郭志成,李 丽

急性脑缺血,又名脑卒中,是以急性起病,神经功能缺损至少持续24 h为特征的综合征,系因脑循环障碍导致中枢神经系统局部受累。三七总苷是采用中药三七的主要药用成分制成的中药注射液,具有改善微循环、抑制血小板聚集作用[1]。并对缺血再灌注损伤脑组织具有保护作用[2]。灯盏花素注射液是灯盏细辛提取物。现已鉴定灯盏细辛的主要化学成分有黄酮、吡喃酮、倍半萜和咖啡酸酯等10余种化合物[3]。多项研究表明灯盏细辛能减轻缺血再灌注脑损伤程度,具有显着的脑保护作用[4]。在临床对单味药的研究,运用较多,不仅用于脑血管系统,也已运用于其他系统,但对二药联用治疗急性脑梗死,其实验、临床报道甚少。本研究运用二药辛、苦、温结合,观察使用后对细胞间黏附分子(ICAM-1)的影响,探讨二药有机结合后其更强的袪除痰瘀阻络病理机制。

1 材料与方法

1.1 药物与试剂 三七总苷粉剂(络泰):昆明制药集团股份有限公司,批号Z20026438;灯盏花素粉剂:衡阳恒生制药有限公司,批号:2002ZFB0390;ICAM试剂盒,购自武汉博士德生物工程有限公司。

1.2 动物 Waster大鼠,体重220 g～280 g,由山西医科大学生理实验室提供。

1.3 分组及给药 将50只大鼠随机分为假手术组10只和实验组40只,另将40只大鼠造模成功后随机分为模型组、灯盏花素组、三七总苷组和中药联用组,每组10只。假手术组:完成全部操作,只做颈总动脉和颈内动脉分离。模型组:造模成功后,术后2 h开始腹腔注射生理盐水 1 mL,一日1次,连用 3 d。灯盏花素组:16 mg/kg,稀释至1 mL,腹腔注射,每日1次,连用 3 d。三七总苷组:80 mg/kg,稀释至 1 mL,腹腔注射,每日1次,连用3 d。中药联用组:将上述灯盏花素和三七总苷剂量各半,共1 mL,分别腹腔注射,每日1次,连用3 d。

1.4 模型制作 大脑中动脉线栓法模型制备:参照Zea Longa[5]的方法,稍加改进。大鼠以10%的水合氯醛0.35 mL/100 g腹腔注射,仰卧固定,颈正中切口,依次暴露右侧颈总,颈内和颈外动脉,结扎颈总动脉,颈外动脉,于颈总动脉分叉下方煎一切口,将预先用酒精灯烧成圆头的尼龙渔线(长4 cm,直径0.2 mm)置于颈内动脉18 mm到有轻微阻力感为止,扎紧动脉线端,缝合皮肤。假手术组大鼠麻醉后,仅暴露颈内外动脉分支并分离,不闭塞大脑中动脉。术中、术后室温控制24℃～25℃,大鼠体温维持在36.5℃～37.5℃。麻醉清醒(约术后2 h)对大鼠神经缺损进行评分,如评分在2分或2分以上者则认为模型成功并纳入实验。

1.5 检测指标及方法

1.5.1 大鼠神经缺损评分 参照Bederson 10分法[6]标准进行评分:①提起鼠尾,观察前肢有无异常表现。凡有前肢内收,内旋者,视其轻重评分(1分～3分),如果躯体向左侧旋转,评为4分。②将大鼠置于金属网上,向后轻提鼠尾,观察大鼠两前肢张力,根据左前肢张力下降程度,评为0分～2分。③将大鼠置于光滑平面上观察侧向推动阻力,根据向左侧推挡阻力下降程度评分(0分～2分)。④大鼠出现左眼上睑下垂,左眼分泌物增多评为2分。动脉缺血72 h再评分,其结果作为评价疗效的指标之一。

