-FU常水20 mL/kg 0.25 g/kg 20 mg/kg 20 mg/kg 0.25 g/kg+10 mg/kg 0.25 g/kg+20 mg/kg 4.88±0.97 3.78±0.80 2.01±0.75*1.78±0.52*1.37±0.45*1.31±0.44*-22.54 58.81 63.52 71.92 73.15----＞ 68.10＞ 71.74组别 剂量 瘤重（g） 抑制率（%） （Fa）1.2

2.3.4 芝麻素对S180荷瘤小鼠CTX毒性的对抗作用芝麻素 1.0、0.5、0.25 g/kg 组及 CTX （20 mg/kg）组对S180荷瘤小鼠瘤重均有明显降低作用。芝麻素1.0、0.5 g/kg组可使骨髓有核细胞数明显回升（P ＜ 0.05）。芝麻素 1.0、0.5、0.25 g/kg 组可使外周血白细胞数有明显的回升（P＜0.05）。CTX可使荷瘤小鼠的骨髓有核细胞数和外周血白细胞数明显降低 （P＜0.01），提示芝麻素对CTX有一定的减毒作用。见表5、6。

表5 芝麻素对S180荷瘤小鼠CTX毒性的对抗作用（±s）

表5 芝麻素对S180荷瘤小鼠CTX毒性的对抗作用（±s）

注：与荷瘤组相比，*P ＜ 0.01；CTX：环磷酰胺；“-”表示无数据

荷瘤组CTX组芝麻素+CTX芝麻素+CTX芝麻素+CTX常水10 mL/kg 40 mg/kg 1.0 g/kg+20 mg/kg 0.5 g/kg+20 mg/kg 0.25 g/kg+20 mg/kg 12/12 12/12 12/12 12/12 12/12 2.49±0.79 0.52±0.13*0.66±0.21*0.73±0.36*0.79±0.27*-79.12 73.49 70.68 68.27组别 剂量 只数（始/末） 瘤重（g） 抑制率（%）

3 讨论

本实验研究了芝麻素对S180荷瘤小鼠的抑癌作用，以及CTX和5-FU治疗S180荷瘤小鼠的增效作用和毒性的抑制作用，实验结果表明，低浓度的芝麻素对S180细胞的生长有一定的抑制作用，能过抑制小鼠移植性S180肉瘤的生长，同时能明显延长荷S180腹水癌小鼠的生存时间；芝麻素与CTX或5-FU联合应用于肿瘤治疗，具有明显的协同增效作用；芝麻素可使骨髓有核细胞数和外周血白细胞数明显回升，与CTX联合应用于肿瘤治疗可在增效的同时，对CTX有一定的减毒作用。

表6 芝麻素对荷S180小鼠CTX的减毒作用（±s）

表6 芝麻素对荷S180小鼠CTX的减毒作用（±s）

注：与 CTX 组相比， *P<0.05，＃P<0.01；CTX：环磷酰胺

荷瘤组CTX组芝麻素+CTX芝麻素+CTX芝麻素+CTX常水10 mL/kg 40 mg/kg 1.0 g/kg 0.5 g/kg 0.25 g/kg 10 10 10 10 10 11.28±3.16＃4.55±1.53 6.36±1.29＃6.08±1.32*5.98±1.27 19.34±3.53＃9.37±1.75 21.79±11.64*20.29±10.58*19.90±11.11*组别 剂量 只数 骨髓有核细胞数（×106/根股骨）外周血WBC（×109/L）

芝麻作为天然植物在我国分布广泛、资源丰富，《神农本草经》记载，芝麻具有“伤中虚赢，补五内、益气力、长肌肉、填精益髓”的作用，我国自古以来就有将芝麻作为保健品用于食疗的习俗，但作为治疗药物使用的研究极少。目前芝麻素的提取纯度已高达99%，日后芝麻素的临床研究及应用会日益深入。

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