刘乐平 罗雅玲 张叔琦 段颖洁 孟月琳 谢谨如 苏联军*
（湖南中医药大学中医学院，湖南 长沙 410208）
痤疮是青少年常见的多发性皮肤病，其主要临床表现为粉刺、丘疹、脓疱、结节和囊肿，少数病人在病后可形成凹陷或增生瘢痕［1-2］，严重影响患者外貌美观和青少年心理。现有研究认为痤疮的发病机制多与毛囊内微生物感染、炎症损害、性激素分泌和皮脂腺角化等因素有关，金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌是主要的病原体［3-5］。西医主要使用抗生素和维A类药物治疗痤疮，而外用药物有局部红斑、脱屑、干燥、瘙痒、灼烧感、刺激感等不良反应［6］，使患者的接受度较低。并且细菌对抗生素耐药性产生快，近年来其多重耐药谱不断地增大，严重降低了西药对痤疮治疗的疗效［7］。而中草药在抗感染方面有独特的优势，中草药对多种致病菌、真菌具有抑制和杀灭作用，因此从中草药中挖掘出治疗痤疮的药物具有重要意义。
《素问·生气通天论》云：“劳汗当风，寒薄为皶，郁乃痤。”最早提出了中医对痤疮的病因病机以外邪、湿聚、血热立论［8］。而中医对于痤疮的治疗主要以清热祛湿为主要治疗原则，或配合豁痰散结、活血化瘀等法［9］。湖南中医药大学吴润秋教授总结多年临床经验，研制出七味消痤方经验方，是治疗湿热上扰头面引起的头面部炎症期寻常痤疮的经验方。药物组成有七味药，以苦参为君，行清热燥湿之功效。以土茯苓、大黄为臣，助君药奏清热燥湿之效，硫磺解毒疗疮、蝉蜕清热祛风为佐，大青叶、薄荷轻清之剂引药上行头面为使。全方七味药互相配合，共奏清热祛湿的治疗原则。本方外用治疗肺胃蕴热型痤疮取得显着疗效，故本实验针对微生物感染的发病机制，重在探究七味消痤方水煎剂的体外抑菌作用。
1 材料与方法
1.1 一般资料 金黄色葡萄球菌、表面葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌菌株购于中国医学菌种保藏中心。肉汤琼脂培养基、BHI（脑心浸液肉汤培养基）购于青岛海博生物技术有限公司。游标卡尺、规格（0～150）mm×0.02 mm（上海首丰精密仪器有限公司），恒温培养箱（杭州蓝天化验仪器厂）。
1.2 研究方法
1.2.1 七味消痤方水煎剂制备 大青叶、苦参、土茯苓、硫磺、大黄、蝉蜕购于湖南中医药大学第一附属医院中药房，各取10 g，加200 mL蒸馏水，浸泡30 min后加热，煎煮1 h，离心10 min（25°，3000 r/min） 取上清液，水浴浓缩至10 mL（相当于原药材1 g/mL），4°保存，并在12 h内使用。
1.2.2 操作方法
1.2.2.1 细菌培养及细菌悬液制备 取痤疮丙酸杆菌接种于脑心浸液肉汤平板，置于一次性塑料厌氧袋中，加入厌氧发生袋1包，在37℃培养48 h，用接种环调取单个菌落，转种脑心浸液肉汤培养皿中继续培养12 h，达到对数生长周期。取金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌接种于肉汤琼脂平板，置于37℃的环境下，培养24 h，分别挑取单个菌落，转种于肉汤琼脂培养基中培养12 h以实现对数生长周期。将细菌溶液的浓度校正至0.5 McGee的浊度单位。
1.2.2.2 抑菌直径测定 分为金-空、金-中、表-空、表-中、痤-空、痤-中6个实验组，每组5个试管，组内编号1～5。在无菌操作条件下，取50 μL菌液，均匀涂布于培养基上，将牛津杯放在培养基表面，分别取上述各组溶液200 μL加入牛津杯，金黄色葡萄球菌组和表皮葡萄球菌组在37℃恒温箱中培养24 h，痤疮丙酸杆菌组在37℃恒温箱中厌氧培养48 h。
