朱 健 刘 勇 朱水波 蒋 炜 夏 峰 余冬敏 梁江水
广州军区武汉总医院心胸外科，湖北武汉 430070
骨桥蛋白（osteopontin，OPN）是与肿瘤的发生发展密切相关的一种磷酸蛋白，Senger等[1]于1979年首次在恶性转化的上皮细胞株中发现。随后的研究发现，OPN表达于多种肿瘤组织中，包括胃癌、肾癌、甲状腺癌、肺癌、食管癌等肿瘤组织，具有较好的敏感性[2]。目前国内外尚无关于OPN在人胸腺瘤组织中表达情况的报道。本研究通过免疫组织化学SP法检测OPN在胸腺瘤中的表达情况，以探讨其对胸腺瘤临床诊断和患者预后判断的意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料
收集我院胸腺瘤切除标本患者53例的完整病例资料，其中，男29例，女24例，年龄22～70岁，中位年龄49岁，27例合并重症肌无力（myasthenia gravis，MG）。 53例术前行胸部高分辨率CT检查，均诊断为前上纵隔肿瘤，未行放疗和（或）化疗。术后按Masaoka分期标准[3]分为：Ⅰ期（非侵袭性胸腺瘤）31例，Ⅱ期13例，Ⅲ期7例，Ⅳ期2例（Ⅱ～Ⅳ期为侵袭性胸腺瘤）。根据2004年正式的WHO胸腺瘤组织分型标准[4]分为：A型8例、AB型24例（A、AB型为低度恶性）、B型20例（其中，B1型8例，B2型10例，B3型2例），C型1例（B、C型为高度恶性）。取同期20例非肿瘤胸腺（nonneoplastic thymus，NNT）组织（取自先、后天性心脏病等）作为对照，其中，男11例，女9例，中位年龄47岁。两组一般情况比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。
1.2 试剂
一抗兔抗人OPN单克隆抗体、二抗生物素标记羊抗兔IgG试剂盒、DAB显色试剂盒等试剂均购自武汉博士德生物工程有限公司。
1.3 实验方法
全部标本经10%中性福尔马林液固定，常规石蜡包埋，制成4 μm厚的连续切片2张，1张供免疫组化染色，1张供HE染色复核诊断。免疫组织化学采用SP法，依据试剂盒说明书步骤进行。HE染色按常规进行。
1.4 免疫组织化学结果判断方法
采用双盲法，由两名病理科高年资医师随机选取5个10×40倍视野，根据染色程度和染色细胞所占百分比进行评分[5]：①染色强度以多数细胞为准，无阳性细胞记0分，显黄色记1分，显棕黄色记2分，显棕褐色记3分；②阳性细胞占肿瘤细胞总数的比例＜5%记0分，5%～25%记1分，26%～50%记2分，≥51%记3分；再按①×②的结果分为两级：0分为阴性；1～9分为阳性。有4张切片结果判定不一致，遂采用武汉同济千屏病理科图文综合信息管理系统HMIAS-2000高清晰度彩色医学图文分析系统免疫组化测量程序判定。
1.5 统计学方法
应用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析，计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以α=0.05作为检验水准。笔者参考Masaoka分期标准和WHO胸腺瘤组织分型标准及结合黄壮士等[6]对类似数据的合并方式，将Masaoka分期中Ⅱ～Ⅳ期合并后与Ⅰ期作统计学分析；将WHO胸腺瘤组织分型中A、AB型合并后与B、C型合并后作统计学分析。
2 结果
2.1 病理学分析
免疫组织化学SP法检测显示，OPN主要表达在胸腺瘤肿瘤细胞的细胞浆中，少量弥散表达在炎症细胞、肿瘤周围基质及血管内皮细胞胞浆中。
2.2 各组间OPN表达阳性率比较