1.5.2 血清中ICAM-1含量测定 每组于 6 h、24 h、72 h各时间点颈静脉取血,取血清低温保存用ELISA法测定值,方法详见ICAM-1试剂盒。

1.5.3 脑梗死体积测定 大鼠脑梗死面积百分比计算:末次评分采血完毕后,每组随机取5只大鼠断头取脑,去除小脑后,将大脑平均冠状切片分 5片,放于TTC溶液中,37℃温育10 min～15min,脑组织切片梗死区不着色,正常脑组织染成红色,用生理盐水冲洗后摄影,在照片上用透明坐标纸测量梗死截面积和全脑截面积,根据切片厚度计算出总的梗死灶与对侧总体积百分比。

1.6 统计学处理 所有数据用SPSS 11.5统计分析软件进行分析,数据用均数±标准差(±s)表示,组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)。P＜0.05为有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组大鼠血清值 ICAM-1含量比较(见表1) 模型组ICAM-1值随脑梗死时间延长,相应值渐升高,中药各组随时间延长,ICAM-1值逐渐下降。与模型组比,中药各组 ICAM-1值下降(P＜0.05),中药联用组比单用中药组下降更明显(P＜0.05)。

表1 各组大鼠血清值 ICAM-1含量比较(±s) ng/mL

表1 各组大鼠血清值 ICAM-1含量比较(±s) ng/mL

组别 n 6 h 24 h 72 h假手术组 10 14.94±0.67 15.69±0.61 17.10±0.74模型组 10 36.55±0.791) 38.92±0.541) 43.89±0.821)灯盏花素组 10 11.99±0.422) 10.72±0.682) 8.98±0.492)三七总苷组 10 11.56±0.292) 9.23±0.412) 8.16±0.532)中药联用组 10 8.57±0.472)3) 6.78±0.352)3) 6.30±0.372)3)与假手术组比较,1)P＜0.05;与模型组比较,2)P＜0.05;与灯盏花素组和三七总苷组比较,3)P＜0.05

2.2 各组大脑中动脉栓塞神经功能缺损评分比较(见表2)

表2 各组大脑中动脉栓塞神经功能缺损评分比较(±s) 分

表2 各组大脑中动脉栓塞神经功能缺损评分比较(±s) 分

组别 n 神经功能缺损评分模型组 10 7.56±0.70灯盏花素组 10 5.48±0.631)三七总苷组 10 5.46±0.601)中药联用组 10 4.70±0.491)2)与模型组比较,1)P＜0.05;与灯盏花素组和三七总苷组比较,2)P＜0.05

2.3 各组大鼠脑梗死面积的测定比较(见表3)

表3 各组大鼠脑梗死体积的影响(±s) %

表3 各组大鼠脑梗死体积的影响(±s) %

组别 n 脑梗死体积模型组 5 20.230±6.170灯盏花素组 5 12.236±9.3651)三七总苷组 5 11.249±10.1491)中药联用组 5 10.314±9.3061)2)与模型组比较,1)P＜0.05;与灯盏花素组和三七总苷组比较,2)P＜0.05

3 讨 论

急性脑梗死系因脑循环部分或一侧循环障碍导致的中枢神经系统局部受累。在绝大多数病例中,颈部和脑底部大的颅外动脉的粥样硬化是脑梗死的基本病因。动脉粥样硬化的发生机制尚未完全明了,但内皮细胞的损伤及所引起的功能障碍被认为是早期阶段[7],脑缺血损伤后机制是一个复杂的病理、生理过程,脑血流中断造成局部脑组织的缺血、缺氧,造成脑组织的能量障碍,同时又存在着血流对脑组织的再灌注,这些会使脑组织细胞产生损伤级联反应。在此级联反应中有许多不同的机制,其中局部炎症因子,趋化因子和黏附分子等表达上调构成了缺血损伤的基础,起始因素虽是炎症因子,但黏附分子在炎症因子、内皮细胞、血小板及损伤区均起到了关键作用。ICAM-1又称CD54,属于免疫球蛋白超家族中的一员,它介导白细胞、血小板和血管内皮细胞之间的黏附、聚集、促使血栓形成,加重坏死区炎性反应,使病情恶化。在白介素(IL-1)、肿瘤坏死因子等刺激下表达急剧增加,与脑梗死发生的病程密切相关,它的浓度不仅反应白细胞参与损伤的程度,而且与梗死面积明显相关,而与病变部位无明显关系[8]。原因是梗死面积越大,受累血管的数量越多,微血管内皮细胞受到刺激表达的ICAM-1越多,因此,动态观察血清ICAM-1的水平有助于利断脑梗死的发展趋势。故ICAM-1在脑梗死急性期炎性反应中起重要作用。本研究观察到随着大鼠脑梗死的病情发展,ICAM-1浓度增高,随着用药改善脑供血,ICAM-1浓度逐渐降低。

