复方甲硝唑克林霉素乳膏的制备及质量控制

范义凤+王钦++金智华

[摘要] 目的 制备复方甲硝唑克林霉素乳膏并建立其质量控制方法。方法 采用乳化法制备乳膏，建立酸碱度、微生物限度、高速离心试验、耐热耐寒试验和室温留样观察试验；采用HPLC、梯度洗脱法，测定乳膏中4种主要成分的含量，色谱柱为Diamonsil C18，流动相：甲硝唑和维生素B6的为乙腈-磷酸氢二钾溶液（0.68%）（20∶80），盐酸克林霉素和螺内酯的为乙腈-磷酸氢二钾溶液（0.68%）（60∶40）流速为1.0 mL/min，检测波长为 210 nm，柱温为25℃，进样量为20 μL。结果 该乳膏pH为6.0～7.0，微生物限度、高速离心试验、耐热耐寒试验检查等均符合规定。甲硝唑、克林霉素、螺内酯、维生素B6在各自的浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。平均回收率：甲硝唑为100.2%，RSD为0.95%；克林霉素为100.4%，RSD为1.03%；螺内酯为99.60%，RSD为0.99%；维生素B6为99.79%，RSD为0.87%。 结论 本品制备工艺简单，所得制剂质量可控，性质稳定，无刺激性，可满足临床需要。含量测定方法简便、快速、结果准确，可用于复方甲硝唑克林霉素乳膏中四种主要成分的含量测定。

[关键词] 甲硝唑；克林霉素；螺内酯；维生素B6；高效液相色谱法

[中图分类号] R943 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）04（c）-0146-05

[Abstract] Objective To prepare Compound Metronidazole Clindamycin Cream and estabilish a method for its quality control. Methods Compound Metronidazole Clindamycin Cream was prepared by using emulsion process. and then pH， microbial limit， high speed centrifuge test， heat and cold resistant test and room temperature retention test were established. HPLC method for determination of Compound Metronidazole Clindamycin Cream was developed， and gradient elution method was adopted. The chromatography column was Diamonsil C18； Mobile phase of metronidazole and vitamin B6 was the mixture of acetonitrile and dipotassium hydrogen phosphate （0.68%） （20∶80）， and mobile phase of clindamycin hydrochloride and spironolactone was the mixture of acetonitrile and dipotassium hydrogen phosphate （0.68%） （60∶40）； the flow rate was 1.0 mL/min； the detection wavelength was 210 nm； the column temperature was 25 ℃， and the sample volume was 20 μL. Results The pH value of the cream was 6.0-7.0， and the quality of cream was eligible in microbial limit， high speed centrifugal test， heat/cold test. Metronidazole， clindamycin， spironolactone and vitamin B6， their respective concentration and peak area showed good linear relationship. The average recovery rates： metronidazole was 100.2%， RSD was 0.95%； clindamycin was 100.4%， RSD was 1.03%； spironolactone was 99.60%， RSD was 0.99%； vitamin B6 was 99.79%， RSD was 0.87%. Conclusion The preparation process is simple， the quality of the preparation is controllable， the property is stable， and the utility model can meet the clinical needs. The method of content determination is also simple， rapid and accurate， can be used for the determination of four main components in Compound Metronidazole Clindamycin Cream.

[Key words] Metronidazole； Clindamycin； Spironolactone； Vitamin B6； HPLC

寻常型痤疮是皮肤科的常见病，其病因目前尚未明确，可能是雄性激素水平过高，皮脂腺功能亢进，痤疮丙酸杆菌感染等[1]。痤疮杆菌对甲硝唑和盐酸克林霉素敏感，两者均可有效抑制痤疮杆菌的生长[2-5]。目前临床上主要用甲硝唑乳膏及其复方制剂[6-7]、中西医联合治疗[8]、红蓝光治疗[9]等用于寻常型痤疮治疗。螺内酯还具有干扰皮肤雄激素受体、温和的抗雄激素作用，且无明显雌激素样副作用，可使皮脂腺分泌明显减少，因此可用于寻常型痤疮的治疗[10-12]。临床研究显示，维生素B6在治疗寻常型痤疮方面具有一定的效果[13-14]，可用于寻常型痤疮的辅助治疗用药。南通大学附属医院药学部制剂室根据临床需要，针对发病机制，自行研制了新制剂复方甲硝唑克林霉素乳膏，其主要成分为甲硝唑、盐酸克林霉素、螺内酯，维生素B6。采用HPLC法测定复方甲硝唑克林霉素乳膏中甲硝唑、克林霉素、维生素B6、螺内酯4种主要成分的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1仪器

Agilent型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）（包括四元泵，紫外检测器，手动进样器，色谱工作站，真空脱气机）、Cary-300型紫外分光光度计（美国瓦里安公司）、BP211D型分析天平（德国赛多利斯）。

1.2 试药

甲硝唑对照品（批号：0191-9804，纯度99.6%）、螺内酯对照品（批号：100193-14189纯度99.8%），维生素B6对照品（批号：100116-13470，纯度99.8%），盐酸克林霉素对照品（批号：130422-200702，纯度99.9%），对照品均为中国食品药品检定研究院。乙腈为色谱纯，磷酸氢二钾、乙醇为分析纯。

