夏提古丽·阿不利孜 凯撒·苏莱曼 阿迪力·艾斯托拉 魏鸿雁
【摘 要】 目的：以熊果酸为对照品，建立新疆维吾尔药材硬尖神香草的薄层色谱鉴别方法。方法：收集两个产地8个批次的硬尖神香草生药材，根据2010版《中国药典》附录VI B（薄层色谱法）中相关项下方法进行薄层鉴别，以熊果酸作为对照品，考察不同展开系统、显色剂、温度、湿度、点样量和不同厂家硅胶板对尖神香草中熊果酸薄层鉴别的影响，从中选出维药硬尖神香草中熊果酸薄层鉴别的最佳条件。结果：吸取供试品溶液和对照品溶液各3μl点于青岛海洋化工有限公司产高效硅胶板上，在三氯甲烷-丙酮（12∶1）系统中展开，喷以10%硫酸乙醇显色，供试品与熊果酸对照品在同样的位置显紫色的斑点，所得的薄层色谱分离效果较好。结论：研究建立的硬尖神香草药材中熊果酸的薄层鉴别方法操作简便，重现性好，专属性强，可以用于维吾尔药硬尖神香草的质量控制。
【关键词】 硬尖神香草；质量标准；薄层鉴别；熊果酸
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2016）04-0013-02
Abstract：Objective To set up the TLC identification of Hyssopu cuspidatus Boriss with ursolic acid as standard compound.Method According to the Chinese Pharmacopoeia （2010 Revision） Appendix VI B （TLC）， different extract methods and solvents，developing system，comogemc agents， temperature， humidity， drawing amounts and thin layer boards were investigated for optimizing TLC identification of ursolic acid. Results Drawing 3μl solution on efficient layer board （200mm×100mm，Qingdao Ocean Chemical Co.Ltd）， developing system trichloromethane-acetone（12∶1） was applied.After spaying with 10% sulfuric acid in ethanol， significant purple color appeared on the sample solution with the ursolic acid at same position.Conclusion The established TLC identification on the quality standardization of Hyssopu cuspidatus Boriss（ursolic acid as the standard compound） is simple， repeatable and specific. It can improve and lay a foundation on the quality standardization of Hyssopu cuspidatus Boriss.
Keywords：Hyssopu cuspidatus Boriss；Quality Standards；TLC；Ursolic Acid
硬尖神香草Hyssopu cuspidatus Boriss为唇形科植物，主要产于新疆北部阿勒泰地区[1]，维吾尔医常用名称为神香草。神香草的维吾尔名“祖帕”，收载于《中华人民共和国卫生部药品标准，维吾尔药分册》、《维吾尔药志》。具有清除异常黏液质、温肺平喘、祛寒止咳、燥湿祛痰、发汗解毒、消炎退肿的功效，临床用于湿寒性和黏液质性呼吸器官疾病，如寒性哮喘、咳嗽感冒、湿性痰多、胸膜炎、气管炎、肺炎及水肿等病。研究发现，硬尖神香草全草含有黄酮类、三萜类、烷烃类、甾体类和挥发油等成分。熊果酸是三萜成分的代表性成分之一，是广泛分布的五环三萜类化合物，在多科植物中以游离或糖苷的形式存在[2]，具有广泛的生物学效应，如抗肿瘤、抗炎、镇痛、降血糖、抗菌等[3]。研究以熊果酸对照，建立硬尖神香草药材的薄层鉴别方法，为硬尖神香草的质量控制提供依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Metter AE163电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；KQ3200DA超声仪（昆山市超声仪器公司）；薄层G板（50mm×100mm）、薄层H板（50mm×100mm）、高效板（200×100mm）青岛海洋化工有限公司；HSGF 254板（50mm×100mm，烟台江友硅胶开发有限公司）。
1.2 试药 神香草采自阿勒泰地区（见表1），经新疆阿勒泰地区哈萨克医院库里夏西主任药师鉴定为唇形科植物硬尖神香草Hyssopu cuspidatus Boriss.；熊果酸（批号：110742-201421，中国药品生物制品检定所），所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 溶液制备
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取熊果酸标准品10mg，加甲醇溶解制得浓度为1mg/ml的熊果酸对照品溶液。
