张兆祥　孙家明

[摘要]目的：探讨表皮生长因子(EGF)在肥大乳房乳腺组织中的表达及意义。方法：采用免疫组织化学SP法，检测28例肥大乳房和12例正常体积乳房乳腺组织中表皮生长因子(EGF)的表达状况。结果：肥大乳房组28例患者中有19例表皮生长因子(EGF)呈阳性表达（阳性表达率为67.86%），正常体积乳房组12例患者中EGF不表达或呈微弱表达。在本实验中EGF的表达与患者是否有哺乳史及肥大乳房的体积大小没有明显的关系。结论：EGF可能在乳房肥大的发生过程中起着重要作用。

[关键词]表皮生长因子；肥大乳房

[中图分类号]R655.8 Q813.1 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2009）03-0322-03

Expression of epidermal growth factor in breast hypertrophy

ZHANG Zhao-xiang,SUN Jia-ming

(Department of Plastics Surgery,Union Hospital,Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430022,Hubei,China)

Abstract: Objective To investigate the expression of the epidermal growth factor(EGF) in breast hypertrophy. Methods We chose 28 cases of breast hypertrophy and 12 cases of normal breast at random to detect the expression of epidermal growth factor (EGF) in immunohistochemistry. Results EGF was strongly expressed in 67.86% cases of the breast hypertrophy, while only slightly in normal mammary glands. By statistics basis, There was conspicuously significant between the two groups (P<0.05). The expression of EGF was not obviously related with location and volume of breast in the positive cases. Conclusions These results suggested that EGF might play a crucial role in the occurrence of breast hypertrophy.

Key words: epidermal growth factor; breast hypertrophy

表皮生长因子(EGF)是1962年Cohn在小鼠颌下腺中发现的一种重要的生长因子。它可促进细胞增殖分化，细胞外基质形成，并有促进乳腺上皮增生的作用[1-2]，但在乳房肥大发生中的作用如何尚未见报道。本研究通过测定我科自2005年9月～2007年9月间共40例不同乳房发育状态住院患者乳腺组织中EGF的表达，来探讨其与乳房肥大之间的关系。

1材料和方法

1.1 材料

1.1.1 实验组（肥大乳房组）：为我科2005年9月～2007年9月收治的28例乳房肥大患者。选择单侧乳房总量在600ml以上者作为实验组（乳房体积计算为[3]：患者取站立位，测量乳房底部周长（PP），定位乳房下皱襞中点在乳房前表面的投影点P，测量P点至乳房下皱襞的直线距离（FP），乳房体积（ml）＝33.5×PP＋37.7×FP-1305）。术后经病理诊断和病史回顾有下列情况之一者被排除在研究范围之外：①乳腺痛；②乳房触痛或硬结；③月经周期不规律；④2个月内有服用雌激素类药物史；⑤乳头溢液；⑥穿刺针吸或切除组织标本中有囊肿、积液或积乳；⑦有乳癌家族史；⑧一侧乳癌病史； ⑨组织病理学检查有非典型增生。所有病例均回避月经期,为月经周期的第2～3周。本组共28例，年龄18～37岁，平均28.48岁，乳房体积平均值为（752.37±144.20）ml。

1.1.2 对照组（正常发育乳房组）：来自我科2005年9月～2007年9月收治的，经计算乳房体积在250～350ml的患者。其中乳房下垂行单纯乳房固定患者9例，行性别转换乳房切除术的正常女性患者3例。术前征得患者同意，术中取少量正常乳腺组织，共12例, 年龄21～44岁,平均31.17岁。手术同样回避月经期，选自月经周期后的第2～3周。与实验组比较两组间年龄差异无显着性意义。

1.1.3 试剂：免疫组化试剂盒与EGF多克隆抗体均购于武汉博士德生物技术有限公司。

1.2 方法：对巨乳症标本，切取组织均匀部位10～20g，剩余部分送普通病理检查。正常乳房取5～10g均匀组织标本。两种标本标记姓名及诊断后均分别装入-80℃低温冰箱贮存以备最后统一测定。免疫组织化学采用SP法，主要步骤为标本用10%中性缓冲福尔马林固定24h，常规脱水、透明、包埋，制成4μm厚的石蜡切片，切片常规脱蜡至水, 切片入3% H2O2－甲醇液，室温20min，阻断内源性过氧化物酶, 专用微波炉进行抗原修复，PBS缓冲液洗涤，正常山羊血清37℃封闭，滴加兔抗鼠表皮生长因子 IgG4℃冰箱过夜，次日顺序滴加Biotin-羊抗兔IgG及HRP标记链霉亲和素（S-P复合物），DAB显色10～15min，苏木素复染胞核，脱水透明并用中性树胶封片。

