蒋朱秀，江劲，李敏静，陈利芳
卡介苗多糖核酸穴位注射对支气管哮喘患者T细胞亚群及哮喘控制测试评分的影响
蒋朱秀，江劲，李敏静，陈利芳
目的评价卡介苗多糖核酸穴位注射对支气管哮喘患者T细胞亚群及哮喘控制测试评分的影响。方法将40例支气管哮喘患者分为观察组和对照组，各20例，观察组以卡介苗多糖核酸穴位注射，取双侧足三里和定喘穴，每穴注射0.5 ml；对照组行肌肉注射，每次2 ml，两组均隔天治疗1次，14次为1个疗程，连续治疗3个疗程。于治疗前后对患者行哮喘控制测试问卷（ACT）评分以及T细胞亚群检测。结果两组治疗后ACT评分差异有统计学意义（＜0.05）；治疗后观察组患者的CD4+下降、CD8+升高，与对照组差异均有统计学意义（均＜0.05），CD4+CD8+比值差异有统计学意义（＜0.05）。结论夏季卡介苗多糖核酸穴位注射足三里、定喘穴治疗支气管哮喘，可以有效提高哮喘患者的ACT评分，改善机体免疫功能，从而有效减少冬季哮喘的发作。
卡介苗多糖核酸；穴位注射；支气管哮喘；T细胞亚群；哮喘控制测试问卷
支气管哮喘是一种与T淋巴细胞功能失调有关的气道慢性炎症性疾病。哮喘肺组织中T淋巴细胞呈活化状态，且与气道高反应有关。T淋巴细胞是启动、维持和扩大气道炎症的直接因素，并参与哮喘急性发作时的主要病理生理变化。CD4+T细胞根据其分泌的细胞因子可分为Thl和Th2两个功能亚群，目前研究认为Thl/Th2型淋巴细胞数量及功能失衡与支气管哮喘发病密切相关[1]。卡介苗多糖核酸（BCG-PSN）作为非特异性免疫调节剂，采用肌肉注射来防治支气管哮喘已在临床应用多年。笔者在夏季采用BCG-PSN穴位注射治疗支气管哮喘患者，观察其对患者免疫功能及冬春季发病情况的影响。现报道如下。
1 资料与方法
1.1 纳入及排除标准支气管哮喘诊断及分期标准参照文献[2]；病情处于非急性发作期，年龄14～70岁，自愿加入本研究并签署知情同意书。排除合并严重心、肝、肾相关的内科疾病或严重免疫相关性疾病；精神障碍、严重皮肤病和凝血功能异常者。
1.2 一般资料收集2013年7—9月浙江中医药大学附属第二医院、浙江中医药大学附属第三医院呼吸科与针灸科门诊的支气管哮喘患者40例，采用随机数字表法分为观察组和对照组，各20例。观察组男8例，女12例；年龄15～70岁，平均（50.3±16.1）岁；病程3～25年，平均（11.7±9.9）年。对照组男10例，女10例；年龄16～68岁，平均（53.6±11.7）岁；病程4～23年，平均（9.55±6.69）年。两组患者一般资料差异无统计学意义（＞0.05）。
1.3 方法所有患者在哮喘肺急性发作期给予布地奈德福莫特罗（阿斯利康公司生产）160/4.5 g，2次/d，每次1吸，作为基础用药，一旦有急性加重，必要时允许患者使用2受体激动剂（沙丁胺醇气雾剂，每喷100 g，2喷/次，3次/d或4次/d）缓解症状，也可以根据医嘱选择药物，记录所用药物名称，用法，服用时间。若患者症状仍不能缓解需入院治疗者，长期使用糖皮质激素进行治疗者与入院治疗可能影响结果者，将该病例剔除。
观察组穴位注射双侧足三里穴和定喘穴，腧穴定位标准参照文献[3]。具体操作方法：患者坐位，先准确定位，并在双侧足三里和定喘穴处进行常规消毒，一次性注射器抽取BCG-PSN注射液2 ml（浙江万马药业有限公司生产，规格：0.35mg/支，国药准字S33020001），分别在上述穴位进行穴位注射，每穴0.5ml，操作时快速刺入皮下，行捻转提插手法促使患者得气，进针深度根据患者体型胖瘦在5～10 mm，患者产生酸胀感后缓慢推注药液0.5 ml。隔天治疗1次，14次为1个疗程，共3个疗程。
对照组一次性注射器抽取BCG-PSN注射液2ml，进行常规肌肉注射。隔天治疗1次，14次为1个疗程，共3个疗程。
1.4 观察指标哮喘控制测试问卷（ACT）评分参照文献[4]进行，治疗前及在接受治疗的当年12月份对两组患者进行ACT评分。T细胞亚群的测定：清晨空腹抽取2ml静脉血抗凝，分离血清，置－20℃冰箱保存待测，采用全血直标法流式细胞术检测T细胞亚群，分析CD4+、CD8+细胞百分率，并计算CD4+/ CD8+值。试剂盒购自苏州卡尔文生物科技有限公司。