急性脑梗死属于中医“中风”范畴,其病因主要是积损正虚,气血亏虚,复因情志、饮食、劳逸失度,使脏腑功能失调,气血升降异常,痰湿内生,肝风内动,挟痰挟火,横窜经络,上蒙清窍致中风发生,因起病突然,变化多端,症状多变,类似中医病因中的“风邪”特点,加之急性期以痰瘀阻络为主。本着“急则治标”的原则,为尽早恢复缺血脑组织的血供,故笔者提出以辛温祛风化痰通络药物为主,起到疏通经络,祛除痰瘀,使气血复健。因祛风药物具有辛、散、温、通、窜、透等多种特性,能发挥开郁畅气,发散祛邪,燥湿化痰,通络开窍,化瘀通络等作用[9]。灯盏细辛是菊科短葶飞蓬的干燥全草,盛产于云南。据《本草纲目》记载:灯盏花性辛,微温,具有散寒解表、活血舒筋、祛风除湿等功效,用于心痛,风湿痹痛,瘫痪等。其有效成分是黄酮类物质,具有扩血管,改善微循环,增加组织灌注,改善血液流变性及改善脂质代谢等作用,另有消除氧自由基,对抗脂质过氧化,抑制炎症介质的形成和释放,防治神经元的缺血性损伤。三七总苷是三七的主要提取物,三七为五加科人参属植物,是中医治疗各种血症和血瘀的“圣药”。李时珍《本草纲目》记载:三七能治一切血症。味甘、性温、微苦,归肝胃经,具有络血化瘀,止血定痛等功效。现代研究证明:三七含有24种三七皂苷和其他生物活性物质,在血液系统、心血管系统、神经系统、免疫系统、代谢系统及抗炎、抗衰老等方面均显示了强大的生理活性,被誉为“适应原样药物”。动物实验表明三七注射液对大鼠急性缺血缺氧后的脑细胞有明显的保护作用[10]。本实验将灯盏花素和三七总苷联合应用,以灯盏花素偏于祛风化痰祛湿,以散风为主,三七总苷偏于活血化瘀,以“破透”血络为主,二者结合将散风与祛除痰瘀病理产物结合起来,相互为用,祛风有助于祛湿化痰,行血,而活血化瘀又有助于风药畅行无阻,从而得以祛除全身之痰湿,恢复失常之气血循行。“巅顶之上唯风可到”,故风药又可起到引药入病所,使阳气上升,浊阴下降,清气上充脑窍,更加有利于缺血脑细胞功能的恢复。故风药与活血化瘀药结合比单纯使用活血化瘀药治疗脑梗死疗效要佳。本实验的结果亦证实了这一点。其作用机制可能与风药能有效抑制细胞黏附分子表达的上调,从而减少炎症因子的释放及炎症因子、血小板与受损内皮间的黏附、聚集,改善微血管闭塞,减轻缺血缺氧有关。发挥中药有机结合后多途径、多靶点作用。

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[7]王忠诚.神经干细胞在中枢神经系统损伤修复中的应用前景[J].中国康复理论与实践,2004,10(1):293.

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