孙海琼 章晓燕 杨苗芬
流行性感冒是一种由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，也简称为流感，其感染症状主要表现为咽痛、发热、流涕、头痛等［1］。流感病毒为正粘病毒科，根据病毒核蛋白抗原不同可分为甲（A）、乙（B）、丙（C）3 型，其中甲型流感病毒最容易发生变异，是人类流感的主要病原体，具有流行性广、传染性强的特点，成为近年来影响公共健康的重大危险因素之一［2-4］。甲型流感的治疗主要以抗病毒治疗为主，感染初期为治疗的最佳时期。因此早期诊断对于甲型流感患者的治疗具有重要作用［5-6］。VCS 技术是美国贝克曼库尔特公司的一项专利技术，其通过利用低频电流分析细胞体积（volume）、高频电磁探针检测细胞核及核质比特性（conductivity）和激光扫描细胞颗粒信息（scatter）。其独特的三维技术广泛应用于白细胞分类和提供多项白细胞VCS 相关参数。该参数在多种疾病的辅助诊断具有重要价值［7］。本文探讨白细胞VCS 参数在甲型流感病毒感染中的诊断价值。
1 资料与方法
1.1 临床资料 选取2019 年2 月至3 月本院经甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法，杭州创新生物检控技术有限公司）检测结果为阳性的患者101例为甲流组，其中男45 例，女56 例；年龄18～66 岁，平均年龄（28.52±10.20）岁。同期完全随机选取本院无症状健康体检者101 例为对照组，其中男55 例，女46 例；年龄18～65 岁，平均年龄（29.75±9.61）岁。两组年龄、性别差异无统计学意义（P＞0.05）。
1.2 仪器与试剂 Beckman Coulter DxH800 型血液分析仪及其配套试剂、校准物。按仪器说明书进行校准、质量控制、保养及维护。每日进行室内质量控制评价，确保检测时仪器状态稳定。
1.3 方法 （1）标本采集：首次就诊未治疗的成人患者及成人健康体检者的静脉血2.0ml 于EDTA-K2 紫色抗凝管中，充分混匀，2h 内上机完成检测分析。利用电阻抗原理对白细胞进行计数，用高、低频电流和激光技术对白细胞进行分类，并进行白细胞VCS 参数分析。（2）检测指标：收集中性粒细胞（NE）、淋巴细胞（LY）和单核细胞（MO）的体积（V）、电导率（C）和5 个角度散射（S）参数的平均值（MN），共21 个参数。其中光散射参数为：中位角光散射（MALS）、高中位角光散射（UMALS）、低中位角光散射（LMALS）、低角度光散射（LALS）和轴向光吸收（AL2）。其中体积反映细胞大小，电导率反映核质比，光散射参数反映细胞的复杂性、颗粒度和细胞核结构，但AL2 细胞的大小是根据吸收光来确定的［8］。
1.4 统计学方法 采用SPSS 20.0 统计学软件。采用受试者工作特征曲线（ROC）分析VCS 参数在甲型流感病毒感染辅助诊断中的价值，以曲线下面积（AUC）分析检测指标的诊断价值，以Youden 指数最高的结果为截断点，对样本进行预测，并与实际诊断结果进行对比，计算阳性预测值及阴性预测值。正态分布计量资料以（±s）表示；非正态分布资料以［M（Q1，Q3）］表示。两组间比较采用Mann-Whitney U 检验。以P＜0.05 为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组一般资料、血常规分类计数比较 见表1。
表1 两组一般资料、血常规分类计数比较［M（Q1，Q3）］
2.2 VCS 参数比较 见表2～4。
2.3 ROC 曲线分析结果 （1）中性粒细胞ROC 曲线分析结果：从对照组中识别甲流感染的ROC 曲线表明，MN-V-NE（AUC 0.90，在截断点150.5 处的灵敏度84.16%，特异性80.2%，阳性预测值80.95%，阴性预测值83.51%）和MN-UMALS-NE（AUC 0.96，在截断点132.5 处灵敏度93.07%，特异性89.11%，阳性预测值89.52%，阴性预测值92.78%）具有高的诊断价值及良好的敏感性和特异性，见表5 和图1。（2）淋巴细胞ROC 曲线分析结果：从对照组中识别甲流感染的ROC 曲线表明，MN-MALS-LY（AUC 0.99，在截断点54.5 处的灵敏度95.05%，特异性99.01%，阳性预测值98.97%，阴性预测值95.24%）、MN-UMALSLY（AUC 0.99，在截断点48.5 处的灵敏度96.04%，特异性95.05%，阳性预测值95.10%，阴性预测值96.00%）和MN-LMALS-LY（AUC 0.99，在截断点49.5 处的灵敏度97.03%，特异性93.07%，阳性预测值93.33%，阴性预测值96.91%）具有很高的诊断价值及优秀的敏感性和特异性，见表6 和图2。