汪亚玲，朱月芳，杨先甲

恩施市中心医院1妇产科，2急诊外科，湖北 恩施 445000

研究表明，近年来卵巢癌的病死率及致残率均呈上升趋势[1-2]。在探讨卵巢癌患者病情进展相关原因的过程中发现，细胞因子或肿瘤相关因子能够通过影响肿瘤细胞的生物学特征，导致肿瘤细胞浸润和增殖过程异常，促进卵巢上皮性恶性肿瘤的发生。Y-盒结合蛋白1（Y-box binding protein 1，YB1）能够通过激活卵巢上皮细胞核基因的转录活性，促进卵巢上皮细胞的持续性增殖[3]；黏附分子CD44表达升高能够导致卵巢癌细胞浸润邻近正常卵巢组织或盆腔内其他组织，提高了卵巢癌细胞的黏附能力，增加了卵巢癌细胞的浸润深度[4-5]。本研究选取80例上皮性卵巢癌组织，探讨YB1和CD44蛋白表达与卵巢癌患者临床特征的关系，旨在为卵巢癌患者的诊疗提供理论基础，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选择2015年1月至2017年12月于恩施市中心医院诊治的80例上皮性卵巢癌患者和80例卵巢良性上皮性肿瘤患者。纳入标准：①上皮性卵巢癌及卵巢良性上皮性肿瘤的诊断参考中华医学会制定的标准[6]；②年龄19～65岁；③无放化疗史或免疫治疗史。排除标准：①合并其他部位恶性肿瘤；②转移性卵巢肿瘤。80例卵巢癌患者，年龄33～65岁，平均（49.3±11.6）岁；国际妇产科联盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）分期：Ⅰ期18例，Ⅱ期25例，Ⅲ期27例，Ⅳ期10例；病理类型：浆液性44例，非浆液性36例；分化程度：高分化15例，中分化30例，低分化35例；有淋巴结转移42例，无淋巴结转移38例。80例卵巢良性上皮性肿瘤患者，年龄31～65岁，平均（48.8±12.4）岁；病理类型：浆液性囊腺瘤48例，黏液性囊腺瘤28例，内膜样肿瘤4例。上皮性卵巢癌和卵巢良性上皮性肿瘤患者的年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。收集80例上皮性卵巢癌患者的上皮性卵巢癌组织标本及80例卵巢良性上皮性肿瘤患者的卵巢良性上皮性肿瘤组织标本。本研究经医院医学伦理委员会审批通过，所有患者均对本研究知情并签署知情同意书。

1.2 免疫组织化学染色方法

取组织标本，采用石蜡包埋进行连续切片，脱蜡至水后采用H2O2室温下孵育10 min，磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）冲洗3次，每次3～5 min，8%的蛋白粉封闭液封闭2 h，弃去封闭液后加入一抗[兔来源，浓度为1∶（1000～1500）]，4 ℃孵育过夜，PBS冲洗3次，每次3～5 min，加入二抗[鼠来源，浓度为 1∶（400～500）]，室温孵育 20～30 min，PBS冲洗3次，每次3～5 min，滴加辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶的荧光标记物，室温孵育10 min，PBS冲洗3次，每次3～5 min，二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色，苏木精复染，脱水，封片。

1.3 免疫组织化学染色结果判断

YB1蛋白主要表达于细胞质和细胞核，CD44蛋白主要表达于细胞膜。由2名资深病理科医师采用半定量法[5]进行评分。根据染色强度评分：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，褐色或黑色为3分。根据阳性细胞所占百分比进行评分：阳性细胞所占百分比≤10%为1分，阳性细胞所占百分比11%～50%为2分，阳性细胞所占百分比51%～75%为3分，阳性细胞数所占百分比＞75%为4分。将染色强度评分和阳性细胞所占百分比评分相乘，＜3分为阴性，≥3分为阳性。

1.4 统计学方法

采用SPSS 16.0软件对数据进行统计分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验；采用Spearman秩相关分析法进行相关性分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 YB1和CD44蛋白表达情况的比较

上皮性卵巢癌组织中YB1和CD44蛋白的阳性表达率分别为57.50%（46/80）和65.00%（52/80），均明显高于卵巢良性上皮性肿瘤组织的6.25%（5/80）和10.00%（8/80），差异均有统计学意义（χ2=48.383、51.627，P＜0.01）。

