江晓红 袁军 付亚军
Smad4在卵巢粘液腺癌组织中的表达及临床意义
江晓红 袁军 付亚军
目的 探讨Smad4 在卵巢粘液腺癌组织中的表达及意义。方法 采用免疫组织化学SP法，对20例卵巢原发交界性粘液性囊腺瘤、20例卵巢原发粘液腺癌和20例卵巢转移性粘液腺癌组织进行Smad 表达水平研究。结果 Smad4蛋白在原发腺癌及交界性粘液性囊腺瘤组织中的阳性表达高于转移性粘液腺癌组织，差异有统计学意义（P＜0.01）；Smad4蛋白在原发腺癌及交界性粘液性囊腺瘤组织中的阳性表达无明显差异。结论 Smad4作为一种新的检测抗体，在鉴别卵巢原发性粘液腺癌和转移性粘液腺癌中起了重要的作用。
卵巢肿瘤 粘液腺癌 原发性 转移性
卵巢粘液腺癌是常见的卵巢上皮性肿瘤，早期诊断较困难，确诊时多属晚期，确诊后生存率低，是预后最差的恶性肿瘤之一。卵巢发生的粘液腺癌中，有原发性的，也有部分是转移性的（大多数是胃肠道转移来源），这两者的鉴别大多可以通过手术探查而证实，但对于隐匿的胃肠道腺癌转移后的鉴别比较困难，本实验以常规甲醛固定，石蜡包埋的卵巢原发性粘液腺癌及转移性粘液腺癌组织为材料，用SP免疫组织化学方法检测Smad 4表达情况，从而为Smad4 蛋白对卵巢粘液腺癌鉴别是否原发提供强有力地证据。
1 临床资料
1.1 一般资料 选择本院2006年1月至2014年5月经手术和病理学确诊的卵巢粘液性肿瘤标本60例。年龄36～71岁，平均53.3岁。其中原发性粘液腺癌20例（A组）、卵巢原发交界性粘液性囊腺瘤20例（B组）、转移性粘液腺癌20例（C组）（胃肠道来源18例，胰腺来源2例）。所有病例经资深病理学专家结合临床资料确诊。
1.2 实验材料 鼠抗人Smad4单克隆抗体（武汉博士德生物工程有限公司）、超敏免疫组织化学染色试剂盒和DAB染色剂（福州迈新生物技术有限公司）。
1.3 实验方法 所有标本均经4 %甲醛溶液固定，取材，石蜡包埋，连续3～5 mm 切片。采用免疫组织化学SP 法检测卵巢原发性粘液腺癌和转移性粘液腺癌组织中Smad4的表达情况。步骤按说明书操作。Smad4采用EDTA（pH 9.0）水煮高温修复抗原DAB显色，苏木精对比染色。用已知阳性片作为阳性对照，用PBS代替第一抗体作为阴性对照。
1.4 结果判定 Smad4主要表达于细胞质，部分表达于细胞核。Smad4表达根据Pizer［1］的综合判定标准：（1）阳性细胞百分率即染色范围：不显色为0分。阳性细胞＜10%为1分。11%～50%为2分。51%～80%为3分。＞80%为4分。（2）阳性信号强度即染色强度：不染色为0分。淡黄色为1分。棕黄色为2分。棕褐色为3分。病理切片染色结果，均由＞2名高年资病理医生共同完成。两项指标相加后综合评分：阴性（＜4分）；阳性（≥4分）。
1.5 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件。计数资料采用χ2检验。P＜0.01为差异有统计学意义。
2 结果
Smad4表达在卵巢交界性粘液性囊腺瘤、卵巢原发性粘液腺癌组织和转移性粘液腺癌组中的比较差异有显着性（χ2=51.450，P＜0.01）；Smad4在卵巢交界性粘液性囊腺瘤、卵巢原发性粘液腺癌细胞和（或）胞核中可见棕黄色颗粒，阳性表达率分别为95%（19/20）、100.0%（20/20）（见图1、2），在卵巢转移性粘液腺癌细胞胞质、胞核中呈阴性，阳性表达率5.0%（1/20）（见图3）。Smad 4在卵巢转移性粘液腺癌组织中的表达低于在原发性粘液腺癌组织中的表达及卵巢交界性粘液性囊腺瘤组织中的表达，差异均有显着性（P＜0.01）。Smad 4在卵巢原发粘液腺癌组织与原发性交界性粘液性囊腺瘤中表达差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。
图1 A组Smad4（SP×100）
图2 B组Smad4（SP×100）
