李宝坤 王艳杰 赵丹玉 冯晓帆
辽宁中医药大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室，辽宁沈阳 110847
随着基因技术的快速发展，生物芯片在遗传病及蛋白检测中得到了广泛的应用。20世纪90年代人们采用分子生物学的原理对结核等进行了相关的研究，并将其做为结核病在细菌学上临床诊断的手段之一，相关的研究也不断的深入。当前，人们研究中使用的结核抗原主要有三种，包括：①结核致病细菌的细胞壁蛋白，常用的有38-kDa和16-kDa等蛋白；②结核细菌细胞壁的脂多糖抗原，产用的有LAM和TBGL等蛋白；③结核细菌的菌体。
我国现阶段的耐多药性结核病的临床发病率呈逐年增加的事态，结核病的早期诊断就显得尤为重要。为探讨利用生物芯片技术对结核分支杆菌抗体进行快速检测，该研究以病原体蛋白分子为模型对结合LAM、38-kDa及16-kDa进行检测和分析。在检测过程中把抗原点在芯片的膜表面，并将其与患者血清样本进行杂交，以CCD原理对患者样本进行检测。该研究就2009年1月—2012年12月间收治的2000例结核患者的血清样本进行了测试，现将结果报道如下。
1 实验部分
1.1 患者样品来源
实验收集了确诊的结核病患者2000例的血清样本，并用50例医院健康体检的血清样本作为对照。对受试着进行空腹取血，将抽取的血液以1500转的速度进行离心后取上清液，并进行相关的样本的检测。
1.2 测试方法
将蛋白与样本杂交后对样品进行编号处理，在蛋白芯片的盒窗口中加入4滴试剂A将芯片膜湿润。取100 μL样本血清，摇匀后加入到芯片窗口中，使样本血清渗透到蛋白芯片中，先后加入6滴试剂B、10滴试剂C、6滴试剂D。待反应完全后，放入仪器中进行检测。
2 结果
2.1 结核指标检出率比较
表1为2000例患者的结核 LAM、16-kDa、38-kDa指标的检出率，从表1中可以看出LAM检出率为47.2%(944/2000)，16-kDa检出率为18.2%(364/2000)，38-kDa的检出率为23.2%(464/2000)，蛋白检出率顺序依此为LAM、38-kDa及16-kDa。其中结核的阳性率为31.2%(624/2000)。
对于50例健康体检的对照组患者，LAM指标阳性的有5例，16-kDa及38-kDa指标均称阴性。
表1 患者LAM、16-kDa、38-kDa指标的检出率
2.2 患者各年龄段阳性变化
依据结核患者的年龄，将其分为1～29岁、30～59岁及60岁以上年龄组。图1为患者各年龄段阳性的发生率，从图1中可以看出60岁以上患者的阳性率最高，其次为1～29岁年龄组。
3 讨论
利用生物蛋白芯片对结核患者的蛋白制备进行检测，需要将几个蛋白指标进行联合检测，如可将LAM、38-KDa及16-KDa等蛋白 联合，联合检测有利于结核病阳性蛋白检测的准确率[1-3]。该研究以LAM蛋白及2种重组的结核分枝杆菌蛋白抗原对患者进行检测，其结果并不一致，这主要是由于结核分枝杆菌抗原的特性造成的，分支杆菌的抗原种类多且十分的繁杂，在人体中的表达也各不一样，其会依据患者免疫及临床状况而表现不同。相当一部分的分枝杆菌抗原无法表达，就会在测试中检测不到其抗体。有一部分患者抗体的含量较高，有的则是抗体含量较低，还有一些受到免疫抗体、潜伏的结核以及环境中的细菌影响而发生变异。这就要求我们在检测结核时，需要联合几种抗原的蛋白芯片检测技术，这样可以在确保检测蛋白特异性的同时提升检测的准确及敏捷。该文中，患者LAM检出率为47.2%(944/2000)，16-kDa 检出 率 为 18.2%(364/2000)，38-kDa 的 检 出 率为23.2%(464/2000)，蛋白检出率顺序依此为LAM、38-kDa及16-kDa。而其中结核的阳性率为31.2%(624/2000)。这说明对于三种蛋白抗原联合检测技术对结核病的临床诊断有很好的价值。
在患者各年龄段阳性率的比较中，可以看出阳性发生率最高的是60岁以上的老年人组，其次为1～29岁组。其结果表明结核病的发生率可能与患者的免疫能力及劳逸状况有密切的关系[4-6]。在治疗过程中需要对该组患者进行适时的复查，做到尽早发现、治疗的目的。
研究表明，LAM、38-kDa及16-kDa蛋白抗原跟结核患者的感染状况呈线性关系。所以，利用生物芯片技术可以对结核的LAM、38-kDa及16-kDa蛋白抗体进行适时的动态检测，可用于结核病的临床诊断及治疗效果评价体系。
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