1.3 判断标准：细胞膜、细胞质或细胞间质中有棕黄色颗粒状沉淀, 阴性无此沉淀， 计数高倍视野（400×） 的阳性细胞数占总细胞数的比例,> 50%:+ + +，26%～50%: + +，10%～25%:+，<10%:-。

1.4 统计学方法：对于正常乳房组和肥大乳房组的比较采用χ2检验，对于肥大乳房组各因素的进一步比较采用费歇尔精确概率检验，应用SPSS 统计软件进行分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

在12例正常发育乳房组织中EGF蛋白不表达或呈微弱的表达（图1）。在肥大乳房组织中,EGF主要定位于细胞质, 呈棕黄色颗粒均匀分布于细胞质内(图2)。在正常发育乳房组织中EGF蛋白的阳性表达为4/12(33.33%),在肥大乳房组织中阳性表达为19/28(67.86%)，两者EGF蛋白的表达具有显着性差异（P＜0.05)。在肥大乳房组织中，哺乳与未哺乳两组间EGF蛋白的表达无显着性差异 (P＞0.05)；以单侧乳房体积1 000ml为界，两组间EGF蛋白的表达亦无显着性差异 (P＞0.10)。见表1。

3讨论

血循环雌激素水平正常、月经周期规则的妇女其乳房的发育程度及大小因其种族、文化、习俗等的差异也有所不同。但比较公认的标准应以每侧乳房不超过350g为上限。国内大样本的青年女性乳房体积测量结果在250～350g[4]，与国际标准相符。但很多妇女在卵巢功能及其他第二性征完全正常的情况下，双侧乳房可超常发育而形成肥大乳房，甚至巨乳。目前关于肥大乳房形成的原因和机制尚不明了，多数学者认为其病因与雌激素关系密切，可能与局部乳腺组织的雌激素增多有关；也可能与靶细胞对雌激素的敏感性增强有关。对于前者即局部乳腺组织中雌激素水平是否有显着升高，相关的实验研究尚未进一步开展，其原因在于，传统观点认为患者血清中的（正常）雌激素水平等同于局部乳腺组织中的雌激素水平。对于后者主要推测乳腺组织中雌激素受体（ER）含量有所增高,Morimoto[5]、Noczynska[6]、秦映芬[7]、孙家明[8]等人的研究均得到了巨乳症患者乳腺组织中ER含量增高的实验结果，使此种观点得到了较广泛的支持。但是并不是所有肥大乳房组织中都存在ER的过表达，因此我们认为这并不是导致乳房肥大的唯一因素，可能还有其它因素在乳房肥大过程中发挥重要作用。大量研究证明EGF有促进乳腺上皮增生的作用[1-2]，并且在乳腺组织中有类似雌激素的作用，使研究者认识到乳腺组织中EGF的过度表达同样可以导致乳腺肥大。

表皮生长因子(EGF)由50～60个氨基酸残基组成，是人体内分泌的一种重要的生长因子，主要分布于体液、分泌物及组织中，其中唾液腺、十二指肠腺、乳液和尿中EGF含量相对较高，血液中EGF浓度较低，主要存在于血小板内，并在凝血过程中释放。成年动物体液中EGF水平比较稳定，受生理或病理状态变化的影响较小。 EGF具有促进细胞增殖和上皮再生功能, 可增加物质的转运和糖代谢,与多种内分泌腺之间有密切的相互调节关系，可直接或间接影响多种内分泌腺的分泌。EGF通过与其受体EGFR 结合而发挥作用, EGFR家族成员与相应的配体结合活化，引起受体的同源或异源二聚体化，导致受体胞内区酪氨酸激酶区激活，结合一个ATP分子，使二聚体内特异的酪氨酸残基发生自身磷酸化，从而激活众多的下游信号途径来发挥生物学效应,其中包括抑制细胞凋亡来加快细胞增殖和存活[9]。有人用表皮生长因子(EGF)缓释胶囊治疗卵巢切除小鼠，发现小鼠的子宫和阴道上皮出现增生反应，而且这种增生反应可被雌激素拮抗剂ICI164,384所抑制，从而认为EGF有类似雌激素作用，同时也支持EGF信号传导通路与ER的转录激活有关这一结论[10]。Tonelli的实验也证明EGF能刺激用雌二醇/黄体酮预处理过的小鼠乳腺lobulo-alveolar区细胞发生增生,而这种作用不能被血管内皮生长因子和成纤维细胞生长因子所替代[11]。因此说明EGF与乳腺增生的关系具有一定的特异性。

