樊丹君，李晨怡，陈 进，叶子青
浙江医院干部保健科，杭州 310013
脑梗死是一种受遗传因素和环境因素共同影响的具有高发病率、高致残率、高医疗费的常见老年病之一。人类一些基因多态性与脑梗死的遗传易感性相关[1-4]。已有研究显示花生四烯酸细胞色素P450(cytochrome P450 proteins，CYP)代谢基因如EPHX2 G806A可能与脑梗死的发生相关[2]，而关于另一重要参与花生四烯酸代谢的CYP2C19基因与脑梗死研究较少。本研究采用基因芯片技术对本院收集的老年人 CYP2C19 基因rs4244285、rs4986893两个单核苷酸多态位点进行基因分型，以探讨CYP2C19基因多态性与老年人脑梗死的相关性，并为临床提供个体化用药。
对象和方法
对象脑梗死组入组标准：选取2012年1月至2016年1月入住浙江医院符合中华医学神经病学分会脑血管学组制定新发的急性缺血性脑卒中患者，病因学为动脉粥样硬化血栓型和小动脉病变型，其中男50例、女22例，年龄76～96岁，平均(84.48±4.02)岁。对照组入组标准：选取同期年龄大于65岁，与病例组年龄、性别匹配的，经病史、体格检查、头颅CT和/或头颅核磁共振均无脑梗死、冠心病的住院体检者，其中男56例、女21例，年龄65～92岁，平均(83.96±5.09)岁。排除标准：既往有心房颤动、肿瘤、严重肝肾疾病、严重感染等病史。
临床资料评估所有研究对象传统脑血管危险因素：性别、年龄、体质量指数(body mass index，BMI)、吸烟史、空腹血糖、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、三酰甘油、C反应蛋白、同型半胱氨酸、血压(24 h动态血压中平均收缩压、平均舒张压)。
CYP2C19基因检测采集空腹外周静脉血2 ml，EDTA抗凝，分离血浆，按照上海百傲科技有限公司生产的试剂盒使用说明，提取样本DNA、PCR扩增、杂交显色，应用Baio生物芯片识读仪进行图像扫描、数据分析，输出检测结果。
结 果
临床资料两组人群年龄、性别、BMI、吸烟率、收缩压、舒张压、血糖、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、三酰甘油、同型半胱氨酸、C反应蛋白等差异均无统计学意义(P>0.05)(表1)。
CYP2C19基因多态性采用拟合优度检验脑梗死组(χ2=6.138，P=0.189)和对照组(χ2=4.684，P=0.321)均符合Hardy-Weinberg平衡，即入组研究对象有群体代表性。两组rs4244285 GG型(χ2=4.766，P=0.029)、A等位基因分布(χ2=4.695，P=0.030)差异有统计学意义，但两组GA型、AA型频率差异无统计学意义(P>0.05)。而rs4986893 不同基因型和等位基因分布差异均无统计学意义(P>0.05)(表2)。
CYP2C19基因多态性与脑梗死的相关性脑梗死作为因变量，Logistics回归分析调整性别、年龄、BMI、吸烟史、收缩压、舒张压、血糖等，分析患病风险：rs4244285多态位点加性模型(AA比GG：OR=2.564，95%CI=1.181～5.566，P=0.017)、显性模型(AA/AG比GG：OR=2.763，95%CI=1.343～5.685，P=0.006)、隐性模型(AA比AG/GG：OR=2.331，95%CI=0.788～6.889，P=0.126)提示携带rs424485 A等位基因的人群在多态位点加性模型及显性模型中患脑梗死风险增加(P<0.05)，隐性模型下患病风险差异无统计学意义(P>0.05)。rs4986893多态位点显性模型(AA/AG比GG：OR=1.773，95%CI=0.765～4.108，P=0.182)，因两组中均未检测到rs4986893 AA，无法分析加性模型、隐性模型的患病风险。
表1 两组一般资料比较Table 1 General data of two groups
1 mmHg=0.133 kPa
表2 两组CYP2C19等位基因及基因型频数比较[n(%)]Table 2 Frequencies of CYP2C19 polymorphisms in two groups[n(%)]
-：表示未检测到该基因型
-：rs4986893 AA genotype was not detected
讨 论
CYP2C19是细胞色素P450家族里CYP2亚家族中的重要药物代谢基因之一，定位于10号染色体q24区，包含9个外显子和5个内含子，编码490个氨基酸。rs4244285、rs4986893两个单核苷酸多态位点是东亚人群最常见的突变点，这两个单核苷酸多态位点碱基发生G→A突变产生的终止密码子使蛋白合成提前终止，从而降低了该酶活性。
本研究脑梗死组与对照组rs4244285等位基因频率A、G分布差异有统计学意义，与Gu等[5]研究结果一致。脑梗死组GG型频率显着低于对照组，与Gu等[5]研究结果一致。脑梗死组rs4244285 GA、AA型频率与对照组比较差异无统计学意义，而Gu等[5]研究报道脑梗死rs4244285 GA、AA基因型显着高于对照组，可能不同地区CYP2C19基因分布不同。两组rs4986893基因型、等位基因差异均无统计学意义，与Gu等[5]研究不一致，可增加样本量进一步研究。本研究Logistic回归分析调整年龄、性别、BMI、吸烟、血压等危险因素后，rs4244285位点携带A等位基因患脑梗死风险增加，提示CYP2C19基因多态性可增加老年人患脑梗死的风险，均与Gu等[5]研究相似。目前CYP2C19基因多态性影响老年脑梗死的具体机制尚不清楚，可能与花生四烯酸代谢相关。花生四烯酸经细胞色素P450(如CYP2C19)途径代谢后的主要产物为表氧二十碳三烯酸(epoxyeicosatrienoic acid，EET)。EET是一种内皮源性超极化因子，通过激活钾离子、钙离子通道，使内皮下的平滑肌细胞产生超极化而产生扩血管作用，同时EET还通过转录因子、核因子-κB和κB激酶抑制白细胞黏附到血管壁，因此EET具有抗高血压、抗炎、抗凝、抗动脉粥样硬化作用，而CYP2C19功能缺失基因型使其编码的酶活性下降，经其代谢的EET水平随之下降，导致炎症增加、微循环障碍等，从而增加心脑血管病的发生率[6-7]。
氯吡格雷是老年人脑梗死常用的二级预防用药，而CYP2C19是将其转化为有活性物质的关键药物代谢酶。已有研究表明携带CYP2C19*2(rs4244285 681A>G)和/或CYP2C19*3(rs4986893 636A>G)的患者因基因突变导致功能下降，从而降低有效药物浓度，以致发生氯吡格雷抵抗不能达到满意的抗血小板聚集[8-9]。因此对于需氯吡格雷治疗的脑梗死或服用氯吡格雷期间仍发生脑梗死者，如果有条件建议行基因检测。2010年美国食品药品监督管理局黑框警告对于携带CYP2C19*2和/或CYP2C19*3并经证实氯吡格雷代谢不良的患者，建议加大氯吡格雷的剂量或改用其他抗血小板药物。
综上，本研究发现CYP2C19基因多态性与老年人脑梗死患病风险增加有关，有待今后进行大样本、多中心和前瞻性研究进一步验证。