图3 C组Smad4（SP×100）
表1 Smad4在卵巢粘液性肿瘤中的表达（n）
3 讨论
Smad4又称DPC4，最初作为抑癌基因从胰腺癌中筛选出来。Smad家族目前已确定有9名成员，根据结构和功能的不同，可将其分为受体激活型Smad、通用型Smad 和抑制型Smad。Smad4属于通用型Smad。在Smad家族中，Smad4与肿瘤的关系尤为密切［2］。Smad4功能失活或表达低下可能影响TGF-β的信号转导并参与肿瘤的形成［3］。
Smad4表达缺失或突变使细胞逃脱TGF-β的抑制作用，促进了癌前病变的发生及其向癌的转化，并影响了癌细胞的生物学行为。Smad4作为肿瘤抑制基因，最初是在40% ～50% 的胰腺癌中发现有缺失和突变。近期的研究发现，多数胰腺癌存在Smad4基因的缺失或突变［4］，而Smad4的失活也可见于胃癌、结直肠癌等［5］，张朋彬等［6］研究发现Smad4蛋白在正常胃黏膜腺体主要表达于细胞浆中，以胃腺体的体部和底部最为明显。在肠化胃黏膜及不典型增生组织，Smad4蛋白的表达主要位于细胞浆中，但在胞浆中分布不均匀，与正常胃黏膜相比，其表达未见明显异常（P＞0.05）。
A Leng等［7］报道，胃癌组织Smad4蛋白的表达明显低于癌旁组织，并且Smad4蛋白表达与胃癌组织分化程度有关，分化程度低的胃癌组织Smad4的表达明显低于分化程度高的胃癌组织。
卵巢是转移性肿瘤的肥沃土囊，不仅是因为卵巢具有丰富的血管，同时也与卵巢的自身解剖结构有着紧密的关系，腹腔内脏的恶性肿瘤极易通过播散的方式从卵巢表面排卵的小裂口进入卵巢实质，因此卵巢是女性生殖系统中转移性肿瘤最好发的部位。对于卵巢转移性恶性肿瘤的来源，目前已经达成共识，以胃肠道、乳腺及子宫最为多见，三者之和占卵巢转移性恶性肿瘤的＞90%，其中又以胃癌转移到卵巢（Krukenberg tumours）最为常见。对于卵巢原发性粘液腺癌与转移性的腺癌，β-catenin、CA125、HAM56、MUC2、CEA、CK7、CK20等均考虑并加入到卵巢原发及转移性肿瘤的鉴别诊断工作中，但是任何一个单一的指标并不可靠，不宜单独使用。从形态学角度鉴别两者非常困难，但是现有的免疫组化指标，无法满足日常工作的需要，找到肿瘤的原发部位，对进一步临床治疗具有重要的指导意义。为了解决这一工作难题，病理工作者们一直在积极的研究与探讨，随着Smad4这一新肿瘤抑制基因的发现，提供了新的研究思路。
本次实验应用免疫组化SP法检测了20例卵巢原发性交界性粘液性囊腺瘤、20例卵巢原发性粘液腺癌组织和20例转移性粘液腺癌组织中的Smad4。结果显示Smad4在原发交界性粘液性囊腺瘤组织阳性率为95%、原发性粘液腺癌组织阳性率为100 %，在转移性粘液腺癌中的阳性率为5.0%，在转移性粘液性腺癌组的阳性率明显低于原发性粘液腺癌组及原发性交界性粘液性囊腺瘤组，差异有显着性（P＜0.01）。推测Smad4作为一种抑癌基因，其在卵巢原发性粘液性肿瘤中完全表达，因此其阴性表达有意义（可以排除卵巢原发的可能性），此应用在卵巢原发性粘液腺癌与转移性粘液腺癌的鉴别中可能起非常重要的作用并具有广泛而深远的研究价值。对于大样本研究及长远的应用价值，Smad4与肿瘤的分化、大小、浸润的程度以及预后等有无相关性，以及其在卵巢原发性粘液性肿瘤中的作用机制还有待于进一步的临床及实验研究。
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6 张朋彬，凌贤龙，郭红.Smad4蛋白在胃癌前病变中表达的研究.激光杂志，2010，31（1）：97.
7 A Leng，T Liu，Y He，et a1.Smad4/Smad7 ba1ance：a ro1e of tumorigenesis in gastric cancer.Exp Mo1 Patho1，2009，87（1）：48～53.
314051 浙江省嘉兴市妇幼保健院
