高效液相色谱法测定愈伤胶囊中三七总皂苷和延胡索乙素的含量

李 靖，路莎莎

张掖市中医医院，甘肃 张掖734000

高效液相色谱法测定愈伤胶囊中三七总皂苷和延胡索乙素的含量

李 靖，路莎莎

张掖市中医医院，甘肃 张掖734000

目的：通过测定愈伤胶囊中三七总皂苷和延胡素乙素的含量，建立愈伤胶囊质量控制项下的含量测定标准。方法：采用高效液相色谱(H PLC)方法，W at ers公司的 Sunfi re C18色谱柱(150 m m×4.6 m m，5 μm)。人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1以乙腈为流动相A，以水为流动相B，二元梯度洗脱，0～30分钟，18%～19%A;30～40分钟，19%～31%A;40～60分钟，31%～56%A，检测波长203 nm，流速为1.5 m L/m i n；延胡索乙素以甲醇-0.1%磷酸溶液(三乙胺调ph值至6.0)(55∶45)为流动相；检测波长为280 nm。结果：经测定愈伤胶囊粉末中，每克按干燥品计，三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1的总皂苷含量为0.46 m g/g，延胡索乙素含量为0.046 m g/g。结论：H PLC法测定愈伤胶囊质量三七总皂苷含量与延胡索乙素准确可行，可作为愈伤胶囊含量控制的指标性成分。

愈伤胶囊；三七总皂苷；延胡索乙素；质量标准；高效液相色谱

愈伤胶囊(三七90 g，乳香45 g，没药45 g，土鳖虫45 g等)为张掖市中医医院院内制剂，有活血化瘀、行气消肿止痛、续筋接骨的功效。于2004年7月经甘肃省食品药品监督管理局批准生产，批号为甘药制字Z04071025)，据其质量标准控制项下没有建立含量测定，笔者通过对测定愈伤胶囊中三七总皂苷和延胡素乙素的含量，建立愈伤胶囊质量控制项下的含量测定标准，进一步实现愈伤胶囊的安全、稳定、可控，也为愈伤胶囊进一步的研究提供依据和基础［1-2］。

1 材料与方法

1.1 药品 愈伤胶囊取样批次(批号：20121102、20130123、20130521、20130715、20131014)。

1.2 试剂 三七皂苷R1(中国药品生物制品检定所，批号：110742-200934，纯度大于99.9%)，人参皂苷Rb1(中国药品生物制品检定所，批号：110734-200905，纯度大于99.9%)，人参皂苷Rg1 (中国药品生物制品检定所，批号：110752-200910，纯度大于99.9%)，延胡索乙素(中国药品生物制品检定所，批号：110726-200811，纯度大于99.9%)，甲醇(天津市红岩化学试剂厂生产)，乙腈色谱纯(成都金山化学试剂有限公司生产)，哇哈哈纯净水等。

1.3 仪器 高效液相色谱仪(Waters 600、四元泵、在线脱气系统、手动进样系统、Waters2487型紫外 -可见检测器、Empower色谱工作站)；KQ2200DB型超声波清洗器(40 kHz，80 W，上海新苗医疗器械制造有限公司提供)；BS201型电子天平(北京赛多利斯天平有限公司提供)；回流装置。

1.4 色谱柱 Waters公司的Sunfire C18色谱柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；三七总皂苷：以乙腈为流动相A，以水为流动相B，二元梯度洗脱，0～30分钟，18%～19%A；30～40分钟，19%～31%A；40～60分钟，31%～56%A，检测波长203 nm，流速为1.5 mL/min理论塔板数按三七皂苷R1峰计算应不低于4000，分析时间60分钟。延胡索乙素：以甲醇-0.1%磷酸溶液(三乙胺调pH值至6.0)(55∶45)为流动相；检测波长为280 nm，理论塔板数按延胡索乙素峰计算应该不低于3 000，分析时间50分钟。各样品色谱图中，分离度均大于1.5；拖尾因子在0.95～1.05之间。

1.5 溶液制备

1.5.1 对照品溶液 精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品及三七皂苷R1对照品适量，加甲醇制成每1 mL含人参皂苷Rg1 0.4 mg、人参皂苷Rb1 0.4 mg、三七皂苷R1 0.1 mg的混合溶液。取延胡索乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含46 μg的溶液。

1.5.2 供试品溶液 制备三七总皂苷样品溶液：取本品内容物6 g，精密称定，加甲醇100 mL，放置2小时，时时振摇，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。进样量10 μL［3-5］。延胡索乙素样品溶液的制备：取本品内容物5 g，精密称定，置平底烧瓶中，精密加入浓氨水试液-甲醇(1∶20)混合溶液100 mL，称定质量，冷浸1小时后加热回流1小时，放冷，再次称定质量，用浓氨水试液-甲醇(1∶ 20)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过。精密称取滤液25 mL，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5 mL的量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得，进样量10 μL［6-8］。