1.5 统计方法采用SPSS 15.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差表示，采用检验；计数资料以率表示，采用2检验。＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组患者治疗前后ACT评分比较
2.2 两组患者治疗前后外周血T细胞亚群比较治疗前观察组和对照组CD4+、CD8+及CD4+/CD8+比值差异均无统计学意义（≤0.606，＞0.05）；治疗后两组患者均出现CD4+下降、CD8+升高及CD4+/CD8+比值下降，与治疗前比较差异均有统计学意义（≥3.151，＜0.05），治疗后观察组患者的CD4+下降、CD8+升高，与对照组差异有统计学意义（=2.311、2.641，＜0.05），CD4+CD8+比值差异有统计学意义（=3.423，＜0.05）。见表2。
2.3 不良反应试验过程中观察组和对照组各1例在BCG-PSN局部注射处存在轻微发红、肿胀，但均在24 h内消退；局部注射后有时会有少量出血，经长时间按压后可以止血；未见晕针患者；部分患者自觉注射过程中有疼痛感，但可以忍受；无严重不良反应发生。
3 讨论
外周血中T细胞亚群及比值是反映机体免疫调节平衡状况的重要指标，也是疾病严重程度和预后的重要标志之一[5]。T细胞在机体细胞免疫应答中起重要调节作用，依据表型和功能特性分为不同的类型及亚群，各亚群淋巴细胞的表型、生物学特征及其在免疫应答中所起的作用各不相同。CD4+T细胞具有辅助T、B淋巴细胞发生应答的功能；CD8+T细胞对非已抗原诱发的免疫应答具有抑制作用。T淋巴细胞亚群紊乱，辅助T细胞（CD4+）水平明显降低，抑制T细胞（CD8+）水平明显升高，CD4+/CD8+比值失调，最终导致IgE升高和气道高反应性而诱导哮喘发作[6]。另外CD4+/CD8+比值一定程度上可直接了解机体细胞免疫功能情况，
所以检测T淋巴细胞亚群可以更深刻的了解机体免疫功能。本研究显示，经卡介苗多糖核酸穴位注射后患者的CD4+下降，CD8+升高，CD4+/CD8+比值下降，且观察组优于对照组，从而推测其作用机制可能通过免疫调节增强哮喘患者Th1细胞功能，抑制其亢进的Th2反应，从而一定程度上调整Thl/Th2细胞失衡，改善机体免疫功能，减少哮喘发作次数、减轻哮喘发作程度，控制哮喘的发生。
表1 两组患者治疗前后ACT评分比较
表2 两组治疗前后CD4+、CD8+及CD4+CD8+比值的比较
BCG-PSN是卡介苗制剂中的一种，是卡介苗菌体成分提取物。实验研究发现，BCG-PSN有很强的非特异性免疫刺激作用，能诱导机体产生TH1类型免疫反应，表现为促进TH细胞向TH1型细胞分化，并且活化TH1细胞、巨噬细胞及单核细胞，显着增加细胞因子干扰素-（IFN-）、白细胞介素12（IL-12）等的分泌，阻断IgE的合成，促使肺泡灌洗液中IL-4、IL-5等TH2型细胞因子的水平降低，降低气道高反应[7]。临床研究也发现卡介苗制剂能有效调节机体免疫功能，对支气管哮喘患者采用卡介苗治疗，可以诱导机体产生TH1类免疫反应，从而降低气道高反应[8]。
支气管哮喘祖国医学称之为“哮证”、“喘证”。肺为气之主，肾为气之根。发病机理不外乎肺、脾、肾虚损；脾为生痰之源，肺为贮痰之器；内有伏痰，复感外邪所致。冬病夏治，选择三伏天刺激穴位易激发经气，加上选用有增强免疫功能的BCG-PSN穴位注射，在药物和穴位的双重刺激下更能发挥调节阴阳、补肾纳气、宣肺平喘、健脾化痰的综合效能。本研究证实，在夏季开展BCG-PSN穴位注射治疗支气管哮喘，可以明显减少冬季节的哮喘发作次数，提高哮喘控制水平，改善哮喘患者生活质量。
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10.3969/j.issn.1671-0800.2014.12.021
R562.2+5
A
1671-0800(2014)12-1499-03
蔡宛如名老中医传承工作室建设经费资助项目（GZS2012012）；浙江省中医药管理局适宜技术项目（2010zs002）
310005 杭州，浙江中医药大学附属第二医院（蒋朱秀、江劲、李敏静）；浙江中医药大学附属第三医院（陈利芳)
蒋朱秀，Email：5792673@qq.com