（3）单核细胞ROC 曲线分析结果：从对照组中识别甲流感染的ROC 曲线表明，MN-V-MO（AUC 0.98，在截断点173.5 处的灵敏度95.05%，特异性93.07%，阳性预测值93.20%，阴性预测值94.95%）、MN-MALS-MO（AUC 1，在截断点73.5 处的灵敏度100.00%，特异性99.01%，阳性预测值99.02%，阴性预测值100.00%）、MN-UMALS-MO（AUC 1，在截断点83.5 处的灵敏度99.01%，特异性98.02%，阳性预测值98.02%，阴性预测值99.00%）和MN-LMALS-MO（AUC 1，在截断点60.5 处的灵敏度99.01%，特异性98.02%，阳性预测值98.04%，阴性预测值99.00%）具有优秀的诊断价值及优秀的敏感性和特异性，见表7 和图3。
表2 两组中性粒细胞的VCS 参数情况
表3 两组淋巴细胞的VCS参数情况
表4 两组单核细胞的VCS参数情况
图1 中性粒细胞VCS参数的ROC曲线
图2 淋巴细胞VCS参数的ROC曲线
图3 单核细胞VCS参数的ROC曲线
表5 中性粒细胞VCS参数诊断甲型流感病毒染的ROC曲线分析（%）
表6 淋巴细胞VCS参数诊断甲型流感病毒染的ROC曲线分析（%）
表7 单核细胞VCS参数诊断甲型流感病毒染的ROC曲线分析（%）
3 讨论
甲型流感初起的临床症状通常为咽痛、发热、流涕、头痛等，与普通呼吸道感染症状相似，易导致诊疗的延误。临床医师会通过血常规来初步辨别细菌感染和病毒感染。现有研究发现甲型流感病毒感染初期患者的血常规呈现一种不典型变化，即表现为WBC和NE%呈正常或升高，而LY%呈正常或降低［9］。造成这种不典型变化的原因，有学者认为是甲型流感病毒抑制机体细胞免疫功能，诱导淋巴细胞凋亡，导致LY%降低；而甲型流感早期易合并细菌感染，导致WBC 和NE%呈正常或升高［10］。本资料中甲型流感病毒感染初期患者的血常规表现为WBC 计数以正常（占91.09%的甲型流感患者）为主，NE%和MO%以正常及升高（分别占55.44%、44.55%；66.34%的甲型流感患者）为主，LY%则以降低（占80.20%的甲型流感患者）为主。由此可见，该种不典型血常规结果对甲型流感诊断具有一定参考价值。但因甲型流感病毒感染患者的血常规结果多变，血常规报告指标如WBC计数、NE%、LY%和MO%等用于甲型流感病毒的诊断敏感度还不够，且具有一定局限性。VCS 技术的检测原理即通过低频电流分析体积，通过高频传导分析胞核和核质比等，通过激光散射分析胞质内颗粒结构特征，从而进行综合评价分析准确对白细胞进行分类［11-13］。Beckman Coulter DxH800 全自动分析仪检测结果表明，甲流组与对照组间除MN-LMALS-NE（P＞0.05）外，其余参数差异均有统计学意义（P＜0.05），其中淋巴细胞和单核细胞的参数变化最大。甲流组淋巴细胞中除MN-C-LY 略微降低外，其余参数均升高，其中MN-MALS-LY、MN-UMALS-LY、MN-LMALS-LY 三个角度的光散射升高显着。即表明甲型流感患者淋巴细胞的核质比略微变小，染色质致密度升高和（或）细胞质内颗粒变粗、变多，且研究中甲流组淋巴细胞的体积虽然变大但其仍然处于正常范围。故研究中淋巴细胞VCS 参数的变化，符合甲型流感病毒诱导淋巴细胞凋亡的观点。而与对照组比较，甲流组单核细胞除MN-LALS-MO 参数降低外，其余参数均显着升高。表明单核细胞体积变大，核质比变大，胞浆内结构变复杂。推测淋巴细胞的凋亡激活单核巨噬系统对凋亡的细胞进行吞噬清除，MO%的升高也与此相符。至于中性粒细胞，与对照组相比，甲流组MN-V-NE 升高，而MN-C-NE 降低，表明中性粒细胞的体积变大、而核质比减少，推测这种变化可能是由于部分甲型流感患者在感染初期合并了细菌性感染而导致中性粒细胞激活，但甲流组的中性粒细胞还是以成熟中性粒细胞为主。
本资料结果表明，白细胞VCS 参数在甲型流感的诊断中具有较高的灵敏度和特异性，其中淋巴细胞和单核细胞的MN-MALS、MN-UMALS 和MN-LMALS三个参数的AUC 高＞0.99，具有较高的诊断价值，且计算所得的灵敏度和特异性均＞90%。可见白细胞VCS 参数对于辅助诊断甲型流感中具有很大的潜在价值，可帮助临床医师对感染患者及时进行治疗。