OPN在NNT组与胸腺瘤组中的阳性表达率差异有统计学意义（P＜0.001），见表1。在Masaoka分期Ⅰ期组与Ⅱ～Ⅳ期组间阳性表达率差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。在WHO分型A/AB型胸腺瘤组与B/C型胸腺瘤组间阳性表达率差异有统计学意义（P＜0.05），见表3。在合并MG的胸腺瘤组与不合并MG的胸腺瘤组间阳性表达率差异无统计学意义（P＞0.05），见表4。
表1 OPN在胸腺瘤组织和NNT组织中的表达情况（例）
表2 OPN在胸腺瘤Masaoka不同分期组间的表达情况（例）
表3 OPN在胸腺瘤WHO不同分型组间的表达情况（例）
表4 OPN在胸腺瘤是否合并MG组间的表达情况（例）
3 讨论
胸腺瘤是成人最常见的前上纵隔肿瘤，约占50%[7]。目前临床主要采用Masaoka分期法[3]，临床Ⅰ期：包膜完整，镜下无包膜浸润；临床Ⅱ期：侵犯周围胸膜或脂肪组织，或镜下包膜浸润；临床Ⅲ期：侵犯邻近器官（心包、大血管、肺等）；临床Ⅳa期：胸膜或心包播散；临床Ⅳb期：淋巴道或血道转移。其中Ⅰ期为非侵袭性胸腺瘤，Ⅱ～Ⅳ期为侵袭性胸腺瘤。而组织学分型主要根据2004年正式的WHO胸腺肿瘤组织学分型标准[4]，A型：髓质型；AB型：兼具A型和B型胸腺瘤样成分；B型：混合型（B1型：皮质为主型，器官样；B2型：皮质型；B3型：鳞状上皮样、分化好的胸腺癌）；C型：胸腺癌；其中，A、AB型为低度恶性，B、C型为高度恶性。由于胸腺组织学结构复杂，细胞多样化，单纯从细胞学形态上很难在“腺瘤”和“腺癌”之间划一条泾渭分明的界线。病理科医生往往需要借助特殊标记物染色的表达情况作为诊断的参考依据。
OPN是一种相对分子量约为44 kD的具有多种生物学功能的分泌性、糖基化的磷酸蛋白。它有一个N端信号序列及Gly-Arg-Gly-Asp-Ser细胞黏附序列，并含有28个功能结合区，包括钙结合域、凝血酶裂解位点等，这使其具有多种功能，在细胞的黏附迁移、信号传导及组织修复中具发挥着重要作用[8]。有研究报道，骨桥蛋白在肿瘤发生、发展和转移过程中有重要的作用，其具体机制可能有以下几个方面：①通过与其受体-整合素和CD44结合后发挥作用[9]；②与血管通透性因子（VPF）/血管内皮生长因子（VEGF）发挥协同作用[10]；③通过自分泌及旁分泌途径发挥作用[11]；④通过抑制一氧化氮（NO）的产生，使转移的肿瘤细胞易于存活[12]。
本实验通过免疫组织化学SP法检测发现，OPN主要表达于胸腺瘤肿瘤细胞的细胞浆中，少量弥散表达在炎症细胞、肿瘤周围基质及血管内皮细胞胞浆中。据此笔者推断胸腺瘤肿瘤细胞本身能够产生和分泌骨桥蛋白，并通过分泌的骨桥蛋白来改变周围的微环境，促进肿瘤迅速生长和浸润转移；骨桥蛋白也可能通过旁分泌方式，作用于血管内皮细胞和周围的基质细胞，促进肿瘤的生长。在本实验中，OPN的阳性表达率在胸腺瘤中高于NNT组织，提示OPN参与了胸腺瘤的发生；OPN在Masaoka分期为Ⅱ～Ⅳ期的胸腺瘤中的阳性表达率高于Ⅰ期胸腺瘤，提示胸腺瘤中OPN的表达与肿瘤的侵袭性相关；OPN的阳性表达率在WHO分型为B/C型的胸腺瘤中高于良性A/AB型胸腺瘤，提示OPN的表达与胸腺瘤的恶性程度相关；另外，OPN在合并MG的胸腺瘤和不合并MG的胸腺瘤中的阳性表达率差异无统计学意义，说明OPN在胸腺瘤中的表达，与其是否合并MG无明显相关性。
综上所述，OPN可能在胸腺瘤的发生和发展中起重要作用，OPN的表达可能成为胸腺瘤临床诊断和患者预后判断的一个重要参考指标。
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