复方红芪促睡眠颗粒剂制备工艺研究*

程 晨 ，王燕萍 ，白瑞斌 ，张 静 ，杨扶德 ，胡芳弟 △

1甘肃中医药大学药学院，甘肃 兰州 730000；2兰州大学药学院

复方红芪方主要功效为滋阴潜阳、交通心肾、养血安神。目前临床使用该方仅限于按处方水煎服用，该使用方式在快节奏的现代生活方式下存在着诸多不便。复方红芪方由红芪、酸枣仁、熟地黄、白芍、女贞子、枸杞子、牡蛎、远志等8味药组成，临床使用证明在改善睡眠方面具有很好的疗效。颗粒剂因携带、服用方便，生物利用度高，是近年发展最快的一种中药固体制剂［1］。笔者为了研发一种既能达到改善睡眠，又能方便患者服用、质量稳定的制剂，研究该方的颗粒剂制备工艺，确定其生产工艺流程以及辅料的添加，制定含量测定方法。

1 试药与仪器

1.1 试药 红芪、酸枣仁、熟地黄、白芍、女贞子、枸杞子、牡蛎和远志8味药材均由兰州大学药学院周印所教授鉴定。红芪为豆科植物多序岩黄芪(Hedysarum polybotrys Hand.Mazz.)的干燥根。酸枣仁为鼠李科植物酸枣［Ziziphus jujaba Mill.var.spinosa(Bunge)Hu ex H.F.Chou］的种子。熟地黄为玄参科植物地黄(Rehmannia glutinosa Libosch.)的块根经加工炮制而成。白芍为毛茛科植物芍药(Paeonia lactiflora Pall.)的干燥根。女贞子为木犀科植物女贞(Ligustrum lucidum Ait.)的干燥成熟果实。枸杞子为茄科植物宁夏枸杞(Lycium barbarum L.)的干燥成熟果实。牡蛎为牡蛎科动物长牡蛎(Ostrea gigas Thunberg)的贝壳。远志为远志科植物远志(Polygala tenuifolia Willd.)的干燥根。甲醇为色谱纯，国药集团化学试剂有限公司。实验用水为娃哈哈纯净水。冰醋酸为分析纯。

1.2 仪器 Sartorius BT分析天平(德国Sartorius)；YLD-2000型电热鼓风干燥箱(北京兴争仪器设备厂)；Waters2695高效液相色谱仪，分析天平，Waters2998二极管阵列检测器，KQ-400KDE型高功率数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司。SF-1水分测定仪(天津国铭医药设备有限公司)；ZLB80旋转制粒机(张家港市荣华机械设备有限公司)。

2 方法与结果

2.1 主要功效成分及指标成分的确定依据 通过查阅文献，本研究选定的主要功效成分及指标成分为总皂苷、总黄酮和芍药苷。药理学研究表明酸枣仁能延长睡眠时间，与戊巴比妥等有协同作用，对多数失眠、入睡困难和睡眠易醒症都有较好疗效。酸枣仁促睡眠的主要活性成分是酸枣仁黄酮和酸枣仁总皂苷［2-5］。远志中含有的皂苷E、F、G等能非竞争性抑制环腺苷酸磷酸二酯酶，作用与罂粟碱相当；目前从远志中分离得到的皂苷类成分达80多种，已证实其皂苷类成分为其镇静催眠的活性成分［6］。女贞子中枢抑制作用成分含有齐墩果酸、熊果酸等；女贞子能显着缩短睡眠潜伏期且能显着延长睡眠持续时间［7］。邓少玲［8］采用石莲女贞汤(石莲子、女贞子、五味子、酸枣仁、朱砂)治疗顽固性失眠30例，取得了满意的疗效。研究发现白芍改善睡眠的活性成分主要是白芍总苷［9-11］，白芍所含的芍药苷和丹皮酚均有镇静作用，有增强催眠的作用。

2.2 提取工艺的研究

2.2.1 提取方法依据 大量文献证实酸枣仁［12］、白芍［9］、女贞子［13］、熟地黄［14］、远志［15］、牡蛎［16］、枸杞子［17］、红芪水提取液具有镇静、协调运动和促睡眠作用。依据配方药物中功效成分的理化性质，提取工艺设计为以上各药采用共同水煎煮提取的方法。

2.2.2 提取工艺考察 通过预实验得知影响提取的主要因素为加水量(A)、提取时间(B)和提取次数(C)，为进一步优选各因素最佳工艺水平，设计正交实验，以出膏率、总黄酮含量、总皂苷含量以及芍药苷含量等多个指标，采用L9(34)正交表优选水提复方红芪方的最佳提取工艺条件。实验前首先进行了药材吸水量的考察，为确定液料比提供依据。吸水量：取1日量的处方，加10倍量水，浸泡24小时后，将浸泡液全部倒入另一带刻度的容器中，测定其体积，以公式药材吸水量=(原加水量-浸泡液体积)/原药材总质量。药材的吸水量为1.2倍。以吸水量和最小浸没药材的水量作为因素水平设计依据。当药材吸水量为2倍，最小浸没药材水量为4倍时，因素水平表见表1。

