王悦良，陈豪特，代 波，王权胜△
(1. 广西中医药大学，南宁 530001； 2. 广西中医药大学第一附属医院，南宁 530023)
1 材料与方法
1.1 动物及分组
1.2 主要仪器
MACRO精子计数板和WLJY-9000型伟力彩色精子质量检测系统，北京伟力新世纪科技发展有限公司；DL-4ZB 型低速自动平衡离心机，湖南星科科学仪器有限公司；扫描电子光学显微镜，由广西中医药大学第一附属医院病理科提供；广西医科大学电镜室提供观察分析服务。
1.3 药物制备
1.3.2 迈之灵片 德国礼达大药厂生产(注册证号 Z20050017)，150 mg/片。
1.4 动物模型制作方法
将实验大鼠用普通饲料饲养1周, 观察无明显异常后即进行造模，模型的制作方式参照Turner肾静脉缩窄术[2]。SD大鼠以10%的水合氯醛腹腔肌注麻醉(1 ml/300 g)，麻醉成功后应用大鼠板固定。取大鼠剑突下腹部正中切口逐层切开，将腹内容物轻推向右上腹，于左侧腹膜后显露左肾静脉，游离部分左肾静脉后，在左肾上腺静脉与腹背静脉之间的左肾静脉放置一直径约0.85 mm的金属杆，以4-0的丝线将金属杆与左肾静脉一并结扎，结扎完成后小心抽出金属杆，可见左肾静脉恢复充盈扩张。观察2 min，确定左肾无缺血后将腹内容物归位，并逐层缝合切口。于造模术后1个月麻醉解剖观察，按照精索静脉曲张模型建立成功的标志：左精索静脉直径>1 mm，测量直径比假手术组扩张3倍以上，双肾质量无明显差别即提示精索静脉曲张性不育模型造模成功。假手术组只需进行左肾静脉的剥离，不予结扎左肾静脉。各组大鼠在术后5 d内，每天肌注青霉素钠40万U/只。
1.5 给药方法
2 观察及检测方法
2.1 标本的制作及观察方法
于末次给药后24 h各组大鼠称重断颈处死,剪开阴囊,各组大鼠均摘取左侧睾丸组织,用冷生理盐水冲洗,除去血液称其质量,迅速置于盛有6 mL生理盐水的平皿内,适当加以剪碎置于约37℃温水中温浴20 min左右，轻轻摇晃混匀以使睾丸内的精子充分游离,用精子计数板检测精子浓度和活率。按《WHO人类精液及精子-宫颈黏液相互作用实验室检验手册》[3]标准测定精子质量；将部分睾丸组织用Bouin’s液固定24 h,梯度乙醇脱水，二甲苯透明，常规石蜡切片包埋,HE染色,光镜下观察睾丸组织及生精上皮等改变；将大鼠睾丸组织切取约1 mm3大小放入2%戊二醛和1%多聚甲醛混合液中行固定处理后，送广西医科大学电镜实验室观察其超微结构。
2.2 大鼠睾丸组织显微超微结构检测
光镜下观察各组附睾丸组织常规病理变化，如精子细胞、曲精小管、生精上皮等结构变化；电镜下观察左侧睾丸超微结构改变，如生精上皮、间质血管、支持细胞，主细胞溶酶体、线粒体、内质网等亚细胞结构。
2.3 统计学方法
3 结果
3.1 一般情况
3.2 左精索静脉直径及睾丸质量量变化
模型组大鼠左精索静脉直径较假手术组明显曲张,差异有统计学意义(P<0.01)。模型组大鼠左侧睾丸质量与假手术组左侧睾丸质量比较明显减轻(P<0.05)；模型组大鼠右侧睾丸质量(1.79±0.05)g，相对假手术组(1.84±0.06) g差异无统计学意义(P>0.05)；造模各组大鼠左侧睾丸质量较右侧减轻明显。
3.3 对睾丸精子质量的影响
表1 各组大鼠附睾精子质量比较
注:与模型组比较:▲P<0.05，▲▲P<0.01；与迈之灵组比较:△P<0.05
3.4 对大鼠睾丸显微超微结构的影响
注：A.假手术组;B.模型组; C.迈之灵组; D.大黄虫丸组图1 各组大鼠睾丸组织光镜图(HE染色 ×200)
注：A.假手术组;B.模型组; C.迈之灵组; D.大黄虫丸组图2 各组大鼠睾丸组织电镜图(×30000)
4 讨论
精索静脉曲张是青壮年男性的常见病和多发病，发病率约占男性人群的10%～15%，精索静脉曲张可使睾丸内环境发生病理改变，影响精子发生发育，造成精子浓度及活率下降，精子细胞形态上不成熟和畸形精子的数量显着增多，从而影响男性不育[4]。但现代医学界对精索静脉曲张导致的男性不育机制尚未形成统一的认识，有报道指出精索静脉曲张导致的不育可能与睾丸内组织细胞凋亡、激素分泌、自身免疫、氧化应激等诸多因素相互作用致精子生成障碍有密切关联[5-6]。本实验通过对精索静脉曲张模型大鼠睾丸精子浓度及活动率观察并结合显微超微结构改变发现，大鼠精子质量与睾丸内环境的变化有某种必然的联系。一方面，精索静脉曲张可导致附睾血液滞留瘀积，回流缓慢，使睾丸组织缺血缺氧和必需的营养物质发生供应障碍，致使生精上皮损伤，各级生精细胞发育成熟过程中出现获能中断，可致精子浓度降低，形态畸形率增加。另一方面，睾丸内有毒物质的异常蓄积，使血管内皮受损及活性物质异常释放，促使某些诱导细胞凋亡的分子过度表达，改变睾丸组织显微超微结构、蛋白酶学的生成和分泌，影响精子发生发育环境的稳定性。
