林桂花，杨晓冬，钟 文，叶仁清△
(福建医科大学附属宁德市医院：1.输血科；2.检验科，福建宁德 352100)
当机体受到丙型肝炎病毒(HCV)感染后，如未得到及时有效的治疗，势必会从最初的急慢性肝脏炎症发展成为肝脏纤维化、肝硬化甚至原发性肝细胞癌(HCC)[1]。有60%～80%的HCV感染者会发展成为慢性感染，严重影响了我国居民的身体健康[2]。高尔基体蛋白73(GP73)作为一种新型的血清标志物，对于诊断肝脏疾病及HCC具有一定的灵敏度[3]。HCV病毒载量则可反映患者的病程进展及HCV复制的活跃度，常被用于丙型肝炎的诊断及衡量治疗有效率的指标[4-5]。本研究通过回顾性收集分析84例慢性丙型肝炎(CHC)患者的血清GP73水平、肝功能相关指标水平及HCV-RNA载量的相关性，以为CHC的诊断及疗效评估等提供依据，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取本院2012年8月至2018年9月收治的84例CHC患者为研究对象。患者丙氨酸氨基转移酶(ALT)多呈轻度和中度升高，抗-HCV和HCV-RNA阳性。HCV-RNA常在ALT恢复正常前转阴，但也有ALT恢复正常而HCV-RNA持续阳性者。诊断符合中华医学会肝病学分会，中华医学会感染病学分会联合修订的《丙型肝炎防治指南(2015更新版)》中的CHC诊断标准。按照HCV-RNA水平分为HCV-RNA阴性组(HCV-RNA<5.0×102IU/mL，n=23)和HCV-RNA阳性组(HCV-RNA≥5.0×102IU/mL，n=61)。HCV-RNA阴性组：男13例，女10例；年龄19～75岁，平均(45.59±2.37)岁。HCV-RNA阳性组：男32例，女29例；年龄19～75岁，平均(45.59±2.37)岁。选择同期84例健康体检者为对照组，其中男42例，女42例；年龄21～73岁，平均(44.62±3.08)岁。3组对象性别、年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。纳入标准：(1)所有CHC患者均符合我国2015版《丙型肝炎防治指南》诊断标准[2]，沟通能力良好，愿意配合完成本研究；(2)对照组为健康体检者无潜在疾病。排除标准：(1)其他类型肝炎病毒感染及肝胆疾病；(2)恶性肿瘤；(3)重要脏器功能障碍和衰竭。
1.2 方法
1.2.1标本采集及检测方法
CHC患者及对照组健康体检者均禁食、水12 h，采集其空腹肘静脉血液于促凝管中，用于检测患者血清GP73、ALT、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)及HCV-RNA水平；待血液凝固后，以4 000 r/min的离心5 min，将上部血清取出，采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清GP73水平，试剂盒购自北京热景生物技术股份公司，操作步骤严格按照试剂盒方法，每组实验重复3次，确保结果的可靠性；肝功能指标水平检测采用罗氏诊断产品有限公司生产的全自动生化分析仪Cobas8000进行检测，ALT、AST 及TBIL试剂盒购自罗氏诊断产品有限公司；HCV-RNA检测，采用BIO RAD公司生产的Light Cycler实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测仪，开展荧光定量HCV-RNA检测，采用RT-qPCR法检测HCV-RNA载量，Step.one实时荧光 PCR仪购自艾康生物有限公司，试剂盒购自艾康生物有限公司，检测灵敏度：5.0×102IU/mL。另外,所有患者还需要接受国产英特龙300万U，肌内注射，每2天1次，利巴韦林每天900 mg，分3次口服，疗程为1年。治疗第1周，复查ALT和AST 1次，ALT和AST正常之后，随着其他项目一起复查，外周血细胞及血小板计数为每两周复查1次，对于下降不明显的每个月复查1次。治疗前3个月，每月复查患者的HCV-RNA和HCV等1次，之后和完成治疗后每6个月随访复查1次。
1.2.2观察指标
(1)观察HCV-RNA阴性组、HCV-RNA阳性组及对照组血清GP73及肝功能指标水平；(2)依据GP73水平，将61例HCV-RNA阳性CHC患者分为高GP73组(>82.50 ng/mL)、中GP73组(57.98～82.50 ng/mL)及低GP73组(<57.98 ng/mL)，分析各组患者肝功能相关指标及HCV-RNA水平与血清GP73水平的相关性。
1.3 统计学处理
2 结 果
2.1 3组对象血清GP73及肝功能相关指标水平比较
与对照组比较，HCV-RNA阳性组和阴性组患者血清GP73(t=87.355、123.472，P<0.001)、ALT(t=35.823、90.348，P<0.001)、AST(t=114.895、177.349，P<0.001)、TBIL(t=23.560、45.399，P<0.001)均明显升高；HCV-RNA阳性组GP73、ALT、AST、TBIL水平均高于HCV-RNA阴性组(t=18.385、22.741、23.795、15.242，P<0.001)，见表1。