表1 水提取工艺因素水平

2.2.3 考察方法及结果 按设定的工艺精密称取处方比例的各药，每个工艺平行2份，共18份，采用L9(34)正交表安排实验，将各次提取滤液合并后，加热浓缩至相对密度为1.25～1.30(60℃)的稠膏，减压干燥(70℃)，得到干膏粉。并测定干膏粉中总黄酮、总皂苷和芍药苷含量，分别通过干膏粉得率，芍药苷含量、总黄酮、总皂苷以及上述各指标加以权重后的综合指标(出膏率50%、芍药苷10%、总黄酮20%、总皂苷20%)对水提工艺参数进行优选。总黄酮、总皂苷和芍药苷的测定方法参照《中国药典》方法，结果见表7。

表2 平均出膏率的正交实验结果方差分析

表3 平均芍药苷含量的正交实验结果方差分析

表4 平均总黄酮含量的正交实验结果方差分析

表5 平均总皂苷含量的正交实验结果方差分析

表6 归一化、权重的正交实验结果方差分析

表7 水提取工艺L9（34）正交实验

出膏率和芍药苷含量的直观分析见表7，在所选定的3个因素中，对出膏率的影响最大的为提取次数C，3个因素对出膏率的影响程度依次是C＞B＞A。对芍药苷含量的影响最大的为提取时间B，3个因素对芍药苷含量的影响程度依次是B＞C=A。平均出膏率最佳组合是A3B3C3。从芍药苷含量的直观分析中，最佳组合是A3B1C1。总黄酮含量的直观分析，影响最大的为提取次数C，3个因素对总黄酮的含量的影响程度依次是C＞A＞B。同样从黄酮的含量的直观分析可以看出，最佳组合是A1B1C3。总皂苷含量的直观分析中，在所选定的3个因素中，对其影响最大的为提取时间B，3个因素对总皂苷的含量的影响程度依次是A＞B＞C，最佳组合是A3B2C1。

从表2出膏率正交实验结果方差分析，A(加水量)、B(提取时间)、C(提取次数)对出膏率都没有显着性的影响。从Ⅲ型平方和来看，3个因素的影响程度C＞B＞A。从表3平均芍药苷含量正交实验结果方差分析，A、B、C对芍药苷含量都没有显着性的影响。从Ⅲ型平方和来看，3个因素的影响程度B＞A＞C。从表4平均总黄酮含量正交实验结果方差分析，A、B、C对总黄酮含量都没有显着性的影响。从Ⅲ型平方和来看，3个因素的影响程度C＞A＞B。从表5平均总皂苷含量正交实验结果方差分析，A、B、C对总皂苷含量都没有显着性的影响，从Ⅲ型平方和来看，3个因素的影响程度A＞B＞C。

从表7水提取工艺L9(34)正交实验表的直观分析中，在所选定的4个指标出膏率、芍药苷、总黄酮、总皂苷综合考虑，给予出膏率50%权重、芍药苷10%权重、总黄酮20%权重、总皂苷20%权重，数据归一化后发现对该综合指标影响最大因素为为提取次数C，3个因素影响程度依次是C＞A＞B。可以看出，最佳组合是A3B2C3。从表6归一化、权重的正交试验结果方差分析，A、B、C对归一化、权重后的值都没有显着性的影响，从Ⅲ型平方和来看，3个因素的影响程度为C＞A＞B。

综合考虑，选择按配方比例取红芪、酸枣仁、熟地黄、白芍、女贞子、牡蛎、枸杞子、远志药材，浸泡2小时后水煮提取药材，提取3次，每次1.5小时，第一次加10倍量的水，第二次加8倍量的水，第三次加8倍量的水。提取液减压浓缩，浓缩温度小于等于70℃至相对密度1.25～1.30（60℃）的稠膏，减压干燥(真空干燥，温度70℃)，得到干膏粉。该工艺参数既考虑了出膏率又兼顾了提取物中的促睡眠活性成分以及指标成分的含量。

2.3 制剂工艺的研究

2.3.1 辅料的选择

2.3.1.1 辅料种类的确定 蔗糖、糊精通常作为颗粒剂的辅料［18］。因水提取物含有多糖类成分，蔗糖质地较黏稠，不利于制粒，糊精为颗粒剂常用稀释剂，且溶化性良好，故本产品选用糊精作为辅料。

2.3.1.2 辅料用量的确定 按配方比例取红芪、酸枣仁、熟地黄、白芍、女贞子、牡蛎、枸杞子、远志药材，按最佳工艺参数进行提取，制备干膏。取干膏粉，分别加入不同量的糊精混合均匀，制成颗粒。以制粒现象，所得颗粒性状，颗粒溶化性为指标，对辅料用量进行比较，并确定干膏粉与糊精的比例为 1∶1.5。见表 8。2.3.2 制粒用乙醇浓度和用量的确定 取处方量的干膏粉及糊精，混合均匀，喷洒不同浓度的乙醇，制成软材，以制粒过程中的现象为指标，对乙醇浓度和用量进行考察，以制粒过程中的现象，所得颗粒性状，颗粒溶化性为指标，确定采用85%乙醇制粒。见表9。

