胡冰凌，周勇，宋建军
摘要目的：探究急性脑梗死（ACI）病人血清中环状RNA共激活因子相关的精氨酸甲基转移酶1（circCarm1）的表达情况及与脑损伤严重程度的关系。方法：选取我院2021年1月－2022年1月收治的115例ACI病人为研究对象，即ACI组，选取同期的健康体检者100名为对照组。ACI病人根据美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评分分为轻度组（39例）、中度组（40例）、重度组（36例）；根据梗死灶体积分为小梗死亚组（38例）、中梗死亚组（41例）、大梗死亚组（36例）。采用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）法检测血清中circCarm1 RNA表达水平；Pearson或Spearman法分析circCarm1 RNA表达水平与NIHSS评分、梗死范围的相关性。结果：ACI组circCarm1 RNA表达水平高于对照组（P＜0.05）；重度组circCarm1 RNA表达水平、NIHSS评分高于中度组及轻度组，中度组高于轻度组（P＜0.05）；circCarm1 RNA的表达水平与NIHSS评分呈正相关（P＜0.05）；ACI病人大梗死亚组circCarm1 RNA表达水平高于中梗死亚组和小梗死亚组，中梗死亚组高于小梗死亚组（P＜0.05）；ACI病人circCarm1 RNA表达与梗死范围呈正相关（r＝0.325，P＜0.05）。结论：ACI病人血清circCarm1 RNA表达水平异常增加，其水平与脑损伤严重程度有关。
关键词急性脑梗死；脑损伤；环状RNA共激活因子相关的精氨酸甲基转移酶1；梗死灶；严重程度
doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.08.033
急性脑梗死（acute cerebral infarction，ACI）是一种严重危害人类健康的缺血性脑血管疾病，其患病率和致残率呈上升趋势［1］。在ACI过程中，缺血对脑细胞造成不可逆损伤，血管代偿不良使梗死灶迅速扩大，从而引起严重并发症［2］。环状RNA（circRNA）是一种不同于线性RNA的新型ncRNA，具有共价闭环的特点，这种特殊的结构使circRNA比其他ncRNA更稳定［3］。由于circRNAs从大脑中释放，并且可以在外周血中检测到［4］。因此circRNAs有望成为辅助ACI检测的合适生物标志物。环状RNA共激活因子相关的精氨酸甲基转移酶1（circCarm1）是一种蛋白质甲基转移酶，可负调控突触基因表达并抑制神经元分化，在ACI病人中显着增加［5］。在功能上，发现circCarm1在ACI模型细胞中明显丰富［5-6］。但有关circCarm1在ACI病人中的表达与脑损伤严重程度关系的研究甚少。因此，本研究通过检测ACI病人与健康体检者血清circCarm1的表达水平，探讨其与脑损伤严重程度的关系，旨在为ACI的临床治疗提供有效的依据。
1资料与方法
1.1一般资料
选取我院2021年1月－2022年1月收治的ACI病人115例为研究对象，即ACI组，其中男62例，女53例；年龄（45.20±5.32）岁；体质指数（BMI）为（23.66±3.35）kg/m2；有饮酒史60例，高血压史86例。选取同期的健康体检者100名为对照组，其中男55名，女45名；年龄（46.20±5.17）岁；BMI（23.41±3.22）kg/m2；有饮酒史53例，高血压史48例。ACI病人纳入标准：1）经临床症状、影像学检测等符合《中国急性缺血性脑卒中诊疗指南（2018）》中ACI诊断标准［7］；2）入院时发病时间≤72 h、首次发作的病人；3）病人自愿参与研究。排除标准：1）复发性脑梗死病人；2）入院前1个月有过脑外伤感染；3）合并恶性肿瘤或者其他免疫性疾病；4）ACI病人并发颅内血肿、脑出血、脑血管畸形、颅内肿瘤、脑淀粉样变性、单纯性脑叶微出血；5）患有精神疾病、严重心肺功能障碍、严重肝功能不全和全身感染病人。本研究已经通过本院伦理委员会审核批准，所有病人均知情并签署知情同意书。
1.2方法
1.2.1脑损伤严重程度判断标准
对ACI病人进行美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评分［8］，其中NIHSS评分＜5分为轻度，5～15分为中度，＞15分为重度。本研究中ACI轻度组39例，中度组40例，重度组36例。
1.2.2资料收集与分组
ACI组病人于入院当天，对照组健康体检者当天进行收缩压、舒张压、心电图等检查。全自动生化分析仪检测血糖、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平。梗死灶范围依据为磁共振成像（MRI）或者头颅CT检查结果，并用Pullicino公式计算梗死灶体积［9］，即病灶＜4 cm3为小梗死灶，4～＜10 cm3中梗死灶，≥10 cm3为大梗死灶。本研究中病人小梗死亚组38例，中梗死亚组41例，大梗死亚组36例。
1.2.3实时荧光定量反转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）法检测circCarm1水平
ACI组病人于入院后第2天清晨，对照组健康体检者于体检当天清晨抽取3 mL静脉血，离心，分离上清，将血清于－80 ℃储存，避免反复冻融影响实验。采用TRIzol试剂（Invitrogen，USA）提取血清的总RNA。使用SYBR Premix Ex Taq试剂盒（Takara Bio Inc.，Otsu，Japan）对分离的RNA进行逆转录。使用SYBR Green PCR Master Mix在Biosystems 7300 real-time PCR仪（ABI，USA）中进行qRT-PCR。以甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）作为内部对照。表达水平用2－ΔΔCt法估算。本研究中用于qRT-PCR的引物序列详见表1。