2.2 上皮性卵巢癌组织中YB1和CD44蛋白表达的相关性

相关性分析结果显示，上皮性卵巢癌组织中YB1和CD44蛋白的表达呈明显正相关（r=0.588，P＜0.01）。（表1）

表1 上皮性卵巢癌组织中YB1和CD44蛋白的表达情况（n =80）

2.3 不同临床特征上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌组织中YB1蛋白表达情况的比较

FIGO分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移的上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌组织中YB1蛋白的阳性表达率均高于FIGO分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移的上皮性卵巢癌患者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。不同病理类型、分化程度的上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌组织中YB1蛋白的阳性表达率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。（表2）

2.4 不同临床特征上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌组织中CD44蛋白表达情况的比较

FIGO分期为Ⅲ～Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移的上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌组织中CD44蛋白的阳性表达率均高于FIGO分期为Ⅰ～Ⅱ期、中/高分化、无淋巴结转移的上皮性卵巢癌患者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。不同病理类型的上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌组织中CD44蛋白的阳性表达率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。（表3）

表2 不同临床特征上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌组织中YB1蛋白表达情况的比较（n =80）

表3 不同临床特征上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌组织中CD44蛋白表达情况的比较（n= 80）

3 讨论

卵巢上皮性恶性肿瘤的发生主要与长期的性激素受体敏感性改变或家族性遗传易感基因的携带有关，特别是在年龄＞45岁、具有卵巢癌家族史的群体中，卵巢癌的发病率可进一步升高[7-8]。YB1是转录调控相关因子，能够通过影响核基因的转录活性，导致转录激活程度的改变，增加卵巢上皮细胞核基因异常突变和转录的风险。研究表明，YB1蛋白表达升高可导致卵巢癌细胞基因错配修复能力下降，造成卵巢癌细胞周期发生紊乱[9]；CD44是肿瘤干细胞相关因子，不仅能够影响肿瘤细胞的黏附过程，还能够激活肿瘤干细胞，显着增强肿瘤细胞干性特征，促进肿瘤细胞的复发和转移[10]。有研究者探讨了CD44蛋白在卵巢癌患者中的表达情况，结果发现CD44蛋白表达升高与卵巢癌的发生密切相关[11]。

本研究通过免疫组织化学染色发现，上皮性卵巢癌组织中YB1和CD44蛋白的阳性表达率均明显高于卵巢良性上皮性肿瘤组织，差异均有统计学意义（P＜0.01），提示YB1和CD44蛋白高表达均能促进上皮性卵巢癌的发生发展。分析其原因可能有以下两个方面[12-13]：①YB1蛋白表达升高能够提高转录增强子的活性；②CD44蛋白表达升高能够提高卵巢癌细胞对盆腔器官和组织的黏附能力，促进卵巢癌细胞对邻近正常卵巢组织的浸润。侯小满等[12]研究结果显示，上皮性卵巢癌组织中CD44蛋白的阳性表达率明显升高，且CD44蛋白的阳性表达率与卵巢癌患者的临床特征密切相关。本研究结果显示，上皮性卵巢癌组织中YB1和CD44蛋白表达呈明显正相关（P＜0.01），提示二者在促进卵巢癌病情进展的过程中可能发挥了一定的协同作用。本研究探讨了YB1和CD44蛋白表达与卵巢癌患者临床特征的关系，结果发现，FIGO分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移的上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌组织中YB1蛋白的阳性表达率均高于FIGO分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移的上皮性卵巢癌患者，差异均有统计学意义（P＜0.05），提示YB1蛋白表达与卵巢癌患者的临床特征密切相关。这主要是由于YB1蛋白表达升高能够导致卵巢癌细胞基因突变和错配修复能力异常，促进了癌基因的激活，导致卵巢癌细胞的持续性浸润和侵袭，造成临床分期升高。FIGO分期为Ⅲ～Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移的上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌组织中CD44蛋白的阳性表达率均高于FIGO分期为Ⅰ～Ⅱ期、中/高分化、无淋巴结转移的上皮性卵巢癌患者，差异均有统计学意义（P＜0.05），提示CD44蛋白表达与卵巢癌患者的临床特征密切相关，临床上可通过随访术后免疫组织化学染色结果，进而评估卵巢癌患者的病情。

综上所述，上皮性卵巢癌组织中YB1和CD44蛋白表达明显升高，二者的表达呈正相关，且与上皮性卵巢癌患者的临床分期和淋巴结转移情况密切相关。