徐成高 罗丽君
糖尿病周围神经病变作常见的糖尿病慢性并发症，约50%的2型糖尿病患者最终合并周围神经病变，常表现为感觉异常、肢体远端麻木刺痛等，早期及时诊治预后较好，晚期导致难逆的神经损伤，对身心健康及生活质量有较大影响。因而，早期诊断治疗对糖尿病周围神经病变预后具有重要意义。微小RNA（miRNA）是一类内源性非编码RNA分子。miR-223已被证实参与多种病理过程括癌症、心力衰竭、痴呆和肝病等［1-2］。有研究［3］发现糖尿病视网膜患者的血清及房水中miR-223-3p表达较非糖尿病患者增加，且随着视网膜病变的进展，其水平逐步升高。本研究探讨血清miR-223与2型糖尿病周围神经病变的相关性，为糖尿病周围神经病变诊治提供参考。
1 资料与方法
1.1 临床资料 选择2020年12月至2022年5月嘉兴市第一医院2型糖尿病患者138例。2型糖尿病诊断参照1999年WHO发布的标准。糖尿病周围神经病变的诊断依据：①糖尿病病史诊断明确；②神经病变在糖尿病同时或之后出现；③具有神经病变的症状（麻痛、感觉异常等），5项检查（振动觉、踝反射、压力觉、温度觉、针刺痛觉）有1项异常，若无症状，5项检查有2项异常也可诊断；④除外其他神经病变。纳入标准：①年龄18～70岁；②确诊为2型糖尿病。排除合并心肺、血液、肿瘤慢性炎症性疾病。根据有无周围神经病变将患者分为2组：2型糖尿病组77例；2型糖尿病伴周围神经病变组61例；本研究经本院伦理委员会批准。
1.2 方法 （1）收集基线资料：包括年龄、性别、病程、收缩压、体质量、身高等。体质量指数（BMI）=体质量（kg）/身高（m）2。（2）相关实验室指标测定：所有患者均空腹抽取静脉血，全自动生化仪电化学发光法测定总胆固醇（TC）、肌酐、尿酸。化学发光法测定空腹胰岛素、维生素D，高压液相色谱法检测糖化血红蛋白（HbA1c）。留取晨尿通过免疫投射比浊法检测尿微量白蛋白/肌酐（UACR）。胰岛素抵抗指数（HOMAIR）=胰岛素（mIU/L）×葡萄糖（mmol/L）/22.5。所有患者行肌电图检查。（3）miR-223及血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）的测定：收集患者血液标本，离心10 min（3,000 r/min）分离取上清液，于-80℃冰箱保存。采用trizol 提取miRNA，采用Platinum® Taq DNA Polymerase-PCR Kit检测血清miR-223水平。反应体系20μL，反应条件：95℃ 5 s；60℃ 40 s；共40个循环。每份样品设3个重复，取平均值。采用2-△△CT法分析miR-223的相对表达量。收集患者血液标本，离心10 min（3,000 r/min）分离取上清，于-80℃冰箱保存。采用酶联免疫吸附方法（ELISA）检测血清TNF-α（深圳欣博盛生物科技有限公司）的表达水平。
1.3 统计学方法 采用SPSS统计软件。符合正态分布计量资料以（±s）表示，用t检验；偏态分布计量资料用M（Q1，Q3）表示，用秩和检验；计数资料用χ2检验。Logistic回归分析各指标与糖尿病周围神经病变的相关性，应用受试者操作特征曲线（ROC）分析miR-223对2型糖尿病伴周围神经病变的预测价值。以P＜0.05 有统计学差异。
2 结果
2.1 两组基线资料、实验室指标及血清生物标记物比较 2型糖尿病伴周围神经病变组年龄、病程、UACR、TNF-α及miR-223高于2型糖尿病组，HOMA-IR低于2型糖尿病组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1-3。
表1 两组性别、吸烟、病程、年龄及BMI比较
表2 两组收缩压、肌酐、尿酸、维生素D及UACR比较
表3 两组TC、HbA1C、HOMA-IR、TNF-α及miR-223比较
2.2 糖尿病伴周围神经病变的影响因素 糖尿病病程、性别、miR-223、TNF-α为周围神经病变的独立相关因素（P＜0.05）。见表4。
表4 糖尿病周围神经病变影响因素的Logistic回归分析
2.3 miR-223对2型糖尿病周围神经病变的预测价值分析 miR-223预测发生糖尿病周围神经病变的ROC曲线下面积为0.722±0.045，其预测糖尿病周围神经病变的敏感度67.2%，特异度76.7%（95%CI：0.634～0.809，P＜0.05），联合糖尿病病程后ROC曲线下面积为0.819±0.035，预测糖尿病周围神经病变的敏感度73.8%，特异度77.9%（95%CI：0.750～0.889，P＜0.05）。见图1。
图1 miR-223对糖尿病患者发生周围神经病变的预测价值
3 讨论
目前糖尿病周围神经病变发病机制尚未清楚，可能与高血糖、血脂代谢紊乱及异常的胰岛素信号通路等引发系列的病理生理改变有关，这些病理变化包括糖酵解途径异常、多元醇途径异常、炎症信号通路增加及炎症因子水平升高等［4-5］。miRNA作为非编码RNA其主要通过作用于mRNA，抑制基因表达发挥作用。近些年，较多研究表明，糖尿病及其并发症发生发展中有miRNA参与。基础试验中发现在高糖处理的心肌细胞中miR-223高表达，抑制miR-223可减轻糖尿病心肌病大鼠的心肌纤维化、NLRP3炎症性小体的激活和心肌细胞凋亡［6］。LI等［7］发现在糖尿病患者、糖尿病小鼠的胰岛中以及高糖处理的β细胞中miR-223表达上调，糖尿病条件下miR-223水平的升高可能保护2型糖尿病的代偿机制，因miR-223可以增加功能β细胞质量，以应对肥胖、2型糖尿病条件下不断增加的胰岛素需求。HANEKLAUS等［8］报道在流感或乙型肝炎感染以及炎症性肠病、2型糖尿病、白血病和淋巴瘤中，miR-223的表达控制被解除，虽然这也可能是疾病本身的结果，但较多研究表明，miR-223在控制炎症防止感染期引起的附带损伤和防止致癌髓系转化方面发挥作用，NF-kb和NLRP3炎症小体是重要的炎症机制中的因子，其可被miR-223抑制，在WAN等［9］研究中发现miR-223靶向NLRP3下调caspase-1、IL-1β和IL-18等炎症或凋亡过程。另有研究发现血清和龈沟液中miR-223和miR-200b的水平在糖尿病患者及合并牙周病患者较健康对照组升高，并与TNF-a正相关，IL-10负相关［10］。
本研究显示，糖尿病神经病变组miR-223水平高于2型糖尿病组。进一步通过多因素Logistic回归相关分析，miR-223对糖尿病周围神经病变的影响独立于病程、年龄及性别之外。ROC曲线分析，应用miR-223预测糖尿病周围神经病变，其敏感度、特异度较高，尤其联合糖尿病病程时可作为诊断糖尿病周围神经病变的标志物。综上所述，2型糖尿病周围神经病变患者血清miR-223升高，与TNF-α正相关，miR-223可能成为诊断早期糖尿病周围神经病变的血清标志物。