1.3统计学处理
数据使用SPSS 25.0软件分析。定量资料符合正态分布以均数±标准差（x±s）表示，两组比较采取独立样本t检验，3组比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用SNK-q检验；定性资料采用例数、百分比（%）表示，比较采用χ2 检验。采用Pearson或Spearman法分析ACI病人血清中circCarm1 RNA的表达水平与NIHSS评分以及梗死范围的相关性。以P＜0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1ACI组与对照组基线资料比较
ACI组高血压占比、收缩压、舒张压、总胆固醇、LDL-C水平均高于对照组，HDL-C水平低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），两组年龄、性别、BMI、饮酒史、血糖比较差异无统计学意义（P＞0.05）。详见表2。
2.2ACI组与对照组circCarm1 RNA比较
ACI组病人血清circCarm1 RNA的表达水平较对照组升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。详见表3。
2.3不同程度ACI病人circCarm1 RNA水平和NIHSS评分比较
ACI病人重度组circCarm1 RNA表达水平和NIHSS评分高于中度组和轻度组，中度组高于轻度组（P＜0.05）。详见表4。
2.4ACI病人circCarm1 RNA水平与NIHSS评分的相关性
相关性分析显示，ACI病人血清中circCarm1 RNA的表达水平与NIHSS评分呈正相关（r＝0.669，P＜0.001）。详见图1。
2.5不同梗死范围ACI病人的circCarm1 RNA表达比较
ACI病人大梗死亚组circCarm1 RNA表达水平高于中梗死亚组、小梗死亚组，中梗死亚组高于小梗死亚组（P＜0.05）。详见表5。
2.6ACI病人circCarm1 RNA的表达与梗死范围的相关性分析
Spearman相关性分析显示，ACI病人circCarm1 RNA的表达与梗死范围呈正相关（r＝0.325，P＝0.028）。
3讨论
目前，脑血管疾病是我国病死率、致残率极高的疾病，随着人们生活压力的增大，该病发病呈现年轻化的趋势，ACI是最常见和高发的脑血管疾病之一，约占所有脑卒中的70%［10］。近年来，ACI的发病率稳步上升，可导致高致残率和死亡率［11］。ACI发生最常见的原因是脑组织缺氧和缺血，导致神经功能受损，目前，对导致ACI发生的分子机制了解还很有限，主要依靠影像学和血流动力学来评估病情［12］。因此，有必要在分子水平上更好地了解与疾病相关的变化，以便找到潜在的干预或治疗目标，对circRNA的深入研究为脑梗死治疗提供了新的途径。
circRNAs具有组织特异性，在基因表达调控中已有描述［13］。此外，有研究表明，circRNAs可以在疾病的发展和进展中发挥特定的作用［14］。机制上，circRNA可以以外泌体为载体进入血液，稳定存在于外周血中，因此，通过检测血样可以获得组织和细胞的信息［15］。近年来，RNA高通量测序被广泛应用，为circRNA参与ACI的病理过程提供了有力的证据［16-17］。有学者应用高通量测序技术来识别ACI病人血浆circRNA表达的差异变化。Han等［18］的研究表明circHECTD1可以作为脑卒中的早期诊断指标和治疗靶点。circCarm1是蛋白质精氨酸甲基转移酶家族中的1种1型甲基转移酶，参与关键的生命过程，包括基因转录、增殖、细胞周期、DNA剪接和发育［19］。CARM1是蛋白质精氨酸甲基转移酶（PRMT）家族的成员，CARM1介导的甲基化抑制神经元分化，相反，抑制CARM1介导的甲基化将会促进记忆巩固过程，包括突触发生、神经元分化等［20］。circCarm1可促进乳腺癌、肺癌、结肠直肠癌和前列腺癌等癌症的发生、进展和转移［21］。研究表明，过表达的circCarm1促进肺上皮细胞死亡，导致病人缺氧甚至呼吸衰竭［22］。高同型半胱氨酸血症是心血管疾病的危险因素，研究表明circCarm1参与同型半胱氨酸的合成［23］。本研究表明，ACI组病人血清circCarm1表达水平较对照组升高，ACI病人重度组circCarm1表达水平和NIHSS评分高于中度组和轻度组，中度组高于轻度组，提示circCarm1参与ACI的发生和发展过程。相关性分析显示，ACI病人血清中circCarm1的表达水平与NIHSS评分呈正相关，提示circCarm1与ACI病人的脑损伤严重程度有关。本研究还发现，ACI病人大梗死亚组circCarm1表达水平高于中梗死亚组和小梗死亚组，中梗死亚组高于小梗死亚组，其表达与梗死范围呈正相关，提示梗死范围越大，ACI病人血清circCarm1 RNA水平越高，表明circCarm1 RNA与脑损伤程度存在相关性。
综上所述，ACI病人血清circCarm1 RNA水平升高，与脑损伤严重程度密切相关。但由于本研究样本量较少，因此研究结果还有待更加深入的多中心、大样本研究来证实。
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（收稿日期：2022-08-16）
（本文编辑王雅洁）
