符丽华，栾 峰，米贤军，代新珍，罗小婉，高子轩，郑敏慧，陈 昂，孙佳星
(南方医科大学附属中山博爱医院，广东 中山 528400)
子宫内膜癌(Endometrial carcinoma,EC) 是女性最常见的恶性肿瘤[1]， 目前对子宫内膜癌变早期诊断和预后判断尚没有较可靠的方法，恶性肿瘤的发展是多基因共同作用的结果，基因调控异常使正常细胞突变为癌症胞，所以通过对子宫内膜癌相关基因表达研究能够更加了解子宫内膜癌发生发展机制，从而帮助临床早期诊断，做出相应及时有效的治疗方案，有利患者预后。人类染色体端粒酶RNA(human telomerase gene，hTERC)由Feng发现[2]，hTERC 基因异常导致端粒酶活性降低，端粒酶异常是组织癌变的常见现象与宫颈癌、乳腺癌、肺癌等肿瘤的发生和发展有关。本项目通过研究人类染色体端粒酶RNA基因(human telomerase gene，hTERC)在子宫内膜癌的表达情况，分析其与临床关系，探讨hTERC在子宫内膜癌发生发展中的临床意义，为临床探索子宫内膜癌早期诊断和预后提供理论依据，并为实现肿瘤靶向治疗提供新的思路。
1 资料与方法
1.1一般资料：收集2015年4月～2016年8月我院病理科25例子宫内膜样腺癌手术标本的石蜡切片。子宫内膜癌按FIGO,2009年手术病理分期标准：Ⅰ期18例，Ⅱ期 2例 ，Ⅲ期 3例，Ⅳ期2例；高分化腺癌 9例，中分化腺癌 8例，低分化腺癌 8例。患者年龄29～67岁，平均51.04岁。选取25例诊刮正常子宫内膜组织蜡块作为对照，年龄23～53岁，平均37.3岁，所有患者病例资料完整术前均未接受药物治疗及放化疗。
1.2研究方法：手术或诊刮的子宫内膜组织标本按病理常规固定，石蜡包埋，切片厚度4～5 μm，HE染色，恶性肿瘤免疫组化进一步确诊。取典型病灶的子宫内膜石蜡包埋组织标本切片2 μm共3张预处理后做FISH检验hTERC基因。FISH技术检测hTERC基因[3-4]， 探针由北京金菩嘉医疗科技有限公司提供(GLP TERC/CSP3 DNA探针)(CSP3为对照探针)标记颜色：绿/红。用FISH分析软件进行图像分析，评估GLP TERC/CSP3基因双色杂交情况。杂交结果标记颜色绿：红；正常信号细胞为绿色及红色信号各2个，即2∶2；扩增异常信号细胞为绿色信号≥2个，红色信号>2个，统计TERC红色信号≥3个信号点的百分比(见图1、图2)。本研究通过研究建立阈值为5.91%，即异常细胞数/计数细胞总数≥6 则判断为hTERC基因有扩增，结果为阳性。
1.3统计学方法：用SPSS 19.0软件进行统计学分析，计数资料比较用率(%)，用χ2检验或Fisher确切概率法。P<0.05为差异有统计学意义。
图1 子宫内膜癌hTERC基因无扩增
图2 子宫内膜癌hTERC基因有扩增
2 结果
正常子宫内膜、子宫内膜样腺癌hTERC基因阳性表达率分别为20% (5/25)、36 % (9/25 )，子宫内膜癌组织阳性率高于正常子宫内膜组，但经χ2检验两组hTERC基因扩增阳性率比较差异无统计学意义(χ2=1.587 3，P=0.207 7)。按子宫内膜癌临床分期，Ⅰ/Ⅱ期、Ⅲ/Ⅳ期hTERC基因阳性率为40% (8/20 )、20% (1/5)，临床期别早的hTERC基因阳性比晚期病例扩增增加，但经过Fisher计算后，差异别无统计学意义(P=0.620 6)，见表1。按子宫内膜样腺癌分化程度，高分化、中分化、低分化hTERC基因阳性表达率分别为22.22% (2/9)、50% (4/8)、37.5% (3/8)，随着腺癌分化程度越差，hTERC基因扩增阳性率增高，但经过Fisher确切概率法计算后差异无统计学意义(P=0.5165)。见表2。
表1hTERC基因与子宫内膜腺癌临床期别的关系[例(%)]
临床分期hTERC基因扩增例(阳性)hTERC基因无扩增例(阴性)Ⅰ/Ⅱ期8(40)12(60)Ⅲ/Ⅳ期1(20)4 (80)
表2hTERC基因与子宫内膜腺癌分化程度的关系
分化程度hTERC基因扩增例(阳性)hTERC基因无扩增例(阴性)高分化2(22.22)7(77.78)中分化4(50)4(50)低分化3(37.5)5(62.50)
3 讨论
端粒是真核细胞染色体末端物质维持染色体稳定性，端粒过短使细胞进入凋亡或恶变，而端粒酶用于维持端粒的稳定[5]。人类染色体端粒酶RNA(hTERC)是端粒酶活性核心之一，hTERC基因的突变可导致端粒酶活性降低和端粒缩短，hTERC基因扩增肿瘤预后不佳[6]。目前国内外对hTERC与妇科肿瘤方面的研究多见于宫颈癌[7-9]，hTERC扩增与宫颈病变程度及癌变相关，预后不良。在子宫内膜癌中hTERC基因研究极少，国外MaidaSamojedny等研究子宫内膜癌中端粒酶的活性表达明显高于正常子宫内膜[10-11]，国内曹冬焱的研究发现hTERC基因在子宫内膜重度不典型增生组和子宫内膜癌组分别有42.9%和58.8%的异常表达，预示有发生子宫内膜异常增生和癌变的倾向[12]。基于此，为进一步明确hTERC基因在子宫内膜正常表达水平及子宫内膜癌变时该基因表达情况，经本研究发现子宫内膜癌患者较正常子宫内膜组织hTERC基因有扩增趋势，并随着癌细胞分化程度越差hTERC基因阳性率增加，表面子宫内膜恶性病变可能与hTERC表达异常相关，尽管没有统计学意义，但有一定临床意义，我们也将进一步增加样本量继续探讨，为针对端粒酶的子宫内膜癌治疗研究提供一定研究基础。
