宣世海，周玉贵，周 洁，王 敏，崔亚林，邵 柏，王惠民，褚少朋

(1.南通大学附属东台医院检验科，江苏 东台 224200;2.南通大学附属医院检验医学中心，江苏 南通 226001)

幽门螺杆菌(helicobacter pylori，HP)是慢性胃炎、消化道溃疡、胃癌和胃黏膜相关组织淋巴瘤(MALT)的主要致病因子之一，近年来又发现HP与许多胃肠道外疾病密切相关[1]。目前质子泵抑制剂加抗生素成为根除HP的最佳治疗方案。然而，随着抗生素的广泛使用，HP耐药菌株也日益增加。因此，了解HP的耐药性成为根除H P的关键。本文对江苏中部沿海地区的部分胃病患者进行了HP的分离培养和药物敏感性试验，旨在调查本地区HP对6种常用抗生素的耐药性，为临床合理用药提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 胃黏膜活检标本 随机选取2008年1月至2009年3月在南通大学附属东台医院和南通大学附属医院就诊的各种胃病患者180例，其中男92例，女88例，年龄24～65岁，平均48.5岁，其中慢性胃炎患者60例，糜烂性胃炎患者36例，胃溃疡患者72例，胃癌患者12例。

1.1.2 培养基、组织运送液和菌种保存液 HP分离培养基:哥仑比亚琼脂基础(columbia agar base，CAB)加 7% 无菌脱纤维羊血，并加入选择性抑制剂(万古霉素5.0 mg/L、头孢磺啶2.5 mg/L、甲胺苄胺嘧啶2.5 mg/L、两性霉素2.5 mg/L，OXOID公司产品);药物敏感性试验培养基:Mueller-Hinton琼脂基础(M-H)加入7%无菌脱纤维羊血;组织运送液为20%无菌葡萄糖盐水;菌种保存液为30%布氏肉汤。

1.1.3 微需氧袋 含 5%O2、10%CO2、85%N2的微需氧产气袋，为法国梅里埃生物公司产品。

1.1.4 E-test纸条 瑞典AB Biodisk公司产品。

1.1.5 密封培养罐 GENEbox jar 2.5L为法国梅里埃生物公司产品。

1.2 方法

1.2.1 HP分离培养和鉴定 所有患者均在内镜下钳取病变胃黏膜一块，立即置20%葡萄糖运送液中，2 h内无菌条件下将组织各面反复涂抹在哥伦比亚培养基的表面，将培养基置于密封培养罐中。快速将微需氧产气袋放入培养罐并将培养罐置于35℃培养72～120 h后，培养基上可见无色透明针尖样小菌落。挑取菌落涂片进行革兰染色后镜检，可见弧状样革兰阴性杆菌，尿素酶、氧化酶、触酶试验结果均阳性者判断为HP。

1.2.2 药物敏感试验 采用 E-test法，收集培养48～72 h的新鲜纯培养HP菌株于无菌生理盐水中，将其浓度调至2.0麦氏浊度(含1×107～1×108CFU/m L)，吸取 100μL调制好的菌液，滴加至90 cm含7%绵羊红细胞的M-H平皿上，用 L棒均匀涂开，5 min后贴上2条 E-test试条，35℃微需氧盒中培养72 h后，读取细菌MIC值。判断标准:克拉霉素大于1 μg/m L、阿莫西林 MIC＞8μg/m L、庆大霉素大于8μg/m L、复方新诺明大于8μg/m L、头孢噻肟大于64μg/m L、甲硝唑 MIC＞32μg/m L为耐药[2-3]，以标准菌株 ATCC 43504作为质控菌株。

2 结 果

2.1 胃病患者胃黏膜HP培养结果 180例患者胃黏膜共培养分离出H P 88株，总培养阳性率为48.9%。培养结果见表1。

2.2 88株 HP的6种抗生素体外药物敏感性试验(E-test法)结果 见表2。

表1 180例胃病患者胃黏膜HP培养结果

表2 88株HP对6种抗生素体外药物敏感性试验结果[n(%)]

3 讨 论

HP的全球感染率已达50%，而且发展中国家感染率稍高，中国也是一个 HP感染率较高的国家，感染率为42%～90%[4]。细菌药物敏感性试验是判断细菌是否耐药的金标准，能为临床医生在HP的根除治疗过程中合理选用抗生素提供依据[5]。本实验结果显示本地区HP总感染率为48.9%，且各病种的感染率均低于其他地区，说明江苏中部沿海地区的HP感染率在国内处于较低水平。

本实验结果显示甲硝唑的耐药率高达93.2%，耐药率高于北京、重庆、上海地区[6-9]，其原因可能和本地区曾过多使用硝基咪唑类药物有关，因此，本地区在进行HP根除治疗时应避免选用甲硝唑。对庆大霉素、复方新若明、头孢噻肟也显示出较高的耐药率，应谨慎选用。本实验发现HP对阿莫西林的耐药率最低，低于上海、浙江、西安地区[9-11]。原因可能与本地区阿莫西林使用频率不高有关。因此，阿莫西林可作为本地区根除HP的一线抗生素。

目前，临床上主要采用以克拉霉素为首的三联疗法根除治疗HP，然而HP对克拉霉素耐药率正逐年上升。北京地区的HP耐药率从 1999～2000年的 10.0%上升到2001～2002年的18.3%[12]。有文献报道广泛使用大环内酯类抗生素是导致其对克拉霉素耐药率上升的主要原因[13]。本实验结果显示HP对克拉霉素的耐药率为25.0%，明显低于西安、北京和浙江地区，这种差异可能与各地区大环内酯类药物使用频率有关。综上所述，在本地区根除HP可选用阿莫西林和克拉霉素作为一线抗生素，因甲硝唑、头孢噻肟、复方新诺明、庆大霉素耐药率较高不宜选用。文献报道克拉霉素治疗HP野生型菌株的根除率达85%，HP耐药菌株的根除率仅为40%，而对克拉霉素耐药是根除HP失败的首要原因[14]。因此，HP耐药性的检测对指导临床医生合理选用抗生素，有着十分重要的意义。

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