1.6 方法

1.6.1 线性关系考察 精密吸取对照品三七总皂苷溶液0.5、1.0、2.5、3.0、4.0、5.0 mL置于10 mL的容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，进样20 μL，以对照品浓度对峰面积积分分值线性回归得三七总皂苷的回归方程为：Y=6.6×107X-1.7619×104相关系数r=0.999 2。精密吸取对照品延胡索乙素溶液0.4、0.6、2.0、3.0、5.0 mL置于5 mL的容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，进样20 μL，以对照品浓度对峰面积积分分值线性回归得延胡索乙素的回归方程为：Y=6.2×107X-1.07×104相关系数r=0.999 1。结果表明三七总皂苷含量和延胡索乙素的含量分别在0.032～0.86 mg/mL和0.037～0.177 mg/mL范围内线性关系良好。

1.6.2 精密度实验 精密吸取同一浓度的对照品溶液，连续进样5次，得到三七总皂苷和延胡索乙素的峰面积，计算三七总皂苷峰面积的RSD为0.37%(n=5)，延胡索乙素的RSD为0.30%(n=5)，表明本方法精密度良好。

1.6.3 重复性实验 取愈伤胶囊内容物，按供试品制备方法制备5份样品溶液，得到三七总皂苷和延胡索乙素的峰面积，计算三七总皂苷面积的RSD为1.46%(n=5)，延胡索乙素峰面积的RSD为1.51%(n=5)。

1.6.4 稳定性实验 取愈伤胶囊内容物，制得供试品溶液，分别在0、2、6、8、12小时进样测定，计算三七总皂苷的RSD为0.99%(n=5)，延胡索乙素峰面积的RSD为2.39%(n=5)，结果表明样品在12小时内稳定。

1.6.5 回收率实验 精密称取同一已知含量的样品6份，分别精密加入一定量的对照品，制得样品溶液后，依法进样测定，结果三七总皂苷的回收率为97.6%，RSD为1.7%，延胡索乙素的回收率为98.8%，RSD为1.5%。

2 结果

经测定愈伤胶囊粉末中，每克按干燥品计，三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1的总皂苷含量为0.46mg/g，延胡索乙素含量为0.046mg/g。图1—2为愈伤胶囊样品中，人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1含量测定色谱图，图3—4为愈伤胶囊样品中，延胡索乙素的含量测定色谱图。

图1 人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1标准品色谱图

图2 人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1标准品色谱图

图3 延胡索乙素标准品色谱图

图4 愈伤胶囊样品中延胡索乙素色谱图

3 结论

三七作为愈伤胶囊处方中的君药，活血散瘀效果显着，在处方中比重较大，其含三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1的总皂苷含量为0.46 mg/g，含量较高，且测定实验无阴性干扰，可以作为愈伤胶囊质量控制的指标性成分。延胡索作为愈伤胶囊处方中的佐药，辅助君臣药，增强活血、利痛、行气之功效，延胡索乙素含量为0.046 mg/g，且测定实验无阴性干扰，可以作为愈伤胶囊质量控制的指标性成分。愈伤胶囊中药制剂是多组分制剂，疗效也是多靶点作用的综合结果，所以测定的指标性成分越多，对于控制中药制剂的内在质量越有利［9］，已知愈伤胶囊中含有三七总皂苷和延胡索乙素有效成分，并且都同用HPLC法测定，同时作为指标性成分，这样既可增加质量控制的覆盖面，又可克服药材中所含若干种成分多少无固定比例规律的缺陷［10］。因此用三七总皂苷含量和延胡素乙素含量来控制愈伤胶囊质量科学、可行、有效。

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Content Detection of Panax Notoginseng Saponins and Tetrahydropalmatine in YuShang Capsules by HPLC

LI Jing,LU Shasha
Zhangye Municipality TCM Hospital,Zhangye 734000,China

Objective:To establish the standard of the content determination of YuShang capsules for quality control by detecting the contents of Panax Notoginseng Saponins(PNS)and tetrahydropalmatine in YuShang capsules.Methods:HPLC method was adopted,Sunfire C18chromatographic column (150 mm×4.6 mm,5 μm).Ginsenoside Rg1,Ginsenoside Rb1,PNS R1 with acetonitrile as mobile phase A and water as mobile phase B,dual gradient elution,0～30 minutes,18%～19%A;30～40 minutes,19%～31%A;40～60 minutes,31%～56%A,detection wavelength was 203 nm,flow rate was 1.5mL/min;methanol-0.1%phosphoric acid solution(ph of triethylamine was adjusted to 6.0)(55:45)were taken as mobile phase for tetrahydropalmatine;detection wavelength was 280 nm.Results:The contents of total saponins and tetrahydropalmatine in PNS R1,Ginsenoside Rb1 and ginsenoside Rg1 contained in YuShang capsules after detected in the powder of dry produce per gram.Conclusion:HPLC method used to detect PNS and tetrahydropalmatine in YuShang capsules is accurate and feasible,which could be used as indicative indexes of YuShang capsules content control.

YuShang capsules;Panax Notoginseng Saponins;tetrahydropalmatine;quality standard;HPLC

R284.1

A

1004-6852(2015)10-0046-03

2014-12-27

李靖(1979—)，男，主管药师。研究方向：中药提取。