2.1.2 供试品溶液的制备 取硬尖神香草粉末10g，加甲醇15ml，密塞，超声（700W，40Hz）提取20min，滤过，取滤液作为供试品溶液[4]。
依照2010版《中国药典》附录VI B （薄层色谱法）中相关项下方法进行照薄层分析[5]，吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，放入展开剂中展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光和紫外灯（254nm，365nm）下检视。
2.2 展开系统选择 分别吸取供试品溶液和熊果酸对照品溶液，点于自制薄层板上，放入展开剂中展开，参考文献[6] ，选择展开剂为三氯甲烷-丙酮（12∶1），石油醚-丙酮-甲醇（8∶2∶0.3），环已烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇（20∶5∶4∶2），环已烷-丙酮-乙酸乙酯（6∶2∶1）为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光和紫外灯（254nm，365nm）下检视。供试品色谱中，在于对照药材和对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。结果见图1。
结果显示展开剂①（石油醚-丙酮-甲醇）和展开剂②（三氯甲烷-丙酮 ）效果比较好，对照品溶液与供试品溶液在365nm紫外灯下相同位置显荧光斑点，在日光下显紫色斑点，且其余成分分离效果较好，斑点清晰，数目较多，拖尾现象不明显，Rf值在0.3～0.8之间；展开剂 ③（环已烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇）对照品溶液与供试品溶液斑点不在同一位置，拖尾现象严重，斑点不清晰；展开剂④（环已烷 -丙酮-乙酸乙酯）与①和②相比分离效果较差。由于展开剂①的组分较展开剂②复杂而且Rf值也比较理想，因此选定展开剂②为最佳展开剂。
2.3 显色剂选择 分别吸取供试品溶液和熊果酸对照品溶液，点与自制硅胶薄层板上，放入“2.2”确定的展开剂中展开，取出，晾干，用不同的显色剂显色（10%硫酸乙醇、5%磷钼酸、5%硫酸乙醇溶液），结果显示在相同展开剂条件下，10%硫酸乙醇显色效果较好，在日光下，对照品与供试品在同一位置显紫色斑点，在365mm紫外灯下相同位置显荧光。
2.4 温度考察 分别在温度为10℃、20℃、30℃、40℃条件下，按“2.2”项下的薄层鉴别方法进行试验。结果，不同的温度对硬尖神香草药材的薄层鉴别没有影响。
2.5 湿度考察 分别吸取供试品溶液和熊果酸对照品溶液，在相对湿度为30%、40%、60%、80%条件下按“2.2”项下薄层鉴别方法进行试验。结果不同的湿度对硬尖神香草薄药材的薄层鉴别没有影响。
2.6 点样量考察 分别吸取2、3、4、5、6、7、8μl供试品溶液和对照品溶液，点于同一硅胶板上（200mm×100mm），放入“2.2”项下确定的展开剂中展开，取出，晾干，喷10%硫酸乙醇溶液显色。结果硬尖神香草中熊果酸含量较高，因此供食品和对照品溶液点样量3μl即可，点样量过大有斑点扩散现象。
2.7 不同薄层板的考察 吸取供试品和对照品溶液各3μl，点于不同硅胶板上放入“2.2”项下确定的展开剂中展开，取出，晾干，喷10%硫酸乙醇溶液显色。结果表明，青岛海洋H板Rf值比较理想，熊果酸等成分分离度好，斑点清晰，无扩散和拖尾现象。
2.8 硬尖神香草中熊果酸薄层鉴别 按照“2.1.2”项下提取方法制备8个硬尖神香草供试品溶液，吸取对照品和供试品3μl，点于青岛海洋化工厂产高效硅胶板之上，放入“2.2”项下确定的展开剂中展开，取出，晾干，喷10%硫酸乙醇溶液显色分别置日光和紫外灯365nm下检视。结果如图3、4所示。
3 讨论
熊果酸是硬尖神香草的主要化学成分之一，也是活性成分之一，在硬尖神香草中含量可达0.9%，可作为生药材薄层鉴别的对照品，且以熊果酸为对照品的硬尖神香草药材薄层鉴别方法尚无文献报道。本研究采用三氯甲烷-丙酮（12∶1）为展开剂进行薄层鉴别，该方法操作简便、可靠、分离度好、斑点清晰，并进行了方法学验证，结果显示本薄层色谱鉴别法重现性好、专属性强。8批硬尖神香草药材进行试验结果显示，供试品与对照品在相同位置显紫色，其余成分的色谱行为相似；显色后在365nm下检视，比日光下检视更为清晰。
参考文献
[1]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志（第六十六卷）[M].北京：科学出版社，1977：243-244.
[2]彭海兵，储金秀.熊果酸对硅肺大鼠的早期抗氧化作用[J].环境与职业医学，2015，32（5）：476-480.
[3]刘忠庆，廖洪利. 熊果酸的抗肿瘤作用研究进展[J].西南国防医药，2014，24（6）：682-683.
[4]帕丽达·阿不力孜，阿提坎木·瓦合甫.HPLC法测定维药神香草及混淆品大苞荆芥中齐墩果酸个熊果酸的含量测定[J].中成药，2014，36（12）：2570-2573.
[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：附录VIB.
[6]张秋红，刘素清. 熊果酸成分薄层分析条件综述[J].时珍国医国药，2014，11（12）：1133-1134.
（收稿日期：2015.12.23）