在本实验中，表皮生长因子(EGF)在两组间的表达具有显着性差异（P<0.05），提示肥大乳房患者的局部乳腺组织中有EGF的过度表达，这进一步验证了EGF在肥大乳房的形成过程中起重要作用的设想。实验中同时发现EGF的过表达主要发生于乳腺导管内皮细胞，而在脂肪细胞和间质细胞仅呈少量表达。因此，由于取材部位不完全相同或者肥大乳房的病理类型（脂性肥大与腺性肥大）不同，这就有可能造成所有肥大乳房标本的EGF表达强度不同甚至有的呈阴性表达（本实验中为32.14%）。

为了进一步探讨哺乳因素和乳房肥大程度是否对EGF在乳腺组织中的表达有影响,我们将肥大乳房组中的患者再依据哺乳史的状况分为两组，结果显示哺乳与未哺乳两组间EGF蛋白的表达无显着性差异 (P＞0.05)，在本实验中不能支持哺乳因素对EGF在肥大乳房中的表达具有作用。同时我们将肥大乳房组中的患者依据乳房肥大程度（以单侧乳房体积1 000ml为界）再分为两组，结果显示两组间EGF蛋白的表达亦无显着性差异 (P＞0.10)。表明在本实验中乳房肥大程度对EGF在肥大乳房组织中的表达亦无影响，造成这种结果也有可能是因为在本实验中单侧乳房体积超过1 000ml的例数过少（只有4例），或者是因为取材部位不完全相同（因为在本实验中我们发现同一肥大腺体组织的不同部位EGF蛋白的表达强度是不相同的）。

EGF在乳腺组织中既可以通过激活其受体EGFR，引起受体的同源或异源二聚体化，从而激活众多的下游信号途径来发挥生物学效应,也可以通过间接激活雌激素受体而产生和雌激素类似的效应。而本实验表明EGF在肥大乳腺组织中存在过表达，因此我们认为EGF可能在乳房肥大的发病过程中是一不可缺少的因素。这对我们更深入研究乳房肥大的发病机制及治疗（如使用EGFR家族信号转导阻断剂，如EGFR特异性单克隆性抗体、特异性PTK抑制剂和EGFR激酶抑制剂等）均具有重要的指导意义。

[参考文献]

[1]Taketani Y, Oka T. Possible physiological role of epidermal growth factor in thedevelopment of the mouse mammary gland during pregnancy[J]. FEBS Lett,1983, 152(2):256-261.

[2]Taketani Y,Oka T . Biological action of epidermal growth factor and its functional receptors in normal mammary epithelial cells[J].Proc Natl Acad Sci U.S.A.，1983,80(9):2647-2650.

[3]Sigurdson LJ, Kirkland SA. Breast volume determination in breast hypertrophy:anaccurate method using two anthropomorphic measurements[J]. Plast Reconstr Surg,2006,118(2): 313-320.

[4]乔群,凌诒淳,周刚,等.中国125名青年女性乳房体积测量[J].中华整形烧伤外科杂志，1991,7(1)：1-4.

[5]Morimoto T, Komaki K, Mori T, et al. Juvenile gigantomastia: report of a case[J]. Surg Today,1993,23 (3): 260-264.

6]Noczynska A, Wasikowa R, Myczkowski T. Hypersensitivity of estrogen receptors as a cause of gigantomasty in two girls[J]. Pol Merkuriusz Lek,2001,11 (66): 507-509.

[7]秦映芬，沈寒蕾，黄 松,等.巨乳症的临床与病理学观察[J]. 临床与实验病理学杂志，2004,20(3):292-294.

[8]孙家明,乔 群,戚可名.肥大乳房和小乳房乳腺组织中雌激素受体的表达[J]. 中华整形外科杂志,2004,20(6):416-418.

[9]WangJF, Park IW, Groopman JE. Stromal cell-derived factorlalpha stimulates tyrosinephosphorylation of multiple focal adhesion tyrosine proteins and induces migration of hematopoietic progenitor cells; roles of phosphoinositide-3 kinase and protein kinase C[J]. Blood,2000,95(8):2505-2513.

[10]Ignar-Trowbridge DM,Teng CT. Peptide growth factors elicit estrogen receptor-dependent transcriptional activation of an estrogen-responsive element[J]. Mol Endocrinol,1993,7(8):992-998.

[11]Tonelli QJ, Sorof S. Epidermal growth factor requirement for development of cultured mammary gland[J]. Nature,1980, 285(5762):250-252.

[收稿日期]2008-11-15[修回日期]2009-01-25

编辑/张惠娟