表8 辅料用量考察

表9 乙醇浓度的考察

2.3.3 颗粒剂的制备

2.3.3.1 制软材 按配方比例取红芪、酸枣仁、熟地黄、白芍、女贞子、牡蛎、枸杞子、远志药材，按上述提取工艺参数进行提取，制备干膏粉。取干膏粉，加入糊精混合均匀，干膏粉和糊精的比例为1:1.5。加85%的乙醇，并用手指不断挫捏，混匀至“手捏成团，压之即散”。

2.3.3.2 制湿颗粒 将制好的软材放入不锈钢16目筛中，不停抖动，摇晃钢筛，让颗粒成粒通过筛孔制成湿颗粒，重复操作直到软材用完为止。

2.3.3.3 颗粒的干燥 将制好的湿颗粒铺平放入瓷盘中，并于电热恒温鼓风干燥箱(60℃)中干燥，制成干颗粒。

2.3.4 检查 性状为深棕黄色颗粒，味苦。粒度、水分、溶化性，装量差异均按《中国药典》2015版附录要求进行检查，均符合要求。第一批含水量4.1%，第二批含水量4.3%，第三批含水量4.3%。装量差异见表10。

表10 供试品10袋装量差异

3 讨论

本实验对复方红芪促睡眠颗粒剂的制备工艺进行了研究。通过正交实验法，确定最佳提取条件，并为其制定了简便实用的质量控制方法。通过总黄酮、总皂苷、芍药苷等多个功效成分和指标成分优化的制备工艺，可保证制剂高活性成分的含量，一方面保证该颗粒的质量，另一方面保证了制剂的疗效。通过对颗粒剂的各项检查，结果均符合《中国药典》2015年版关于颗粒剂检查项下的规定。所制得的复方红芪促催睡眠颗粒剂水溶性好，既保证了传统中药的特点又保证了质量及疗效，同时为用药提供了方便。为常用经方的更进一步推广使用提供范例。

参考文献

［1］苏春梅，杨红，姚金凤.益母草颗粒剂制备工艺研究［J］.西部中医药，2015，28(2)：27-29.

［2］李外，张雪伟.酸枣仁粉碎前后对酸枣仁皂苷A含量和安神功效的影响［J］.中国中医药信息杂志，2008，15（11）：39-41.

［3］胡贞贞，蔡震宇，朱俊,等.酸枣仁甲醇提取物促进日间快动眼睡眠的机制研究［J］.南京中医药大学学报，2013，29(3)：238-242.

［4］刘世军，唐志书，崔春利,等.酸枣仁化学成分的研究进展［J］.西部中医药，2016，29(9)：143-146.

［5］张舜波，王平，田代志,等.酸枣仁总皂苷对失眠老年大鼠脑氨基酸类神经递质及受体表达的影响［J］.中国实验方剂学杂志，2014，4（20）：124-127.

［6］金珠娜.细叶远志镇静作用的化学成分的研究［D］.武汉：湖北中医药大学,2011.

［7］白灵，冯玛莉，宋美卿,等.七种果实类中药镇静催眠作用比较［J］.中国中医药咨讯，2011，3(5)：25-26.

［8］邓少玲.石莲女贞汤治疗顽固性失眠30例［J］.新中医，2002，34（8）：57-58.

［9］张雄飞，竹建平.白芍提取物对小鼠改善睡眠的影响［J］.当代医学，2008（142）：33-34.

［10］夏璇，黄清春.白芍总苷联合柳氮磺胺吡啶治疗强直性脊柱炎的疗效观察［J］.中国误诊学杂志，2010，10(29)：7064-7065.

［11］李越峰,李廷利.四逆散中主要有效成分芍药苷对睡眠影响的实验研究［J］.2011，33（4）：690-692.

［12］张立峰，刘灿仿，徐福鹏.基于中医传承辅助系统的含酸枣仁治疗失眠组方规律分析［J］.西部中医药，2016，29(9)：96-99.

［13］阮红，吕志良.女贞子多糖免疫调节作用研究［J］.中国中药杂志，1999，24(11)：691-693.

［14］崔豪，冯静，崔瑛,等.熟地黄及其多糖中枢抑制作用研究［J］.河南中医学院学报，2006，21(6)：18-19.

［15］沙沂，李文，张艳.远志的镇静催眠作用活性成分提取工艺研究［J］.中成药，2005，27（6）：728-730.

［16］钟洁雯，陈建伟，李祥,等.中药牡蛎对戊巴比妥钠催眠作用的影响［J］.中华中医药学刊，2009，27(3)：499-501.

［17］朱燕飞.枸杞子药理作用概述［J］.浙江中西医结合杂志，2005,15(5)：322-323.

［18］罗友华，黄亦琦，杨辉，等.中药颗粒剂辅料的研究进展［J］.海峡药学，2002，14(1)：1-3.