2 方法与结果

2.1 处方

甲硝唑50 g，克林霉素10 g，螺内酯4 g， 维生素B6 10 g，硬脂酸65 g，十八醇65 g，单硬脂酸甘油酯12 g， 十二烷基硫酸钠5 g，甘油50 g，月桂氮卓酮10 g， 丙二醇120 g，羟苯乙酯3 g，纯化水596 mL，共制成1000 g。

2.2 复方甲硝唑克林霉素乳膏的制备

取硬脂酸、十八醇、单硬脂酸甘油酯、羟苯乙酯混合加热使其熔化，过滤，并保持70～80℃（油相）；另取甲硝唑、克林霉素、维生素B6溶于适量温度为60℃纯化水中，取十二烷基硫酸钠、甘油、适量纯化水混合加热溶解，保持70～80℃（水相）；将水相缓慢加入油相中，按照同一方向随加随搅拌30 min，搅拌速率600 r/min，使乳化完全；取螺内酯溶于温度为60℃丙二醇中，得螺内酯液；待上述乳膏基质冷却至40℃时，再加入螺内酯液和月桂氮酮，最后以600 r/min速率搅拌直至冷凝，即得。

2.3 质量控制

2.3.1 外观

本品为乳白色，外观均匀细腻、无颗粒感、易于涂布。

2.3.2 鉴别

取本品5 g，加50%乙醇50 mL水浴加热20 min过滤，取滤液在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。

2.3.3 检查

2.3.3.1 酸碱度 取本品5 g置烧杯中，加水25 mL搅拌均匀，测得pH为6.0～7.5（《中国药典》2015年版四部通则0631）[15]77，符合规定。

2.3.3.2 微生物限度 随机抽取三批样品，按照（《中国药典》2015年版四部通则1105）[15]140检验、铜绿假单胞菌、金葡菌等均符合规定。

2.3.3.3装量 取本品，按最低装量检查法（《中国药典》2015年版四部通则0942）[15]125行检查，符合规定。

2.4 含量测定

2.4.1色谱条件

色谱柱为Diamonsil C18 （4.6 mm×150 mm，5 μm），用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。流动相为乙腈（A）-磷酸氢二钾溶液（0.68%）（B），梯度洗脱（洗脱程序见表1），流速为1.0 mL/min，检测波长为 210 nm，柱温为25℃，进样量为20 μL。

2.4.2溶液的制备

2.4.2.1 混合对照品溶液 精密称取甲硝唑对照品100 mg、螺内酯对照品20 mg置100 mL量瓶中，加95%的乙醇水浴加热使溶解，并加乙醇稀释至刻度作为贮备液Ⅰ。另精密称取盐酸克林霉素对照品、维生素B6对照品各50 mg分别置100 mL量瓶中，加纯化水溶解并稀释至刻度作为贮备液Ⅱ。再精密量取贮备液Ⅰ、Ⅱ各5 mL置25 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制成含一定浓度的混合对照品溶液。

2.4.2.2 供试品溶液 按处方比例配制复方甲硝唑克林霉素乳膏，精密称取5 g乳膏置烧杯中，加50%的乙醇80℃水浴加热20 min分三次提取，每次30 mL，提取液转移至100 mL量瓶，并用50%的乙醇稀释至刻度，摇匀滤过，再精密量取滤液5 mL置25 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度摇匀。

2.4.2.3 阴性对照溶液 按处方比例配制不含主要成分的乳膏基质，精密称取5 g乳膏基质再按上述供试品溶液项下进行制备。

2.4.3 系统适应性试验

精密量取“2.4.2”项下的对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各适量，按“2.4.1”进样20 μL测定，记录色谱图，见图1。由图1可知，在该色谱条件下，各成分均能达到基线分离，分离度>1.5，理论塔板数以维生素B6峰、甲硝唑峰、螺内酯峰、盐酸克林霉素峰计均>3360 ，保留时间分别为1.6、3.5、11.7、13.5 min左右。结果表明，其他成分对测定无干扰。

2.4.4 线性关系考察

精密量取“2.4.2”项下的四种对照品溶液的贮备液 2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0 mL 分别置 25 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得系列对照品溶液。按“2.4.1”色谱条件项下的方法各进样20 μL测定峰面积，以浓度为横坐标（C）、峰面积为纵坐标（A峰） 进行线性回归，结果见表2。

2.4.5 精密度试验

精密量取“2.4.2”项下的混合对照品溶液适量，按“2.4.1”项下的方法进行测定，各进样20 μL记录峰面积，并计算RSD。结果甲硝唑、盐酸克林霉素、螺内酯、维生素B6峰面积的RSD分别为0.71%、0.59%、0.42%、0.87%（n=6），说明仪器精密度良好。

2.4.6 稳定性试验

精密量取“2.4.2”项下的供试品溶液适量（批号160412），按“2.4.1”项下的方法，于室温（25℃）在0、2、4、8、12 h分别进样20 μL记录峰面积，并计算RSD，结果甲硝唑、盐酸克林霉素、螺内酯、维生素B6峰面积的RSD分别为0.91%、1.23%、0.87%、1.56%（n=6），说明供试品溶液在12 h内稳定。