1.2.2.3 体外抑菌各组最小抑菌浓度（MIC）、最小杀菌浓度（MBC） 实验分为以下3组：金黄色葡萄球菌组、表皮葡萄球菌组和痤疮丙酸杆菌组，每组各12支试管，每组分阴性对照管、阳性对照管和药品稀释管（1～10号管）。金黄色葡萄球菌组和表皮葡萄球菌组阴性对照管加入生理盐水1 mL+肉汤琼脂培养基1 mL混匀，阳性对照管加入1 mL肉汤培养基，1～10号管中分别加入1 mL肉汤琼脂培养基，1号管加入1 mL生理盐水混匀后取1 mL丢弃。2号管中加入1 mL中药，按照二倍稀释法将各试管依此对倍稀释，最终每个试管中反应体系均为1 mL。1～10号试管中，中药浓度依次为：0 mg/mL、100 mg、50 mg/mL、25 mg/mL、12.5 mg/mL、6.25 mg/mL、3.13 mg/mL、1.56 mg/mL、0.78 mg/mL、0.39 mg/mL。在阳性对照管和1～10号试管中分别加入1 mL菌液，混匀。37℃恒温箱培养24 h。痤疮丙酸杆菌组实验过程同上，改用脑心浸液肉汤培养皿，在无氧环境中于37℃培养48 h。取MIC以上试管，分别转种于对应的已灭菌的培养基上，并在37℃恒温箱中培养，金黄色葡萄球菌组和表皮葡萄球菌组培养24 h，痤疮丙酸杆菌组在无氧条件下培养48 h。
2 结果
2.1 抑菌直径实验结果测定 体外抑菌实验结果显示，加入七味消痤方水煎剂后，3种菌种抑菌环直径平均值均比只加生理盐水要大，说明七味消痤方水煎剂具有很强的抑菌作用。对3种菌抑菌作用比较而言，七味消痤方水煎剂对痤疮丙酸杆菌具有最强的抑菌活性，抑菌环的平均直径为（3.01±0.23）cm，对金黄色葡萄球菌抑菌活性相对较弱，抑菌环的平均直径为（1.57±0.12）cm，对表皮葡萄球菌抑菌活性最弱，抑菌环直径平均值为（1.22±0.27）cm。
表1 七味消痤方水煎剂的抑菌作用 （）
表1 七味消痤方水煎剂的抑菌作用 （）
注：与加生理盐水组相比*P＜0.05
样品名称 菌种 抑菌环直径平均值（d/cm）中药生理盐水中药生理盐水中药生理盐水1.57±0.12*0.69±0.07 1.22±0.27*0.67±0.08 3.01±0.23*0.96±0.15金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌表皮葡萄球菌痤疮丙酸杆菌痤疮丙酸杆菌
2.2 MIC及MBC实验结果测定 七味消痤方水煎剂对三种致病菌最小抑菌浓度（MIC）、最小杀菌浓度（MBC）实验结果测定。
表2 七味消痤方的MIC、MBC (mg/mL)
3 讨论
寻常痤疮好发于颜面部，是一种慢性的炎症性疾病，涉及毛囊的皮脂腺。寻常痤疮发病率之高主要是由痤疮丙酸杆菌引起，该菌会引发和加重炎症反应。抗生素和其他抗菌治疗的应用很容易产生耐药性或其他不良反应，中医治疗痤疮的临床疗效明显优于西医治疗，已形成了公认的中医治疗特色［10］。吴润秋教授以七味消痤方水煎剂熏蒸外洗的方法治疗痤疮，在临床上获得了显着的疗效。并且目前现代医学已有多篇研究报道这七味中药单药有广谱的抗菌作用或抑油和促渗作用，其中苦参［11］、土茯苓［12］、大青叶［13］、大黄［14］对金黄色葡萄球菌有较好的抑菌作用，苦参、大黄等对痤疮丙酸杆菌有良好的抑菌作用［15］，大黄和硫磺水煎液可有效抑制皮脂腺分泌油脂［16］，薄荷水煎液可增强药物在皮肤的渗透［17］。
本实验选用痤疮的主要致病菌金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌，探究了七味消痤方水煎剂的抑菌活性。结果显示中药组的抑菌活性明显大于对照组，有统计学意义（P＜0.05），本方对3种痤疮致病菌均有较强的抑菌活性，抑菌直径分别为（3.01±0.23）cm、（1.57±0.12）cm，（1.22±0.27）cm，对痤疮丙酸杆菌的抑菌活性最强。然后在此基础上进行了本方MIC和MBC的检测，对3种致病菌的 MIC依次为 25 mg/mL、25 mg/mL、12.5 mg/mL，MBC分别为：100 mg/mL、100 mg/mL、100 mg/mL。说明本方对痤疮致病菌有明显的抑菌和杀菌效果。
现代药理学证实，中药有明显的抑菌和杀菌作用。与抗生素相比，中药能够提高人体免疫力，并施展其非特异性抗菌作用。且细菌对中药发生耐药少见。我国运用中医药治疗痤疮历史悠久，治疗上主要以清热祛湿为主，七味消痤方就是吴教授在临床实践中治疗痤疮效果良好的经验方，本实验进一步证明了七味消痤方的抑菌和杀菌作用，体现出中药抗菌的独特优势，为其临床应用提供了科学依据。但七味消痤方发挥抑菌和杀菌的有效成分尚待深入探讨，以利于进一步开发应用。