表1 各组对象血清GP73及肝功能相关指标水平比较
2.2 HCV-RNA阳性3个亚组肝功能及HCV-RNA水平比较
与中GP73组及低GP73组比较，高GP73组ALT(t=5.578、7.324,P<0.001) 、AST(t=5.889、7.925,P<0.001)、TBIL(t=6.834、8.327,P<0.001)、HCV-RNA(t=3.245、2.899,P<0.001)水平明显升高；中GP73组ALT、AST、TBIL、HCV-RNA水平均高于低GP73组(t=3.012、3.289、4.089、2.887,P<0.001)， 见表2。
表2 HCV组不同浓度GP73的3组肝功能及HCV-RNA水平对比
2.3 血清GP73水平与肝功能相关指标的相关性
相关性分析发现，血清GP73水平与ALT、AST、TBIL及HCV-RNA均呈明显的正相关(r=0.621、0.652、0.604、0.618，P<0.05)。
3 讨 论
CHC是感染HCV所致。HCV是一种小RNA病毒，分类为黄病毒科肝病毒属。由于肝脏的巨大代偿能力，大部分人感染HCV后没有任何症状，常常偶然在体检时发现，或者很多年后出现不适症状时才发现。大约85%的人在感染HCV后发展成CHC。因此，防控丙型肝炎最有效的手段是尽早对患者进行准确诊断和干预[6-9]。HCV-RNA载量对患者体内病毒水平及病毒复制活跃程度可以有较好的反映，我国新近的丙型肝炎防治指南中也有提到HCV-RNA定量检测可以用于HCV感染的确认及抗病毒治疗过程的应答评估[10-11]。GP73是近年发现的一种高尔基体Ⅱ型跨膜糖蛋白，正常情况下 GP73位于高尔基体膜囊，仅在胆囊上皮细胞中有所表达，当肝细胞组织受到感染，发生损伤时可出现GP73高表达，临床常将其作为比甲胎蛋白及白细胞介素-6更为敏感的肝癌诊断标志物，有研究报道，慢性肝病患者的血清GP73随着疾病进展逐渐升高，可作为慢性肝病的血清标志物[12-15]。但早期诊断HCV需要综合考虑多个因素，联合检测并探讨各个指标间的相关性可使诊断结果更加客观有效。
本研究通过对HCV-RNA阳性、HCV-RNA阴性CHC患者及健康对照人群血清GP73分析发现，两组CHC患者血清GP73、肝功能相关指标水平均高于对照组，说明HCV感染患者血清GP73表达水平增高，同时其肝功能受损，分析其原因可能与CHC患者由于感染HCV后其肝功能受到损伤，引起GP73表达增高。HCV-RNA阳性CHC患者血清GP73、肝功能相关指标水平高于HCV-RNA阴性CHC患者，提示HCV-RNA阳性患者肝功能低于HCV-RNA阴性CHC患者，其血清GP73水平也高于HCV-RNA阴性CHC患者，分析其原因可能是因为HCV-RNA阳性CHC患者体内HCV-RNA的复制，导致患者体内病毒水平增加，引起肝脏产生炎症，逐步发展为肝纤维化，进而导致患者的肝功能损伤程度明显高于HCV-RNA阴性患者，引起患者血清AST、 ALT、 TBIL等肝功能相关指标的升高，进而引起患者血清GP73升高。将61例HCV-RNA阳性CHC患者依据血清GP73水平分组，结果显示高GP73组肝功能指标及HCV-RNA水平高于中、低GP73组(P<0.001)，中GP73组肝功能指标及HCV-RNA水平高于低GP73组(P<0.001)。提示高GP73 HCV-RNA阳性CHC患者其体内HCV-RNA水平升高，同时其肝功能指标数值均较高，血清GP73水平与ALT、AST、TBIL及HCV-RNA水平的变化具有一定的关系，血清GP73水平的高低与肝脏的受损程度密切相关，血清GP73水平越高，则肝损伤程度越重。分析其原因可能是因为正常情况下 GP73位于高尔基体膜囊，仅在胆囊上皮细胞中有所表达，当肝细胞组织受到感染，发生损伤时可出现GP73高表达，HCV-RNA的复制导致了患者肝组织受到感染GP73增高，同时患者肝功能降低。进一步分析发现，血清GP73水平与ALT、AST、TBIL及HCV-RNA水平呈正相关，充分显示了血清GP73与CHC患者HCV-RNA及肝功能损伤程度具有密切关系，有可能作为辅助CHC诊断的一个标志物，同时在HCV-RNA阳性CHC患者的病情评估、治疗效果评估方面也具有重要作用。
本研究通过分析HCV-RNA阳性CHC患者血清GP73水平，为HCV-RNA阳性患者的早期诊断、疗效评估及预后等方面提供了一定的依据，同时也促进了CHC研究的发展，另外，本研究将GP73应用于CHC患者的诊断和病情评估中，因当前在国内关于这方面的研究鲜有报道，而开展本研究具有一定的创新性，可弥补已有研究当中在这方面的不足之处，从而丰富相关理论体系。
综上所述，CHC患者血清GP73水平与患者肝功能及HCV-RNA具有一定相关性，可以为CHC患者的确定和改善预后提供重要的价值，具有明显的诊断和鉴别价值。
